隨著抗生素的濫用,作為危害嚴(yán)重食源性致病菌之一的大腸桿菌,其耐藥性不斷增強(qiáng),多重耐藥譜逐步變寬。肉雞作為大腸桿菌傳播的主要載體,在屠宰加工過(guò)程中容易通過(guò)食物鏈傳到人體,探究家禽屠宰場(chǎng)加工生產(chǎn)鏈中大腸桿菌的污染狀況,追蹤大腸桿菌污染的主要環(huán)節(jié)顯得尤為重要。本研究以浙江省某大型家禽屠宰場(chǎng)為采樣點(diǎn),檢測(cè)空氣沉降微生物的污染指標(biāo),評(píng)估屠宰場(chǎng)不同區(qū)域的微生物污染水平,以分離獲得的大腸桿菌為主要研究對(duì)象,檢測(cè)毒力基因并評(píng)估其耐藥性,通過(guò)ERIC-PCR分型探究分離株的親緣關(guān)系。(1)本實(shí)驗(yàn)取屠宰場(chǎng)廠(chǎng)房外部和內(nèi)部空氣沉降微生物,檢測(cè)其污染指標(biāo),并通過(guò)16S rRNA V3-V4的Illumina高通量測(cè)序方法分析其菌群結(jié)構(gòu)多樣性。結(jié)果顯示屠宰后八個(gè)車(chē)間的菌落總數(shù)、腸桿菌科、霉菌和酵母數(shù)量均有所增加,宰殺瀝血間菌落總數(shù)達(dá)到最高達(dá)到1100 cfu/皿,浸燙脫羽間腸桿菌科數(shù)達(dá)到最高1500cfu/皿,宰殺瀝血間霉菌、酵母數(shù)量分別最高達(dá)到175 cfu/皿、50cfu/皿。比較屠宰場(chǎng)廠(chǎng)房?jī)?nèi)外部的空氣沉降細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu),從門(mén)的水平上來(lái)看,屠宰場(chǎng)廠(chǎng)內(nèi)和廠(chǎng)外優(yōu)勢(shì)門(mén)相同,均為厚壁菌門(mén)(Firmicute)、放線(xiàn)菌門(mén)(Actinobacteria)和變形菌門(mén)(Proteobacteria)。但從屬的水平上屠宰場(chǎng)廠(chǎng)房外和屠宰場(chǎng)廠(chǎng)內(nèi)優(yōu)勢(shì)屬幾乎都不相同,兩者存在不同屬類(lèi)別的細(xì)菌污染。屠宰場(chǎng)廠(chǎng)房?jī)?nèi)空氣中主要優(yōu)勢(shì)屬葡萄球菌屬(Staphylococcus),埃希氏菌屬(Escherichia),假單胞菌屬(Pseudomonas),而屠宰場(chǎng)廠(chǎng)房外空氣中主要優(yōu)勢(shì)屬是芽孢桿菌屬(Bacillus),(Phycicoccus),考克氏菌屬(Kocuria)。(2)本實(shí)驗(yàn)取屠宰場(chǎng)的存在水體,以及用無(wú)菌紗布擦拭各區(qū)域的地面和器械表面采集微生物進(jìn)行培養(yǎng)后,通過(guò)16S rRNA V3-V4的Illumina高通量測(cè)序方法分析其菌群結(jié)構(gòu)多樣性,并用PCR對(duì)細(xì)菌的9大類(lèi)24種耐藥基因進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,屠宰場(chǎng)不同區(qū)域水體、地面和屠宰器械表面微生物均以變形菌門(mén)(Proteobacteria)、厚壁菌門(mén)(Firmicutes)和放線(xiàn)菌門(mén)(Actinobacteria)為主,其相對(duì)豐度分別為45.18%~87.74%、0.09%~33.46%、3.34%~28.09%;優(yōu)勢(shì)菌屬為不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)、鏈球菌屬(Streptococcus)、嗜冷桿菌屬(Psychrobacter)、水棲菌屬(Enhydrobacter)、皮生球菌屬(Dermacoccus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、黃桿菌屬(Flavobacterium)、乳球菌屬(Tetragenococcus),金黃桿菌屬(Chryseobacterium)和弓形桿菌屬(Arcobacter),約占總類(lèi)群40%。各樣品中共檢測(cè)到21種耐藥基因,其中sulⅠ、sulⅡ、qnrS、blaTEM和aadA1的檢出率為100%,floR、tetA和ereA的檢出率為88.9%以上。(3)本實(shí)驗(yàn)從收集的屠宰場(chǎng)空氣沉降微生物、存在水體、地面、器械表面和冷鮮雞共240個(gè)樣品中分離大腸桿菌,檢測(cè)大腸桿菌的毒力基因并評(píng)估其耐藥性。結(jié)果顯示在預(yù)冷間的預(yù)冷水、外界的干凈屠宰用水、包裝間和冷藏間的空氣中未檢出大腸桿菌,但在其他區(qū)域均有檢測(cè)出大腸桿菌。大腸桿菌耐藥基因檢測(cè)結(jié)果表明,來(lái)源于冷鮮雞表面ESBL型大腸桿菌檢出率最高,對(duì)單環(huán)β內(nèi)酰胺類(lèi)的氨芐西林(62.0%)、磺胺類(lèi)的復(fù)方新諾明(55.4%)耐藥最明顯,多重耐藥菌株多達(dá)33株(35.9%),最多耐7種類(lèi)型的抗生素;除了青霉素類(lèi)基因(mecC)和多粘菌素類(lèi)基因(mcr-1)未檢出,耐藥基因pmrA(92.4%)、blaTEM(78.3%)和qnrS(53.3%)檢出率較高。此外,毒力基因檢測(cè)結(jié)果顯示腸毒素性大腸桿菌(ETEC)毒力基因est檢出率最高,高達(dá)31.5%�？諝鈦�(lái)源的大腸桿菌毒力基因檢出率種類(lèi)最多,檢測(cè)出stx、est、elt和aggR這四種毒力基因。(4)本實(shí)驗(yàn)對(duì)分離獲得的92株大腸桿菌進(jìn)行ERIC-PCR分型分析,結(jié)果顯示在以相似系數(shù)0.80的水平上,不同來(lái)源的家禽屠宰場(chǎng)大腸桿菌分離株可以分型為11種菌型(A~H),其中E型有32株,為優(yōu)勢(shì)菌型,來(lái)源包括雞肛門(mén)拭子、掛禽間冷鮮雞、凈膛間掛鉤紗布和預(yù)冷間空氣等不同環(huán)節(jié)的樣品,由此可見(jiàn)同一屠宰場(chǎng)的空氣、水體、器械、地面和冷鮮雞相互之間存在著大腸桿菌的交叉污染。
【學(xué)位單位】：中國(guó)計(jì)量大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：S852.6
【部分圖文】：

研究技術(shù)路線(xiàn)

掛禽間宰殺瀝血間浸燙脫羽間凈膛間2. 1 材料與方法2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑主要儀器如下表 2-1。表 2. 1 主要儀器Table 2.1 Main equipment儀器名稱(chēng) 生產(chǎn)廠(chǎng)家恒溫培養(yǎng)箱、烘箱 上海一恒科學(xué)儀器有限公司天平 北京賽多利斯天平有限公司主要試劑：平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA)培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基均由杭州微生物試劑有限公司提供。2.1.2 樣本的采集2.1.2.1 屠宰加工流程

16Figure 2.7 The top 10 phylum (A) and genus (B) of each sample in the external air ofslaughterhouse：BH，屠宰前掛禽間；BS，屠宰前宰殺瀝血間；BD，屠宰前浸燙脫羽間；BE，屠宰前；BPr，屠宰前預(yù)冷間；BPa，屠宰前包裝間；BRe，屠宰前冷藏間；BV，屠宰前內(nèi)臟間；宰前屠宰場(chǎng)廠(chǎng)房外四周；AH，屠宰后掛禽間；AS，屠宰后宰殺瀝血間；AD，屠宰后浸間；AE，屠宰后凈膛間；APr，屠宰后預(yù)冷間；APa，屠宰后包裝間；ARe，屠宰后冷，屠宰后內(nèi)臟間；AO，屠宰后屠宰場(chǎng)廠(chǎng)房外四周。te:BH，hanging district before slaughter；BS，slitting and blood draining district before slaug，scalding and dehairng district before slaughter；BE，eviscerating district before slaughter；-cooling district before slaughter；BPa，Packing district before slaughter；BRe，Refrigerated dfore slaughter；BV，Visceral district before slaughter；BO，around the factory before slau，hanging district after slaughter；AS，slitting and blood draining district after slaughter；lding and dehairng district after slaughte；AE，eviscerating district after slaughter；APr，Pre-ctrict after slaughter；APa，Packing district after slaughter；ARe，Refrigerated district after slaug，Visceral district after slaughter；AO，outside the factory after slaughter結(jié)構(gòu)
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本文編號(hào)：2887650