雞傳染性貧血(chicken infectious a.nemia,CIA)是由圓環(huán)病毒科雞傳染性貧血病毒(chicken infectious a.nemia virus,CIAV)引起的,雞是 CIAV 的唯一自然宿主,各年齡雞均易感,在雞群中廣泛存在,隨著日齡的增加,其易感性、發(fā)病率和死亡率逐漸降低。1979年Yuasa等首次分離到雞傳染性貧血病毒,目前已在全球分布,該病的發(fā)生呈不斷上升的趨勢,成為當前嚴重危害養(yǎng)雞業(yè)的主要疫病之一。本文采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法檢測CIAV陽性率,系統(tǒng)調查了江蘇省雞傳染性貧血病的流行病學,并對泰州株病原進行了分離與鑒定。1.江蘇省各地區(qū)雞傳染性貧血病調查2012.9-2014.8采用多級隨機抽樣法對江蘇省13個地區(qū)中50個不同市縣的191個規(guī)模雞場采集血液樣品,共采集5152份樣本,同時詳細記錄采樣雞的年齡、品種及養(yǎng)殖場情況等。應用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定CAV陽性率,結果表明,所測樣品中雞傳染性貧血病毒陽性1643份,占總調查血清樣品的31.89%。其中南京浦口、江寧、六合地區(qū)血清抗體陽性率分別為16.30%、18.48%、23.91%;無錫濱湖、宜興地區(qū)血清抗體陽性率分別為19.57%、20.65%,徐州新沂、邳州、豐縣、沛縣、睢寧地區(qū)血清抗體陽性率分別為33.70%、31_52%、29.35%、32.61%、29.35%;常州新北區(qū)、武進區(qū)、溧陽地區(qū)雞血清抗體陽性率分別為20.65%、19.57%、20.65%;蘇州姑蘇區(qū)、張家港地區(qū)雞血清抗體陽性率分別為19.57%、16.30%;南通啟東、海門、海安、如東、如皋地區(qū)雞血清抗體陽性率分別為21.74%、10.87%、30.43%、22.83%、23.91%;連云港贛榆、灌云、東海、灌南地區(qū)血清抗體陽性率分別為29.35%、18.48%、27.17%、17.39%;淮安淮安區(qū)、漣水、盱眙地區(qū)血清抗體陽性率分別為23.91%、21.74%、20.65%;鹽城建湖、濱海、大豐、射陽、阜寧、東臺地區(qū)血清抗體陽性率分別為20.65%、32.61%、27.17%、53.26%、35.87%、22.83%;揚州江都區(qū)、儀征、寶應、高郵地區(qū)雞血清抗體陽性率分別為20.65%、19.57%、23.91%、19.57%;鎮(zhèn)江丹徒、丹陽、揚中、句容地區(qū)雞血清抗體陽性率分別為20.65%、19.57%、21.74%、22.83%;泰州海陵、高港、姜堰、泰興、靖江、興化地區(qū)雞血清抗體陽性率分別為78.26%、66.85%、69.02%、54.89%、43.48%、53.80%;宿遷沭陽、泗陽、泗洪地區(qū)雞血清抗體陽性率分別為21.74%、20.65%、29.35%。表明江蘇13個地區(qū)普遍存在雞傳染性貧血病毒感染,調查結果為該病的防控提供了科學依據(jù)。2.雞傳染性貧血病陽性率與日齡的關系通過對血清樣品的分析,30日齡以下血清樣品536份,陽性76份(陽性率14.18%);31-140日齡血清樣品1372份,陽性293份(陽性率21.36%);141-240日齡血清樣品1772份,陽性642份(陽性率36.23%);241日齡以上血清樣品1472份,陽性633份(陽性率為43%)。表明江蘇省雞CIAV抗體陽性與年齡有密切關系,雞群日齡不同血清抗體陽性率有顯著差異,隨著日齡增加感染率明顯升高。說明CIAV通過水平傳播和垂直傳播兩種方式感染雞群。3.雞傳染性貧血病毒(CIAV)ELISA陽性率與品種的關系本研究采集9個品種雞的血清樣品,通過對所測CIAV陽性率與品種關系的分析,狼山雞、海蘭雞、京紅1號、農大3號、烏骨雞、三黃雞、AA雞、艾維茵肉雞、黃羽肉雞、陽性率分別為 17.73%(159/897)、29.89%(200/669)、31.67%(165/521)、28.57%(172/602)、19.61%(20/102)、38.72%(290/749)、38.36%(206/537)、43.03%(213/495)、37.59%(218/580)。其中,蛋用種雞血清樣品982份,陽性數(shù)241份(陽性率24.54%);商品蛋雞血清樣品1707份,陽性數(shù)455份,(陽性率為26.65%);肉用種雞血清樣品1022份,陽性數(shù)398份(陽性率38.94%);商品肉雞血清樣品1441份,陽性數(shù)549份(陽性率38.10%)。表明江蘇不同品種雞均有雞傳染性貧血病毒感染,肉雞品種陽性率普遍高于蛋雞。4.雞傳染性貧血病毒分離與鑒定選取雞傳染性貧血病毒抗體陽性率為90%-95.24%的5個雞群,隨機采集10-50日齡生長緩慢、發(fā)育不良、消瘦、貧血、疫苗抗體效價低的不同品種的雞24羽,應用PCR、SPF雞病毒分離、MDCC-MSB1細胞病毒分離、免疫熒光試驗、動物回歸試驗、基因測序等方法進行病毒分離與鑒定。結果表明,疑似雞組織乳液接種1日齡SPF雛雞,血清樣品陽性率為95.83%,血液檢查HCT27%,血紅蛋白、紅細胞數(shù)和白細胞數(shù)均低于對照組,臨床癥狀和病理剖檢具有典型的雞傳染性貧血病的病理變化特征。SPF雞組織通過PCR檢測均能擴增到目的片段。SPF雞組織液接種MSB1細胞傳至第五代出現(xiàn)細胞死亡,熒光顯微鏡下可見到感染細胞試驗組和陽性對照中出現(xiàn)不規(guī)則的熒光顆粒,接毒細胞經過PCR檢測能擴增到目的片段。接毒細胞液接種SPF雞進行動物回歸試驗,臨床癥狀和病理剖檢具有典型的雞傳染性貧血病的病理變化特征。分離到的病毒株命名為CAVMY1305-30(泰州株),基因測序得該株與其他32株CAV病毒編碼區(qū)的核苷酸基因同源性為96.5%-99.8%;單一比對VP1、VP2、VP3的生物開放閱讀框架(ORF),CAVMY1305-30與其他32株CAV毒株的核苷酸同源性分別達95.7%、99.1%、98.7%,VP1和VP2所對比的32個毒株,分為兩大分支,各分支中均有亞洲、歐美的毒株存在,并無明顯的地域區(qū)分性。表明分離的病毒株為雞傳染性貧血病毒,該分離株變異不大。
【學位單位】：揚州大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S858.31
【部分圖文】：

圖１?ＣＩＡＶ結構??Ｆｉｇ?１?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＣＩＡＶ??

編碼ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３三種病毒蛋白［２８］，分子量分別為５１．?６ＫＤ、２４ｋＤ、１３．?６ｋＤ，其中６５１ｂｐ??的ＯＲＦ（ＶＰ２）與３６６ｂｐ的ＯＲＦ（ＶＰ３）完全重疊，與１３５０ｂｐ的ＯＲＦ（ＶＰｌ）部分重疊，其基因??組結構見圖２［２９］。??

含量各占一半，后者主要參與ＲＮＡ轉錄和單股環(huán)狀ＣＩＡＶ基因組的產生［６２］。ＣＩＡＶ?ＤＮＡ的??復制方式完全類似于單鏈環(huán)狀ＤＮＡ噻菌體ｐｈｋｌ７４（＃１７４）的“滾環(huán)復制模式”??（ｒｏｌｌｉｎｇ－ｃｉｒｃｌｅ?ｍｏｄｅｌ）于感染細胞中ｔｅｉ］，推測的ＣＩＡＶ的復制模式如圖３。??
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本文編號：2838175