脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）,又稱嘔吐毒素,是最常見的一類鐮刀菌毒素,廣泛存在于燕麥、玉米、小麥、大麥等谷類作物中。DON化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,在高溫、強(qiáng)酸下也依然能保留毒性,其污染的食物嚴(yán)重威脅人類與動(dòng)物的健康。高劑量的DON會(huì)引起機(jī)體發(fā)病率與死亡率的升高;低劑量的DON會(huì)使其腸道健康受損,免疫機(jī)能下降。豬對(duì)DON污染極為敏感,即使是極低量的DON,豬在采食后也會(huì)出現(xiàn)不良反應(yīng)、厭食等癥狀。為了更好地理解DON細(xì)胞毒性的分子機(jī)理,本研究以豬小腸上皮細(xì)胞系IPEC-J2為模型,首先比較了不同濃度DON培養(yǎng)不同時(shí)間之后IPEC-J2細(xì)胞的活性,選取細(xì)胞活性降低明顯的一組,作為DON處理IPEC-J2細(xì)胞適宜樣本進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。其次,利用RRBS和RNA-seq技術(shù)檢測(cè)了 DON處理后IPEC-J2全基因組DNA甲基化和基因表達(dá)的變化。最后,整合分析DNA甲基化和基因表達(dá)變化,篩選關(guān)鍵基因。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.通過(guò)體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),比較不同濃度（0、300、500、1000、2000、2500和3000ng/mL）DON處理的IPEC-J2細(xì)胞在不同培養(yǎng)時(shí)間（24、48、72 h）下細(xì)胞活性的變化情況。... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１?ＤＯＮ處理對(duì)ＩＰＥＯＪ２細(xì)胞生長(zhǎng)活性的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＤＯＮ?ｏｎ?ＩＰＥＣ－Ｊ２?ｃｅｌｌｓ．??

ＮａｎｏＤｒｏｐ核酸分析儀對(duì)ＩＰＥＣ－Ｊ２細(xì)胞總ＲＮＡ濃度和純度進(jìn)行測(cè)量，ＯＤ２６０／ＯＤ２８０均??在１．９左右。通過(guò)瓊脂糖凝膠（１．０％濃度）電泳進(jìn)行ＲＮＡ質(zhì)量檢測(cè)，ＲＮＡ樣品呈現(xiàn)??２８Ｓ、１８Ｓ和５Ｓ共３條清晰且明亮的條帶（圖３．１），說(shuō)明總ＲＮＡ提取質(zhì)量較高，可用于??后續(xù)實(shí)驗(yàn)。??ＨＨＵＢｍ??圖３．１?ＲＮＡ凝膠電泳檢測(cè)圖??Ｆｉｇｕｒｅ．３．１?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＲＮＡ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｂｙ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??２．２測(cè)序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及質(zhì)控??對(duì)ＤＯＮ處理組（Ｔｌ、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４）和對(duì)照組ＩＰＥＣ－Ｊ２細(xì)胞樣品（ＴＣＩ、ＴＣ２、ＴＣ３、??ＴＣ４）進(jìn)行ＲＮＡ－ｓｅｑ轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，共獲得約６０９．３?ｍｉｌｌｉｏｎ原始測(cè)序ｒｅａｄｓ，質(zhì)控后得到５９７．２??ｍｉｌｌｉｏｎ?ｃｌｅａｎ?ｒｅａｄｓ，平均每個(gè)樣本?７４．６?ｍｉｌｌｉｏｎ?ｃｌｅａｎ?ｒｅａｄｓ?（表?３．３）?〇??表３．３所有樣本的ＲＮＡ－ｓｅｑ數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)??Ｔａｂｌｅ?３．３?Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ?ｆｏｒ?ＲＮＡ－ｓｅｑ?ｄａｔａ?ｏｆ?ａｌｌ?ｓａｍｐｌｅｓ??Ｃｌｅａｎ?Ｃｌｅａｎ?ｂａｓｅｓ?Ｑ２０?Ｑ３０??Ｇｒｏｕｐ?Ｓａｍｐｌｅ?ｎａｍｅ?Ｒａｗ?ｒｅａｄｓ??ｒｅａｄｓ?（Ｇ）?（?％）?（?％）??Ｔ１?７７９２２０１４?７６４２２９０４?１１．４６?９５．６９?８９．４２??Ｔ２?７４２７７３５６?７２９３５６３２?１０．９４?９６．５１?９１．０９?

利用ＧＳＥＡ軟件分析與ＤＯＮ處理相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程和信號(hào)通路。結(jié)果表明，與纈氨??酸、亮氨酸、異亮氨酸的降解、細(xì)胞色素Ｐ４５０介導(dǎo)的藥物代謝、；谷胱甘肽的代謝等通路??顯著相關(guān)的基因在ＤＯＮ處理組ＩＰＥＣ－Ｊ２細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)（圖３．４，附表３．３）。表達(dá)上調(diào)的??基因顯著富集在核糖體合成、ｍＲＮＡ監(jiān)測(cè)通路、ＲＮＡ轉(zhuǎn)運(yùn)、ＴＮＦ信號(hào)通路等通路中（圖??３．４，附表?３．３）。??Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ｐｌｏｔ?ＶＡＬＩＮＥ，?Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ｐｌｏｔ?ＤＲＵＣ．ＭＥＴＡ８０ＵＳＭ．－?Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ｐｌｏｔ?ＣＬＵＴＡＴＨｆＯＮＥ?ＭＥＴＡＢＯＬＩＳＭ??．ＬＥＵＣＩＮＥ＿ＡＮＤＪＳＯＵＥＵＣＩＮＥ＿ＤＥＣＲＡＤＡＴＩＯＮ?．ＣＹＴＯＣＨＲＯＭＥ?Ｐ４５０??ＮＥＳ－－１．９６?／?ＮＨＳ－－Ｊ．８２?ｉ?ｇ?＾?ＮＥＳ－－１．９１?ｔ??Ｕ?ＦＤＲｑ＜０．００１?Ｊ?ｇ?ＦＯＲｑ＜０．００１＾?｜－＊＊？?ＦＯＲｑ＜０．００１１??Ｉ?ｌ?ｊ?丨至?Ｊ??＂?ｉ?ｉ?ｍ?ｉｓ?ｉｎ?ｒ?１丨丨１丨丨丨＿?＿?］?ｉ［ｍｉｉｒ??Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ｐｌｏｔ?Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ｐｌｏｔ?ＭＲＮＡ？５ＵＲＶＥＩＬＬＡＮＣＥ．ＰＡＴＨＷＡＹ?Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ｐｌｏｔ?ＴＮＦ．ＳＩＣＮＡＬＩＮＧ?ＰＡＴＨＷＡＹ??ＲＩＥＯＳＯＭＥ．ＢＩＯＣＥＮＥＳＩＳ．ＩＮ．ＥＵＫＡＲＹＯＴＥＳ?４５；??ＮＥＳ？２．０６?＃

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：2927156