沙門菌(Salmonella)是腸桿菌科沙門菌屬的兼性厭氧的革蘭氏陰性菌,是一種可以在人與人,動(dòng)物與動(dòng)物以及人和動(dòng)物之間直接或間接傳播的重要人畜共患病原菌。沙門菌血清型眾多,傷寒沙門菌、甲型副傷寒和肖氏沙門菌等主要引起人的腸熱癥,其他大多數(shù)沙門菌對(duì)一些動(dòng)物有致病性,這些動(dòng)物包括家禽、家畜、嚙齒類動(dòng)物和家養(yǎng)的寵物等,引起動(dòng)物的胃腸炎,敗血癥等多種不同的臨床表現(xiàn)。2013年我國(guó)疾病防控中心的數(shù)據(jù)顯示,平均每100 000人中有高達(dá)549人攜帶沙門菌。人感染沙門菌多是食用了被沙門菌污染的食品,如肉、奶、蛋和海鮮等。沙門菌廣泛的存在,對(duì)人類和動(dòng)物健康以及食品衛(wèi)生都造成了極大的威脅。在畜牧業(yè)的養(yǎng)殖過(guò)程中,抗菌藥不僅被用于預(yù)防、控制和治療動(dòng)物疾病,而且在動(dòng)物促生長(zhǎng)方面發(fā)揮了重要作用。國(guó)內(nèi)外對(duì)沙門菌耐藥性的調(diào)查結(jié)果顯示沙門菌的耐藥狀況已經(jīng)十分嚴(yán)重,而且隨著時(shí)間的推移,耐藥率不斷升高且多重耐藥現(xiàn)象也越來(lái)越嚴(yán)重。作為臨床上治療沙門菌感染最為重要的藥物之一——喹諾酮類的耐藥形勢(shì)也相當(dāng)嚴(yán)峻。本研究于2016年8月至2019年1月從重慶市部分地區(qū)的雞場(chǎng)、牛場(chǎng)、羊場(chǎng)、豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)和寵物醫(yī)院采集1850份樣本進(jìn)行沙門菌的分離鑒定。結(jié)果從1850份樣本中共檢測(cè)到91株沙門菌,總分離率為4.9%。從動(dòng)物來(lái)源來(lái)看,豬源和犬源沙門菌的分離率最高,分別為6.1%和6%,其次為牛源和羊源沙門菌,分離率均為3%。91株沙門菌包括67株豬源、9株羊源、6株雞源、3株犬源和3株牛源菌株。從地區(qū)來(lái)看,重慶市南川區(qū)的沙門菌分離率最高(11%),墊江縣和涪陵區(qū)的沙門菌分離率最低(均為2%)。不同動(dòng)物源的91株沙門菌中有82株成功鑒定血清型,共覆蓋10種血清型,其中最為常見(jiàn)的血清型為德?tīng)柋吧抽T菌(44株,占總數(shù)的48.4%),其次為阿貢納沙門菌(10株,占總數(shù)的11.1%),羅森沙門菌(7株,占總數(shù)的7.7%)等。對(duì)分離到的91株沙門菌進(jìn)行了9類一共27種藥物的敏感性試驗(yàn),結(jié)果顯示對(duì)四環(huán)素和多西環(huán)素的耐藥率都超過(guò)了80%,對(duì)氨芐西林、氯霉素和氟苯尼考的耐藥率也超過(guò)了60%。另外,對(duì)復(fù)方新諾明和甲氧芐氨嘧啶的耐藥率也在50%以上。同時(shí)頭孢菌素類藥物中的頭孢唑啉耐藥率高達(dá)30%。喹諾酮類藥物中,環(huán)丙沙星和恩諾沙星的耐藥率也達(dá)到20%,且多重耐藥率高達(dá)95.6%。其中雞源沙門菌耐藥最為嚴(yán)重,其中50%的菌株對(duì)10種以上藥物耐藥。其次為豬源菌株,對(duì)10種以上藥物耐藥占22.4%。采用PCR及測(cè)序的方法檢測(cè)PMQR基因的流行情況和靶位基因QRDR的突變情況,結(jié)果表明,76.9%的沙門菌至少攜帶一種PMQR基因,檢出率最高的oqxB(57.1%),其次為oqxA(51.6%)、qnrS(30.8%)和aac(6′)-Ib-cr(30.8%),其中oqxA+oqxB通常共存于同一菌株內(nèi)。在所有PMQR陽(yáng)性菌株中常見(jiàn)的基因表型為oqxA+oqxB+aac(6′)-Ib-cr和qnrB+oqxA+oqxB+aac(6′)-Ib-cr,分別占總數(shù)的11.4%和14.3%。經(jīng)測(cè)序分析,4株qnrD陽(yáng)性菌中,兩株鑒定為qnrD1;19株qnrB陽(yáng)性菌中,16株為qnrB6;qnrS一共檢測(cè)出三種亞型,分別為qnrS1(5株)、qnrS2(6株)、qnrS10(15株);同時(shí),oqxA也檢測(cè)出兩種亞型,分別為oqxA1(29株)、oqxA2(1株);oqxB則大多為oqxB5。對(duì)QRDR突變分析得知,90.1%的菌株發(fā)生了靶基因的突變,以parC基因的T57S(82株)單突變最為常見(jiàn),同時(shí)還檢測(cè)到G72C(2株)和L131M(4株)的突變類型。此外,gyrA基因檢測(cè)出三種突變類型,分別為V143G(1株)、S83L(1株),D87Y(1株)。parE檢測(cè)出了一種突變類型M438I(1株),沒(méi)有檢測(cè)到gyrB發(fā)生突變。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),發(fā)生gyrA突變的菌株都對(duì)萘啶酸或環(huán)丙沙門耐藥。
【學(xué)位單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S852.61
【部分圖文】：

西南大學(xué)碩士學(xué)位論文 抗原的鑒定。在 H 抗原發(fā)育不良的情況瓊脂平板的中心，當(dāng)菌落擴(kuò)散生長(zhǎng)時(shí)，收家標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定到的抗原式確定沙性培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況平板上形成中心帶黑色的粉紅色菌落，或株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心（圖 3落（圖 3-2）。

平板上形成中心帶黑色的粉紅色菌落，或株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心（圖 3落（圖 3-2）。圖 3-1 沙門菌在 XLT-4 平板上分離培養(yǎng)的情況. 3-1 Growth pattern of Salmonella on XLT-4 medi

在油鏡下觀察，為紅色短桿狀散在排列的革蘭陰性菌（圖3-3）。圖 3-3 革蘭氏染色結(jié)果Fig. 3-3 The result of gram stain3.3.3 分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果通過(guò) PCR 擴(kuò)增沙門菌特異性基因 invA，得到 283bp 的特異性片段，與預(yù)期結(jié)果相符，如圖 3-4。M：100bp ladder；1：陰性對(duì)照；24：陽(yáng)性對(duì)照；2-23：臨床分離菌株。圖 3-4 invA 基因 PCR 擴(kuò)增結(jié)果Fig.3-4 Detection of Salmonella specific invA gene3.3.4 沙門菌在不同區(qū)縣的分離情況本研究共在重慶的豬、羊、雞、牛場(chǎng)和寵物醫(yī)院采集到 1850 份樣品。通過(guò)選擇性培養(yǎng)和增菌，并通過(guò) PCR 鑒定共分離到沙門菌 91 株，總分離率為 4.9%。不同的區(qū)縣分離率存在較大差異（表 3-1），南川區(qū)的分離率最高，為 11%；其次為江津區(qū)（8%）、萬(wàn)州區(qū)（6.7%）、渝北區(qū)（6%）和合川區(qū)（6%）、榮昌區(qū)（5%）、大足區(qū)（4.3%）、長(zhǎng)壽區(qū)（3%）、彭水縣（2.5%）；墊江縣、北碚區(qū)和涪陵區(qū)分離率最低，均為 2%（表 3-1）。
【參考文獻(xiàn)】

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