鉤吻屬馬錢科植物中胡蔓藤的全草,在傳統(tǒng)用藥中常用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疼痛、神經(jīng)性疼痛和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)等;現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明鉤吻具有抗炎鎮(zhèn)痛、免疫、抗腫瘤等藥理活性,其生物堿和環(huán)烯醚萜是主要的活性成分。鉤吻化學(xué)成分復(fù)雜,目前按已知藥物研究思路分離到200多種化合物,但尚未進(jìn)行鉤吻的整體物質(zhì)基礎(chǔ)研究。因此,本文采用基于液相-質(zhì)譜-數(shù)據(jù)庫技術(shù)的中藥化學(xué)成分快速識(shí)別技術(shù),從而系統(tǒng)闡明鉤吻中多種化學(xué)成分的結(jié)構(gòu),并研究鉤吻多組分在無對(duì)照品下進(jìn)行同時(shí)定量的關(guān)鍵技術(shù)。選擇正交試驗(yàn)對(duì)流動(dòng)相、分析時(shí)間和質(zhì)譜模式三個(gè)方面進(jìn)行LC-QqTOF/MS檢測(cè)條件優(yōu)化,最終優(yōu)化后采用0.1%甲酸水-乙腈、50 min、Auto MS/MS正離子模式可得到鉤吻化合物數(shù)目最多、響應(yīng)最好的代謝物結(jié)果;然后,通過與建立的鉤吻一級(jí)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行匹配分析鑒定出31個(gè)目標(biāo)化合物(甲基鉤吻素乙類,11個(gè);蛇根堿類,5個(gè);鉤吻素甲類,4個(gè);環(huán)烯醚萜類,4個(gè);鉤吻素子類,2個(gè),胡蔓藤堿乙類,2個(gè);酚酸類,2個(gè),育賓亨類,1個(gè)),并對(duì)其質(zhì)譜裂解規(guī)律進(jìn)行了研究,找到每類的診斷離子。再結(jié)合各種質(zhì)譜各種數(shù)據(jù)分析策略共檢測(cè)到非目標(biāo)代謝物116個(gè),其中甲基鉤吻素乙類,41個(gè);蛇根堿類,7個(gè);鉤吻素甲類,9個(gè);環(huán)烯醚萜類,15個(gè);鉤吻素子類,5個(gè),胡蔓藤堿乙類,14個(gè);酚酸類,7個(gè);其他,18。對(duì)其主要5類生物堿和環(huán)烯醚萜類等非生物堿的裂解規(guī)律進(jìn)行分類結(jié)構(gòu)表征,并結(jié)合MEGG和Massbank等數(shù)據(jù)庫進(jìn)行匹配,從而對(duì)未知代謝物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。建立了鉤吻素甲和鉤吻素子的HPLC定量檢測(cè)方法,并對(duì)不同產(chǎn)地和部位的鉤吻樣品進(jìn)行指紋圖譜相似性分析,結(jié)果表明液相上至少有10個(gè)共有特征峰,僅用該兩個(gè)化合物對(duì)鉤吻進(jìn)行質(zhì)量控制具有一定局限性。因此,鉤吻素甲和鉤吻素子的質(zhì)譜參數(shù)條件結(jié)合鉤吻各組分鑒定,對(duì)多組分中的成分進(jìn)行碰撞能量、分離條件的優(yōu)化,最終確立了同時(shí)檢測(cè)鉤吻中41個(gè)化學(xué)成分的LC-MS/MS方法,并采用鉤吻堿戊標(biāo)準(zhǔn)曲線相對(duì)定量研究了鉤吻的不同部位中多組分的含量,結(jié)果表明化合物在鉤吻不同部位存在顯著性差異。如:鉤吻素甲在葉中含量最高,可達(dá)到0.65 mg/g;鉤吻素子在根中含量最大為1.08 mg/g,但在莖、葉中的含量差異小;鉤吻素己在葉中含量最高為1.33 mg/g;鉤吻堿戊在這四種化學(xué)成分中含量最低,在莖中僅有0.13 mg/g。鉤吻素甲、鉤吻素己和鉤吻堿戊在三個(gè)部位有顯著差異,而鉤吻素子差異不顯著,根中四個(gè)化合物的差異是非常顯著的,葉中四個(gè)化合物存在顯著差異。14-Hydroxygelsenicine在根和莖部位的含量是隨著月份的增加逐漸有所積累,在莖中含量可達(dá)到1.198 mg/g;koumicine在12月新鮮藤中的含量最高為0.666 mg/g,19R-Hydroxydihydrogelsevirine或19S-Hydroxydihydrogelsevirine是鉤吻中含量最高的化合物。通過以上研究,本文建立了基于液相-質(zhì)譜-數(shù)據(jù)庫技術(shù)的鉤吻多組分快速鑒定的分析策略,全面系統(tǒng)闡明了鉤吻的化學(xué)成分結(jié)構(gòu);解決了鉤吻在無對(duì)照品下的定量分析技術(shù)難題。其研究結(jié)果不僅為鉤吻質(zhì)量控制及物質(zhì)作用基礎(chǔ)研究提供了技術(shù)支撐,而且為鉤吻多組分的藥代動(dòng)力學(xué)研究和安全性評(píng)價(jià)奠定了科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S853.7
【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 立項(xiàng)依據(jù)
    1.2 鉤吻中化學(xué)成分的研究進(jìn)展
        1.2.1 鉤吻生物堿的研究
        1.2.2 非生物堿的研究
    1.3 中藥化學(xué)成分的鑒定研究進(jìn)展
        1.3.1 LC/MS和GC/MS的定性研究
        1.3.2 NMR的定性研究
    1.4 中藥化學(xué)成分的定量研究進(jìn)展
        1.4.1 中藥色譜的定量研究方法及技術(shù)
        1.4.2 中藥質(zhì)譜的定量研究方法及技術(shù)
        1.4.3 鉤吻化合物定量的研究
    1.5 研究?jī)?nèi)容與目標(biāo)
第二章 LC-QqTOF/MS檢測(cè)條件的優(yōu)化研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試劑與藥品
        2.1.2 主要儀器與設(shè)備
        2.1.3 溶液配制
        2.1.4 樣品前處理
        2.1.5 鉤吻中代謝物最佳優(yōu)化條件的考察
        2.1.6 質(zhì)譜條件
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 不同條件對(duì)鉤吻數(shù)量的影響
        2.2.2 不同條件對(duì)鉤吻各組分強(qiáng)度的影響
        2.2.3 不同條件下鉤吻化合物出峰時(shí)間的影響
        2.2.4 不同條件下對(duì)鉤吻類別的影響
        2.2.5 不同二級(jí)模式對(duì)鉤吻交集的25個(gè)化合物的影響
    2.3 討論
    2.4 結(jié)論
第三章 基于鉤吻數(shù)據(jù)庫和各種分析策略對(duì)鉤吻多組分的鑒定研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試劑與藥品
        3.1.2 主要儀器與設(shè)備
        3.1.3 溶液配制
        3.1.4 樣品采集
        3.1.5 質(zhì)譜條件
        3.1.7 鉤吻各組分鑒定的分析策略
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 鉤吻各組分的化學(xué)成分分析
        3.2.2 化學(xué)成分分析
        3.2.3 鉤吻各組分的結(jié)構(gòu)鑒定
            3.2.3.1 甲基鉤吻素乙類生物堿
            3.2.3.2 蛇根堿類
            3.2.3.3 胡蔓藤堿乙類
            3.2.3.4 鉤吻素子類
            3.2.3.5 鉤吻素甲類
            3.2.3.6 環(huán)烯醚萜類
            3.2.3.7 酚酸類
            3.2.3.8 其他
    3.3 討論
    3.4 結(jié)論
第四章 HPLC定量方法研究鉤吻的指紋圖譜
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試劑與藥品
        4.1.2 主要儀器與設(shè)備
        4.1.3 溶液配制
        4.1.4 樣品前處理
        4.1.5 液相色譜條件
        4.1.6 方法學(xué)考察
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 HPLC定量方法結(jié)果
            4.2.1.1 精密度
            4.2.1.2 線性回歸
            4.2.1.3 重復(fù)性試驗(yàn)
            4.2.1.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)
            4.2.1.5 加樣回收率試驗(yàn)
        4.2.2 不同產(chǎn)地和部位的指紋圖譜分析
            4.2.2.1 鉤吻素甲與鉤吻素子含量結(jié)果
            4.2.2.2 鉤吻樣品相似性結(jié)果
    4.3 討論
    4.4 結(jié)論
第五章 鉤吻多組分的LC-MS/MS定量方法學(xué)研究
    5.1 材料方法
        5.1.1 主要藥品
        5.1.2 溶液配制
        5.1.3 樣品采集
        5.1.4 主要儀器和設(shè)備
        5.1.5 四種鉤吻生物堿的LC-MS/MS方法學(xué)研究
            5.1.5.1 鉤吻定量分析液相方法的建立
            5.1.5.2 鉤吻標(biāo)準(zhǔn)品線性范圍的確立
            5.1.5.3 鉤吻標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)確度與精密度
            5.1.4.4 鉤吻樣品的穩(wěn)定性
            5.1.5.5 鉤吻樣品的重復(fù)性
        5.1.6 鉤吻多組分的質(zhì)譜條件優(yōu)化
        5.1.7 鉤吻根、莖、葉之間的差異性分析
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 LC-MS/MS方法學(xué)考察結(jié)果
            5.2.1.1 方法專屬性
            5.2.1.2 線性范圍
            5.2.1.3 最低檢測(cè)限
            5.2.1.4 定量限
            5.2.1.5 方法的精密度
        5.2.2 鉤吻各組分的LC-MS/MS方法結(jié)果
            5.2.2.1 鉤吻多組分的專屬性分析
            5.2.2.2 鉤吻的穩(wěn)定性結(jié)果
            5.2.2.3 鉤吻的重復(fù)性結(jié)果
        5.2.3 鉤吻多組分LC-MS/MS的應(yīng)用
            5.2.3.1 四種生物堿的定量結(jié)果
            5.2.3.2 鉤吻41 個(gè)化合物的相對(duì)定量結(jié)果
        5.2.4 鉤吻根、莖、葉差異性結(jié)果
    5.3 討論
    5.4 結(jié)論
結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附圖
縮略語表
致謝
作者簡(jiǎn)介

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2840461