本試驗(yàn)以豬小腸上皮細(xì)胞為模型,進(jìn)行體外培養(yǎng)試驗(yàn),進(jìn)一步探索大豆抗原蛋白引起仔豬腸道致敏損傷的作用機(jī)制。用不同濃度（0、1、5、10mg/mL）的大豆球蛋白（11S）和β-伴大豆球蛋白（7S）對豬小腸上皮細(xì)胞（IPEC-J2）進(jìn)行刺激,運(yùn)用倒置顯微鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化;采用CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞的存活率;運(yùn)用蛋白免疫印跡技術(shù)（WB）和熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測MAPKs和NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的相關(guān)蛋白表達(dá)和相關(guān)基因mRNA的表達(dá)量。利用ELISA試劑盒檢測細(xì)胞上清液中5-羥色胺（5-HT）、NO、IL-6、IL-10和二胺氧化酶（DAO）含量。結(jié)果顯示:1.細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:（i）對照組細(xì)胞呈不規(guī)則多邊形,輪廓清晰且細(xì)胞貼壁生長。隨著11S或7S濃度的增加,細(xì)胞逐漸變圓,輪廓不清晰的細(xì)胞逐漸增多,細(xì)胞總數(shù)量降低,脫落細(xì)胞數(shù)量逐漸增加;細(xì)胞核趨于固縮,核內(nèi)染色質(zhì)逐漸濃縮凝集于核膜內(nèi)側(cè)至消失,凋亡小體出現(xiàn)。（ii）當(dāng)11S或7S為5mg/mL時(shí),添加PDTC、L-NAME、SP600125和SB202190抑制劑后,光鏡下,細(xì)胞輪廓變清晰,大部分細(xì)胞為不規(guī)則多邊形,貼... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

1S對細(xì)胞生長狀態(tài)的影響（400×）

圖 2-2 7S 對細(xì)胞生長狀態(tài)的影響（400×）Fig. 2-2 Effect of 7S on growth state in IPEC-J2 (400×)注：B1-B8 分別表示 0、1、5、10mg/mL 7S、5mg/mL 7S+PDTC、5mg/mL 7S+L-NAME、5mg/mL 7S+SP600125、5mg/mL 7S+SB202190Note: B1-B8 represent 0、1、5、10mg/mL 7S、5mg/mL 7S+PDTC、5mg/mL 7S+L-NAME、5mg/mL 7S+SP600125、5mg/mL 7S+SB202190,respectively（1）對照組細(xì)胞多為不規(guī)則多邊形，輪廓清晰，貼壁狀態(tài)良好。當(dāng) 7S 濃度為1mg/mL 時(shí)，細(xì)胞總數(shù)量開始減少，但有少部分細(xì)胞增殖，輪廓不清晰的細(xì)胞較少，有少部分細(xì)胞脫落。當(dāng) 7S 濃度為 5mg/mL 時(shí)，細(xì)胞總數(shù)量減少 50%，極少細(xì)胞增殖，輪廓不清晰的細(xì)胞較多，脫落的細(xì)胞較多。當(dāng) 7S 濃度為 10mg/mL 時(shí)，細(xì)胞總數(shù)量減少近 85%，細(xì)胞變圓，脫落的細(xì)胞數(shù)多。（2）當(dāng) 7S 濃度為 5mg/mL 時(shí)，添加 PDTC、L-NAME、SP600125、SB202190抑制劑組，細(xì)胞多呈不規(guī)則多邊形，極少部分細(xì)胞為圓形，輪廓不清晰的細(xì)胞較少，細(xì)胞總數(shù)量較 5mg/mL 組多，有少數(shù)細(xì)胞增殖，極少數(shù)細(xì)胞貼壁不完全，脫落細(xì)胞極少。

圖 2-3 11S 對細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響Fig. 2-3 Effect of 11S on ultrastructure in IPEC-J2表示 0、1、5、10mg/mL 11S、5mg/mL 11S+PDTC、5mg/mL 11S+L-NAME、5mg/mL 11S+SP600125、5mg/放大倍數(shù)：(A1-A8)：5000×； 對細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化


本文編號：2907685