豬圓環(huán)病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD),是由豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)引起的一種豬多種疾病綜合征的慢性傳染病,主要危害斷奶仔豬。其因高傳染率,低死亡率,可以造成感染機體的免疫抑制等特點,給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經濟損失。疫苗免疫是目前控制PCV2感染,防治PCVD的最重要,最有效的手段。目前,市場上商品化疫苗各種各樣,安全性與有效性差異較大。因此,如何正確、科學的選擇安全高效的豬圓環(huán)病毒疫苗,進行有效的豬圓環(huán)病毒防控是目前養(yǎng)豬場(戶)面臨的急需解決的問題。因此,建立科學、合理、簡便易行的評價商品化PCV2疫苗安全、效力評價指標體系,并進行不同佐劑的疫苗安全、效力效果比較,對養(yǎng)豬生產上選擇安全高效的疫苗和新型疫苗研制具有重要意義。本研究分別選取水性佐劑、蜂膠-VSP復合佐劑、蜂膠-VCG復合佐劑、鯊烷-VCG復合佐劑、免疫增強劑等不同佐劑的8種PCV2 VLPs商品化疫苗與試驗疫苗,分別涵蓋了桿狀病毒表達載體VLP疫苗和大腸桿菌表達VLP疫苗,平行進行昆明小鼠、仔豬的安全性和效力比對評價。通過安全指數(包含內容:相對增重、體溫、飲食,精神狀態(tài),接種部位等指標)、組織學病理觀察等指標評價疫苗的安全性,通過血清PCV2抗體效價,實時熒光RT-PCR方法定量檢測組織和外周血淋巴細胞IL-10、IL-17A、IFN-γ的mRNA轉錄水平,ELISA方法測定外周血中IL-2和IL-4蛋白表達水平,PCV2攻毒保護和組織核酸載量等指標評價疫苗的免疫效力。試驗結果顯示:本文建立了6個小鼠和仔豬相對應的IFN-γ、IL-17A、IL-10的SYBR GreenⅠRT-PCR檢測方法,適用于臨床定量檢測IFN-γ、IL-17A、IL-10的mRNA表達水平;安全試驗比較結果表明:C、E、F組PCV2疫苗在小鼠和仔豬中的安全指數顯著高于其它疫苗,其中E組最高;H組的疫苗免疫小鼠后對免疫部位的病變少且對免疫部位肌肉刺激小,其次是A組和F組;效力試驗比較結果表明:G組和H組疫苗效力在小鼠和仔豬中均較其它組疫苗高,并且誘導機體產生偏向體液免疫型的免疫應答,其中G組疫苗免疫仔豬后,IFN-γ和IL-17A的mRNA表達量升高,誘導機體產生高于其它各組的特異性免疫。本文成功建立了安全指數,抗體效價,細胞免疫因子,免疫抑制因子,病毒載量“五位一體”的疫苗檢驗金標準。用該標準比較分析了8種不同佐劑的PCV2疫苗安全性和效力結果表明,丁公司G疫苗和H疫苗免疫效果最好,能顯著增強豬群的特異性免疫和非特異性免疫,減少對免疫部位的刺激,具有良好的安全性,該研究為PCV2疫苗的安全性、效力檢驗和臨床推廣應用提供了數據支撐。
【學位單位】：山東農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S858.28
【部分圖文】：

山東農業(yè)大學碩士專業(yè)學位論文表 13 標準質粒濃度及拷貝數Table13 Concentration and copy number belonging of standard plasmid類別Category小鼠 仔豬IL-10 IL-17A IFN-γ IL-10 IL-17A IFN-γ重組質粒濃度（ng/μL） 129.9 207 93.7 97.3 73.5 117.3拷貝數（cop/μL） 3.87×10106.44×10102.89×10102.98×10102.29×10103.78×1010

八種 PCV2 VLPs 疫苗免疫效果評價比較3.1.3 標準曲線的建立3.1.3.1 擴增曲線與標準曲線選取 6 或 8 個梯度稀釋的標準品質粒，即 101~106或 108拷貝/μL，進行熒光定量 PCR檢測，得到細胞因子的 SYBR GreenⅠ實時熒光定量 PCR 擴增曲線，如圖 2 所示，呈“S”型曲線。在 101~106或 108拷貝/μL 時（擴增曲線由左至右分別為 108或 106~101拷貝/μL），細胞因子的 Ct 值與濃度之間有較好的線性關系，且 R2≥0.99，說明相關性良好，可信度較高，如圖 3。

標準曲線Fig.3Standardcurveline
【參考文獻】

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本文編號：2868592