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高產(chǎn)纖維分解酶木霉和黑曲霉誘變選育及發(fā)酵條件優(yōu)化

發(fā)布時(shí)間:2020-12-21 20:38
  我國(guó)能量飼料存在較大缺口,2016年玉米全年進(jìn)口量達(dá)到了330萬(wàn)t。秸稈產(chǎn)量豐富,蘊(yùn)含大量潛在能值。但秸稈纖維含量高,不易被動(dòng)物消化利用,若經(jīng)科學(xué)處理可作為能量資源的補(bǔ)充。1.通過(guò)對(duì)7株木霉菌株,利用DNS酶活測(cè)定和玉米秸稈剛果紅培養(yǎng)基法,篩選出高產(chǎn)纖維分解酶的菌株,為其高效篩選提供參考。2.對(duì)篩選出的木霉菌株和黑曲霉(實(shí)驗(yàn)室保藏菌)進(jìn)行誘變選育,(紫外、硫酸二乙酯、紫外-硫酸二乙酯復(fù)合誘變)獲得產(chǎn)纖維分解酶高的突變菌,并對(duì)其產(chǎn)酶發(fā)酵條件和水解秸稈能力進(jìn)行研究。(1)木霉和黑曲霉經(jīng)紫外、硫酸二乙酯、紫外-硫酸二乙酯復(fù)合誘變篩選出了一株突變菌康氏木霉UH-1和黑曲霉X1U4-1。與原菌相比,康氏木霉UH-1木聚糖酶提高了42.7%,纖維素酶提高了78.5%。黑曲霉X1U4-1濾紙酶提高了66.7%。(2)康氏木霉UH-1最適的固態(tài)發(fā)酵條件為硫酸銨添加量2%、接種量1.1 ml、含水量67%、發(fā)酵時(shí)間84 h,在此條件下濾紙酶活達(dá)到0.86 U/g、纖維素酶活99.81 U/g、木聚糖酶活1150.32 U/g。黑曲霉X1U4-1最適固態(tài)發(fā)酵條件為發(fā)酵時(shí)間72 h、玉米芯:麩皮=3:7、接... 

【文章來(lái)源】:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】:75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

高產(chǎn)纖維分解酶木霉和黑曲霉誘變選育及發(fā)酵條件優(yōu)化


木霉菌產(chǎn)透明圈情況

木霉,萌發(fā)率,復(fù)合誘變,紫外


產(chǎn)纖維分解酶菌株初篩和復(fù)篩:在最佳致死率條件下,經(jīng)多輪紫外突變菌株長(zhǎng)得快,菌絲短、產(chǎn)孢子晚、透明圈大的菌落用 0.9%的后涂到傳代培養(yǎng)基上,培養(yǎng) 4-6 天長(zhǎng)出單菌落后收集保藏并稀釋成體發(fā)酵培養(yǎng)基上進(jìn)行發(fā)酵測(cè)定其纖維素酶活、木聚糖酶活和濾紙酶小確定高產(chǎn)纖維分解菌株。變菌紫外、化學(xué)交叉復(fù)合誘變菌紫外、化學(xué)交叉復(fù)合誘變步驟同上述一致,挑選出最優(yōu)突變菌與分析子適宜萌發(fā)時(shí)間

致死率,木霉,化學(xué)誘變,紫外誘變


圖 4 木霉不同化學(xué)反應(yīng)時(shí)間下的致死率Fig. 4 Mortality of trichoderma under different chemical reaction tim霉在化學(xué)誘變不同反應(yīng)時(shí)間孢子致死率,從圖 4 中看出康氏度為 20%時(shí)反應(yīng) 30 min 致死率達(dá)到了 85%以上,綠色木霉 13%時(shí)反應(yīng) 30 min 致死率達(dá)到了 85%以上。因此康氏木霉 13006 佳化學(xué)誘變反應(yīng)時(shí)間為 30 min。菌初篩與復(fù)篩霉 13006 和綠色木霉 13010 經(jīng)多輪紫外誘變和化學(xué)誘變處理,養(yǎng)基上培養(yǎng) 7d 后透明圈直徑較大的突變株,紫外誘變和化學(xué)見(jiàn)圖 1-5,初篩突變菌株在固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中各個(gè)酶活,見(jiàn)表

【參考文獻(xiàn)】:
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