豬白細(xì)胞抗原（swine leukocyte antigen,SLA）在豬免疫系統(tǒng)中起遞呈抗原作用,對其展開研究可為豬相關(guān)傳染病的預(yù)防提供依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn),托佩克豬SLA-1-632-TPK基因編碼序列發(fā)生堿基缺失（距離SLA-1-632-TPK基因5′端632bp處丟失1個堿基"C"）,導(dǎo)致移碼突變。為矯正SLA-1-632-TPK基因,設(shè)計2對矯正引物,以原重組質(zhì)粒SLA-1-632-TPK/pMD18-T為模板,利用剪切重疊延伸PCR（splicing overlap extention PCR,SOEPCR）技術(shù)分別擴(kuò)增SLA-1-632-TPK 5′和3′端,之后進(jìn)行拼接,最后擴(kuò)增全序列從而矯正目的基因,并進(jìn)一步連接pMD19-T Simple載體,通過單菌落PCR篩選陽性克隆并測序,并通過GENETYX version 9.0軟件對所測序列進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,SOE-PCR成功擴(kuò)增得到5′和3′端片段,大小約為650和590bp,與理論設(shè)計值大�。�648和585bp）接近,經(jīng)過拼接以后,得到全長約1 200bp,與理論設(shè)計值1 223bp接近。菌落PCR結(jié)果顯示,矯正基因成功... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2017年06期 第1645-1651頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

圖２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的ＰＣＲ拼接結(jié)果Ｆｉｇ．２ＴｈｅｓｐｌｉｃｉｎｇＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ

中國畜牧獸醫(yī)４４卷Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１，ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因３′端ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物；２，ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因５′端ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１，Ｔｈｅ３′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａ－ｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ；２，Ｔｈｅ５′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ圖１ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因３′和５′端擴(kuò)增結(jié)果Ｆｉｇ．１Ｔｈｅ３′ｅｎｄａｎｄ５′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ２．２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因５′和３′端拼接經(jīng)拼接和ＰＣＲ擴(kuò)增后，１．０％瓊脂糖凝膠電泳檢測到一條約１２００ｂｐ的條帶，與理論設(shè)計值１２２３ｂｐ大小相符（圖２）。圖２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的ＰＣＲ拼接結(jié)果Ｆｉｇ．２ＴｈｅｓｐｌｉｃｉｎｇＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ２．３單菌落ＰＣＲ檢測托佩克豬ＳＬＡ－１－ＴＰＫ插入ｐＭＤ１９－ＴＳｉｍｐｌｅ載體經(jīng)單菌落ＰＣＲ擴(kuò)增后，１．０％瓊脂糖電泳檢測到一條約１２００ｂｐ的條帶，與理論設(shè)計值１２２３ｂｐ相符（圖３）。Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１～４，單菌落ＰＣＲ篩選陽性克�。�，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１－４，ＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓｂｙｃｏｌｏｎｙＰＣＲ圖３單

６期翟曉鑫等：托佩克豬ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的矯正及重組質(zhì)粒ＳＬＡ－１－ＴＰＫ／ｐＭＤ１９－Ｔ的構(gòu)建圖４序列分析托佩克豬ＳＬＡ－１－ＴＰＫ基因矯正情況Ｆｉｇ．４ＳｅｑｕｅｎｃｅｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎｏｆＳＬＡ－１－ＴＰＫｇｅｎｅｆｒｏｍＴｏＰｉｇｓｐｉｇ１６４９

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2910179