捻轉(zhuǎn)血矛線蟲是反芻動(dòng)物主要的消化道線蟲之一,給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于長(zhǎng)期的藥物驅(qū)蟲,捻轉(zhuǎn)血矛線蟲在很多地區(qū)已經(jīng)出現(xiàn)了針對(duì)丙硫咪唑等常用驅(qū)蟲藥的耐藥性,成為制約寄生蟲病防治的重要因素。到目前為止,在寄生蟲耐藥性產(chǎn)生機(jī)理方面尚未完全清晰。本研究對(duì)內(nèi)蒙古烏審旗和察右后旗綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查及耐藥性檢測(cè);利用比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)對(duì)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲丙硫咪唑耐藥株給藥前、給藥后及敏感株、耐藥株開展相關(guān)研究,對(duì)可能的耐藥基因進(jìn)行功能、代謝通路及可能的耐藥機(jī)制分析,并篩選出3個(gè)耐藥相關(guān)基因,對(duì)其進(jìn)行重組表達(dá)。為深入探索捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥機(jī)制、篩選對(duì)耐藥性檢測(cè)的分子標(biāo)記及耐藥性早期鑒別診斷方法的建立提供重要數(shù)據(jù)。研究結(jié)果如下:(1)烏審旗和察右后旗綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲平均感染率分別為89%和78%,蟲卵減少率分別為9.80%和20.4%,這2個(gè)地區(qū)的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲對(duì)丙硫咪唑產(chǎn)生耐藥性。(2)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥株給藥前和給藥后比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,共獲得851個(gè)差異表達(dá)基因,顯著富集到ATP結(jié)合、代謝過程、蛋白水解等功能分類中,主要參與核糖體合成、細(xì)胞凋亡、過氧化物酶增殖體激活受體(PPAR)等通路。(3)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲敏感株和耐藥株比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,共獲得顯著差異表達(dá)基因913個(gè),主要參與谷胱甘肽代謝、細(xì)胞色素P450對(duì)異種生物的代謝、藥物代謝細(xì)胞色素P450等。(4)對(duì)3個(gè)耐藥基因進(jìn)行克隆及生物信息學(xué)分析,成功構(gòu)建了 BL21(pETGST)、BL21(pETP450)和 BL21(pETABC)三個(gè)重組表達(dá)系統(tǒng),并通過Ni+獲得了純度較高的重組蛋白。
【學(xué)位單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S858.27
【部分圖文】：

Ｆｉｇ．邋１邋Ｌｉｆｅ邋ｃｙｃｌｅ邋ｏｆ邋Ｈａｅｍｏｎｃｈｕｓ邋ｃｏｎｔｏｒｔｕｓ逡逑矛線蟲的流行逡逑線蟲在我國(guó)流行較廣泛，額葉勒德格等（２０１８）通過化道線蟲感染情況進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示，該十分普遍，感染率達(dá)到８４．３％％孔令杰（２０１５）通蟲流行病學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)該地區(qū)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染率較（２０１８）通過對(duì)湖北省部分地區(qū)山羊重要寄生蠕蟲轉(zhuǎn)血矛線蟲感染率最高，且為優(yōu)勢(shì)蟲種［９］。由于該病流行病學(xué)調(diào)查中捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染情況有明顯差異性，原因的說法不一［１０］。春季萬物復(fù)蘇，溫度適宜，感染宿主進(jìn)食時(shí)經(jīng)口感染，導(dǎo)致該病的爆發(fā)；捻轉(zhuǎn)血矛線的重要原因之一，大量的蟲體在宿主體內(nèi)停滯發(fā)育，°Ｃ死亡，待春季時(shí)期，大量的滯育期蟲體發(fā)育為成蟲，致“春潮”現(xiàn)象［｜１］。逡逑

質(zhì)內(nèi)游離態(tài)微管蛋白的主要形式，同時(shí)也是微管組裝的基本單位，在機(jī)體的正常逡逑活動(dòng)中起到重要的作用，如參與細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸、維持細(xì)胞形態(tài)及輔助完成染色逡逑體運(yùn)動(dòng)等丙硫咪唑可以在寄生蟲微管蛋白聚合之前與微管蛋白結(jié)合（見圖２），逡逑阻止微管蛋白組裝，引起蛋白代謝障礙，從而終止細(xì)胞周期，導(dǎo)致蟲體死亡［４７１。逡逑研究發(fā)現(xiàn)，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲對(duì)丙硫咪唑耐藥性與Ｐ－微管蛋白同種Ｉ型基因的單逡逑核苷酸多態(tài)性有關(guān)。Ｋｗａ邋（１９９４）等ｗ在研究捻轉(zhuǎn)血矛線蟲耐藥株時(shí)，首次發(fā)現(xiàn)逡逑了Ｐ－微管蛋白同種Ｉ型基因的單核苷酸多態(tài)性（ｓｉｎｇｌｅ邋ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ邋ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，逡逑ＳＮＰ），由苯丙氨酸變成酪氨酸，即Ｆ２００Ｙ邋（ＴＴＣ至ＴＡＣ）。Ｄｒｏｇｅｍｕｌｌｅｒ邋（２００４）逡逑等［４９１發(fā)現(xiàn)了耐藥株Ｐ－微管蛋白同種Ｉ型基因在丨６７位點(diǎn)的ＳＮＰ，即Ｆ１６７Ｙ邋（ＴＴＣ至逡逑ＴＡＣ）。Ｇｈｉｓｉ邋（２００７）等網(wǎng)報(bào)道了耐藥蟲株Ｐ－微管蛋白同種Ｉ型基因在１９８位點(diǎn)的逡逑ＳＮＰ，即Ｅ１９８Ａ邋（ＧＡＡ至ＧＣＡ）。Ｆ２００Ｙ是丙硫咪唑產(chǎn)生耐藥性的主要因素，呈逡逑全球性分布

在ｃＤＮＡ兩端加上測(cè)序接頭，利用高通量測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序，直至獲得逡逑足夠的序列，所得序列比對(duì)到參考基因組（有參轉(zhuǎn)錄組）或進(jìn)行從頭組裝（ｄｅ邋ｎｏｖｏ逡逑ａｓｓｅｍｂｌｙ邋（無參轉(zhuǎn)錄組）形成全基因組范圍內(nèi)的轉(zhuǎn)錄譜（見圖３）。所謂有參轉(zhuǎn)錄逡逑組是指在有參考基因組的分析中，基于己知物種的基因組信息，把測(cè)序得到的逡逑ｒｅａｄｓ比對(duì)到參考基因組上，然后計(jì)算出己知注釋基因的表達(dá)量，或?qū)Ω信d趣的逡逑一類基因在不同組織或不同狀態(tài)下的表達(dá)量進(jìn)行研宄。另外，通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序可逡逑以發(fā)現(xiàn)一些新的轉(zhuǎn)錄本，鑒定新的基因和新的ＩｎｃＲＮＡ，也可以通過與參考基因逡逑組進(jìn)行比對(duì)，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)ＳＮＰ位點(diǎn)及可變剪切位點(diǎn)［７３】。逡逑ＲＮＡ片段化處砰逡逑｜邋反轉(zhuǎn)求介成ｃＤＮＡ文片逡逑｜邋ＤＮ邋Ａ＇闡序接頭連接逡逑、邐＇公}、…逡逑Ｉ邋Ｋ’Ｒ擴(kuò)增文庫逡逑Ｔ邐？？邐逡逑－＇ｍｕｍ逡逑＇、、邐＇邋＾ｍａｍ逡逑｜深度Ｍ序逡逑ｍｍｍ逡逑ＷＵＫＢＳＵＳ邋９ＷＭＳＫＫ＆Ｓ９邋９ＨＲＳ８Ｍ＾ｔ邋８８Ｍｍｍ逡逑ＫＮＡＲ？列信總逡逑圖３邋ＲＮＡ－Ｓｅｑ實(shí)驗(yàn)流程［７４］逡逑Ｆｉｇ．３邋ＲＮＡ－Ｓｅｑ邋ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ邋ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ逡逑隨著測(cè)序技術(shù)在生命科學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展，傳統(tǒng)的Ｓａｎｇｅｒ法測(cè)序遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足新逡逑型分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)測(cè)序技術(shù)的的需要，越來越多的功能和表型之間的內(nèi)在聯(lián)系逡逑有待通過“組學(xué)”測(cè)序技術(shù)去揭示。與此同時(shí)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號(hào)：2832313