目的:鉤吻具有抗腫瘤、鎮(zhèn)靜等作用,其發(fā)揮藥理作用的主要成份為吲哚類生物堿,在我國(guó)從古至今均有使用鉤吻全草來醫(yī)治各種疾病的報(bào)道。鉤吻素子(Koumine)是鉤吻全草中含量最豐富的生物堿單體。本研究以豬小腸上皮細(xì)胞(IPEC-J2)為研究對(duì)象,構(gòu)建小腸體外細(xì)胞炎癥模型,應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)等方法,探索不同濃度的Koumine在脂多糖(Lipopolysaccharides、LPS)的作用下對(duì)IPEC-J2細(xì)胞的影響,為鉤吻的綜合利用與開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:本研究以IPEC-J2細(xì)胞為研究對(duì)象,用不同濃度的Koumiine(25、50、1100μg/mL)處理24h后,用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活率;;用不同濃度的Konmine作用IPEC-J2細(xì)胞11h之后,加入LPS與細(xì)胞共同作用23 h后,用MTT法檢測(cè)IPEC-J2細(xì)胞的活力;檢測(cè)細(xì)胞中超氧化物歧化酶(Supweoxidedisnmutase,SOD)、過氧化氫酶(Catalase,CAT)的活性和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase,LDH)的含量,q-PCR檢測(cè)細(xì)胞炎癥因子中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)mRNA和腸道機(jī)械屏障中胞質(zhì)緊密粘粘蛋白(Zonulaoccludens-1)、閉合蛋白(Ocdudin)和封閉蛋白(Claudin-1)mRNA的表達(dá)。用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液中炎癥因子TNF-α、IL-6的含量。Western blot檢測(cè)腸道機(jī)械屏障中Zonula occludens-1、Ocdudin和Claudin-1蛋白的表達(dá)。結(jié)果:25、50、10100 g/mL濃度的Koumine可以提高IPEC-J2細(xì)胞的活力;用50 μ g/mL、100 μ g/mL的Koumine預(yù)作用于IPEC-J2 細(xì)胞 1 h之后,Koumine能夠在一定程度上拮抗LPS引發(fā)的IPEC-J2細(xì)胞活率的下降,緩解LPS對(duì)IPEC-J2細(xì)胞形態(tài)的影響;降低細(xì)胞內(nèi)的MDA、LDH的含量;有效的提高CAT、SOD的活性;降低細(xì)胞上清液中炎癥因子TNF-α、IL-6的含量;降低IPEC-J2細(xì)胞中TNF-α,IL-6和IL-1βmRNA的表達(dá);增加ZO-1、Ocdudin和Claudin-1 mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)論:Koumine在一定的濃度范圍對(duì)IPEC-J2細(xì)胞無毒副作用,能提高IPEC-J2細(xì)胞的活力,能夠緩解LPS對(duì)IPEC-J2細(xì)胞活力及形態(tài)的影響;能提高IPEC-J2細(xì)胞的抗炎、抗氧化作用;并且能在一定程度上減少LPS所造成的腸道屏障功能損傷,進(jìn)而維持動(dòng)物腸道正常功能。
【學(xué)位單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S853.7
【部分圖文】：

Koumine對(duì)IPEC-J2細(xì)胞活力的影響

圖 3-2.LPS 對(duì) IPEC-J2 細(xì)胞活力的影響Fig3-2 .Effects of LPS on the viability of IPEC-J2 cells，與空白組比較，LPS 陽性組中，細(xì)胞活力明顯下降增加，IPEC-J2 細(xì)胞活力有明顯提高（P<0.01)。說以減緩 LPS 對(duì) IPEC-J2 細(xì)胞活力的降低。

圖 3-2.LPS 對(duì) IPEC-J2 細(xì)胞活力的影響Fig3-2 .Effects of LPS on the viability of IPEC-J2 cells，與空白組比較，LPS 陽性組中，細(xì)胞活力明顯下降增加，IPEC-J2 細(xì)胞活力有明顯提高（P<0.01)。說以減緩 LPS 對(duì) IPEC-J2 細(xì)胞活力的降低。
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本文編號(hào)：2889570