本文通過篩選出具有良好抑菌作用的中藥,同時(shí)這些中藥也有一定的增加抗菌藥藥效的作用,這些中藥作為后期組方的候選藥材,確定榆梔散組方(由地榆、梔子和大黃組成),研究榆梔散抑菌作用與臨床應(yīng)用效果,為合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。1.選用CLSI推薦的腸桿菌科常用的幾大類抗菌藥物對臨床分離的16株大腸桿菌進(jìn)行初步的MIC測定,通過表型做出初步的篩選,進(jìn)而根據(jù)CLSI所推薦的初篩和確證試驗(yàn)檢測耐藥菌株是否產(chǎn)ESBLs,在獲得產(chǎn)ESBLs的基礎(chǔ)上通過PCR對產(chǎn)ESBLs的常見耐藥基因進(jìn)行檢測,進(jìn)而確定分離的耐藥大腸桿菌所含有的ESBLs的具體的基因型。結(jié)果表明,16株分離株都含有耐藥基因,含兩種耐藥基因7株,含三種耐藥基因3株,分離菌株均產(chǎn)ESBLs,對頭孢噻肟鈉、頭孢曲松鈉、頭孢他啶、阿莫西林等耐藥率高達(dá)100%,對其他抗菌藥也有不同程度的耐藥。2.采用12種中藥的亞抑菌濃度與大腸桿菌耐藥的抗菌藥物聯(lián)合對所分離的耐藥大腸桿菌進(jìn)行傳代,測定候選中藥對傳代的耐藥大腸桿菌菌所耐受的抗菌藥物MIC值的影響,優(yōu)選出具有抑制耐藥大腸桿菌作用的中藥,確定由地榆、梔子、大黃組成的榆梔散,進(jìn)而采用上述方法測定榆梔散對傳代耐藥菌MIC值的影響。結(jié)果表明榆梔散可增強(qiáng)青霉素類、頭孢菌素類、氟喹諾酮類等抗菌藥的抑菌作用。3.選取健康10日齡肉雞進(jìn)行耐藥菌株的體內(nèi)攻毒試驗(yàn),采用榆梔散水煮液、白頭翁散水煮液分別治療。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,高劑量和中劑量榆梔散對大腸桿菌人工感染雞具有很好的治療效果,其治愈率分別達(dá)到了90.0%和83.3%,優(yōu)于與之相對應(yīng)的白頭翁散,其治愈率僅為73.3%,表明榆梔散治療雞大腸桿菌感染的效果要優(yōu)于傳統(tǒng)的白頭翁散。4.根據(jù)菌體細(xì)胞壁超微結(jié)構(gòu)、菌液中AKP含量、胞外可溶性蛋白含量、菌體總蛋白以及細(xì)菌DNA等五個(gè)指標(biāo),分析榆梔散對產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的抑菌作用。結(jié)果表明,榆梔散主要是破壞了細(xì)菌結(jié)構(gòu)的完整性,細(xì)胞壁、細(xì)胞膜通透性增加,使得菌液中AKP含量、胞外可溶性蛋白含量增加,雖然對菌體總蛋白含量沒有明顯影響,但抑制了某些菌體蛋白以及DNA的合成,從而影響菌體的正常代謝,而發(fā)揮抑菌作用。5.應(yīng)用榆梔散水煎液對5個(gè)品種共1058只大腸桿菌病病雞進(jìn)行了臨床效果試驗(yàn),結(jié)果表明榆梔散水煎液對耐藥菌株引起的雞大腸桿菌病具有較好的療效,平均治愈率為91.6%,有效率達(dá)89.3%。相比白頭翁水煮液的治療效果,榆梔散水煮液平均有效率提高了7.9%,平均治愈率提高了6.0%,為在養(yǎng)雞場采用榆梔散治療雞大腸桿菌病提供了理論和技術(shù)支持。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S853.7
【部分圖文】：

PCR擴(kuò)增結(jié)果

57圖4-1 榆梔散對產(chǎn)ESBLs大腸桿菌作用后的透射電鏡圖Fig.4-1 TEM imagine of Yuzhi Powder extract effect on ESBLs-producing E.coli4.3.2 榆梔散對產(chǎn) ESBLs 大腸桿菌胞外 AKP 含量的影響見圖 4-2。不同濃度的水煮液作用 1h 后，AKP 量呈直線上升，3h 后 1/2MIC作用的 AKP 量達(dá)到最大值，隨后趨于平穩(wěn)；MIC 榆梔散水煮液作用約 3h 后菌液中的 AKP 量也達(dá)到最大值，但 AKP 的量要遠(yuǎn)大于 1/2MIC 組。對照組的堿性磷酸酶（AKP）含量無明顯變化，結(jié)果表明，不同濃度的榆梔散水煮液在短時(shí)間內(nèi)可破壞產(chǎn) ESBLs 耐藥大腸桿菌的細(xì)胞壁，進(jìn)而引起細(xì)胞壁通透性的增加，導(dǎo)致堿性磷酸酶（AKP）外滲

對細(xì)胞壁的破壞程度（AKP 的滲出量）與劑量呈依懶性，即隨著藥物濃度的提高，胞外 AKP 的含量逐漸提高，細(xì)胞壁的破壞程度愈強(qiáng)。圖4.2 榆梔散對產(chǎn)ESBLs大腸桿菌胞外AKP活性的影響Fig.4.2 Effects of Yuzhi Powder on extracellular AKP activity in ESBLs-producingE.coli
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2891936