規(guī)律性的細胞死亡無論是在整個發(fā)育過程,還是保持生物體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)之中都扮演著重要的角色。近十年的許多研究表明,生理和病理的壞死能以一種有規(guī)律的方式發(fā)生。這種有規(guī)律的壞死被稱為程序性細胞壞死(necroptosis),這是一種非caspase活性依賴的程序性細胞死亡方式。該過程是由不同細胞水平的生化和分子事件共同誘導(dǎo)的。其中研究最為廣泛的是由TNF誘導(dǎo)的程序性細胞壞死,而蛋白激酶受體相互作用蛋白激酶3(RIPK3)和它下游的底物:混合譜系激酶區(qū)域樣蛋白(MLKL)則是該信號通路下游不可或缺的重要分子。有研究表明,細胞凋亡以及自噬均參與哺乳動物胚胎著床過程,因而我們研究程序性細胞壞死是否也在胚胎著床過程中有重要作用。為了研究程序性壞死在小鼠早期妊娠過程中是否發(fā)生,我們研究了MLKL在小鼠妊娠早期子宮中及其在蛻膜中的表達及調(diào)控規(guī)律。我們構(gòu)建了不同的小鼠模型:小鼠早期妊娠模型、人工誘導(dǎo)蛻膜化模型以及激素處理模型;培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞并體外通過cAMP、MPA及E_2誘導(dǎo)其蛻膜化;通過real-time PCR、原位雜交以及Western Blot等實驗技術(shù)分析了MLKL mRNA和蛋白在小鼠早期妊娠子宮、蛻膜化子宮以及激素處理表達規(guī)律。在小鼠早期妊娠子宮中,MLKL mRNA以及蛋白在胚胎著床之前的妊娠第一到第四天,以及妊娠第五天的非著床位點處表達量較低,而在妊娠第五天,進入胚胎著床過程后開始發(fā)揮作用,表達量逐漸升高,并在妊娠第七天檢測到表達量峰,而妊娠第八天表達稍有下降;原位雜交結(jié)果顯示,MLKL mRNA在妊娠第五天著床位點處的子宮腔上皮表達,與第五天的非著床位點處的腔上皮對比明顯,妊娠第六到第八天則主要集中在蛻膜組織中表達。在人工蛻膜化小鼠子宮中MLKL基因的表達量很高,而在無處理的對照組中則未檢測到表達信號;在人體外誘導(dǎo)蛻膜化細胞中,隨誘導(dǎo)時間增加MLKL mRNA表達量逐漸增高。在激素處理模型子宮中,與注油的對照組子宮相對比,在注射P_4的處理組子宮中,MLKL mRNA以及蛋白表達量顯著增高(P0.05),在單獨注射E_2以及注射E_2和P_4共同作用的處理組子宮中,MLKL表達量也比對照組稍高,但低于單獨注射P_4的小鼠子宮。實驗結(jié)果說明,MLKL在小鼠子宮中與胚胎著床過程以及蛻膜化過程可能具有很大相關(guān)性,因而我們推測程序性細胞壞死在小鼠妊娠過程中發(fā)揮一定的作用。并且MLKL表達受類固醇激素,尤其是孕酮的調(diào)節(jié)。小鼠子宮蛻膜中高表達的MLKL基因可能將調(diào)控子宮基質(zhì)細胞的分化。根據(jù)這些結(jié)果我們推測MLKL在小鼠胚胎著床以及蛻膜化過程中可能發(fā)揮著重要的作用。
【學(xué)位單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S814.4
【部分圖文】：

圖 1-1 程序性細胞壞死的信號通路[36]Figure 1-1 Pathways leading to necroptosis[36]1.2.2.1TNFR1 介導(dǎo)的程序性細胞壞死腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor ，TNF）是一個重要的炎癥性細胞因子，是細胞凋亡、炎癥和免疫的主要介質(zhì)。它能誘導(dǎo)例如炎癥反應(yīng)、細胞增殖以及細胞死亡等許多細

圖 1-2 RIP3/MLKL 介導(dǎo)的細胞死亡程序[90]Figure 1-2 RIP3/MLKL mediated cell death program[90]包括六個螺旋（H1-H6）的氨基末端結(jié)構(gòu)域來形成通道，進一五個跨膜螺旋片段：螺旋 H1，H2，H3，H5 和 H6，而螺旋 H圖 1-3）。最后通過實驗，證明 MLKL 誘導(dǎo)膜去極化以及誘導(dǎo)與其通道活性呈正相關(guān)的，解釋了 MLKL 引起細胞程序性壞

-3 一個 MLKL 通道亞單位示意圖[95-3 An MLKL channel subunit schemaLKL-/-小鼠和人 HT-29 細胞都對 T達則能恢復(fù) TNF 的誘導(dǎo)作用[62,6
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 崔天盆;鄭承紅;陳杰;蘇斌濤;;細胞死亡方式及其清除[J];中國免疫學(xué)雜志;2014年06期

2 后曉南,王智彪;生命過程的相似性──從著床部位母體細胞的凋亡談起[J];生命科學(xué);2002年02期

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1 鄧雪萍;LIF基因在大鼠圍著床期的表達、調(diào)控及LIF基因敲除大鼠研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

2 馬珍子;Plekhs1在小鼠子宮接受態(tài)轉(zhuǎn)變過程中的表達與調(diào)節(jié)[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

本文編號：2839749