肝片形吸蟲病（Fascioliasis hepatica）是一種全球性分布的寄生蟲疾病。該病是造成反芻動物（如牛羊）發(fā)病和死亡的主要原因,季節(jié)性發(fā)病,對反芻動物危害嚴重。常規(guī)的糞便檢查方法只能檢出發(fā)育成熟的蟲體排出的蟲卵,不能起到早期診斷的作用,建立早期診斷方法早期準確診斷是有效的控制該病的發(fā)生和蔓延的重要手段。因此,本試驗成功克隆了肝片形吸蟲組織蛋白酶L（Fh Cat L）、肝片形吸蟲谷胱甘肽S轉移酶（Fh GST）和肝片形吸蟲絲氨酸蛋白酶抑制劑（Fh SPI）基因,并制備成重組蛋白,建立間接ELISA診斷方法,為肝片形吸蟲病的有效防治奠定基礎。本試驗根據GenBank上發(fā)表的肝片形吸蟲組織蛋白酶L（Fh Cat L）、肝片形吸蟲谷胱甘肽S轉移酶（Fh GST）和肝片形吸蟲絲氨酸蛋白酶（Fh SPI）基因序列,設計合成了引物,提取肝片形吸蟲成蟲總RNA,通過PCR方法擴增獲得目的基因。將獲得的目的基因與克隆載體pMD18-T連接,經雙酶切、PCR及測序鑒定正確后,將鑒定正確目的片段與表達載體pET-30a連接,經雙酶切測序鑒定正確后,用IPTG對目的蛋白進行誘導表達。SDS-PAGE... 

【文章來源】：東北農業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

質粒pMD18-T-FhCatL測序結果

圖 3-4 質粒 pMD18-T-GST 測序結果Fig 3-4 Plasmid pMD18-T-GST sequencing results粒 pMD18-T-Fh SPI 測序結果的 SPI 基因測序結果與 GenBank 中公布的肝片形吸蟲 SPI 基因序列（A44.1）進行比對。結果如圖 3-5 顯示：氨基酸序列同源性為 99.60%。圖 3-5 質粒 pMD18-T-SPI 測序結果Fig 3-5 Plasmid pMD18-T-SPI sequencing resultsat L、Fh GST 和 Fh SPI 基因表達載體的鑒定

圖 3-5 質粒 pMD18-T-SPI 測序結果Fig 3-5 Plasmid pMD18-T-SPI sequencing resultsL、Fh GST 和 Fh SPI 基因表達載體的鑒定 L、Fh GST 和 Fh SPI 重組表達載體的雙酶切鑒定體經 BamHI 和 HindIII 雙酶切，結果切出大小為 5000bp 的表達載 和 1200bp 兩個目的條帶，與預期結果相符，見圖 3-6。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]小鼠模型感染大片形吸蟲研究平臺初探[D]. 全琛宇.廣西大學 2015
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本文編號：2906304