畜禽大腸濕熱證是獸醫(yī)臨床常見多發(fā)證,以腹痛,腹瀉,糞便黏膩,體溫升高,口渴喜飲,脈滑數(shù),舌苔黃等為主要臨床癥狀。常見于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的急性胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等疾病。隨著集約化養(yǎng)殖和畜禽流動(dòng)性的增加,豬、牛和雞等畜禽中與大腸濕熱證相關(guān)的疾病呈明顯上升趨勢,對養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。獸醫(yī)臨床實(shí)踐及相關(guān)研究報(bào)道,傳統(tǒng)中(獸)藥郁金散對大腸濕熱證有較好的治療效果,是獸醫(yī)臨床治療畜禽大腸濕熱證的經(jīng)典方劑之一。本研究在建立郁金散有效成分含量測定的基礎(chǔ)上,通過建立大腸濕熱證大鼠模型,應(yīng)用高、中、低劑量郁金散進(jìn)行治療,檢測各組大鼠血清及腸組織中胃腸激素的含量、腎上腺指數(shù)及血清中CRH、ACTH、CORT的含量。以期從胃腸激素和HPA軸角度,探討郁金散對大腸濕熱證的作用機(jī)理。主要研究結(jié)果如下:1.郁金散有效成分含量測定,采用ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6×150 mm,5μm),流動(dòng)相:甲醇-0.2%水溶液、乙腈-10%醋酸水溶液,梯度洗脫,流速:1mL/min,檢測波長:240 nm、275 nm、425 nm,柱溫:25℃,進(jìn)樣量:20μL。結(jié)果顯示黃芩苷、梔子苷、芍藥苷、沒食子酸、鹽酸小檗堿、姜黃素和大黃素的質(zhì)量濃度分別在1.373~21.24μg.ml~(-1)(r=0.9994),1.438~23.00μg.mL~(-1)(r=0.9999),1.900~30.50μg.mL~(-1)(r=0.9998),10.00~161.0μg.mL~(-1)(r=0.9996),11.90~190.0μg.mL~(-1)(r=0.9998),0.00748~0.036μg.mL~(-1)(r=0.9994),0.0038~0.019μg.mL~(-1)(r=0.9991)范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。平均回收率(n=9)均在99.9%~103.6%范圍內(nèi),RSD在0.3%-1.7%范圍內(nèi)。本方法簡單可靠,可控性強(qiáng),可快速測定郁金散中7種有效成分的含量。2.大腸濕熱證模型建立及一般行為學(xué)觀察Wistar大鼠60只,雌雄各半,隨機(jī)分為正常對照組、模型組、自愈組、郁金散高、中、低劑量治療組,通過自有飲用蜂蜜水,前10天禁食與飼喂充足飼料并灌胃豬油隔日交替進(jìn)行;10-15天灌白酒,并置于高溫高濕環(huán)境;然后腹腔注射大腸桿菌,24 h后再注射一次建立大腸濕熱證大鼠模型。造模成功后,分別給予高、中、低劑量郁金散進(jìn)行治療。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中觀察大鼠的臨床癥狀和體征,然后檢測模型大鼠的血常規(guī)、血生化、血清炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17和IL-23水平以及回腸、結(jié)腸的病理變化。結(jié)果顯示,模型大鼠的臨床癥狀、體征與大腸濕熱證診斷標(biāo)準(zhǔn)相吻合,且機(jī)體出現(xiàn)了炎癥、血脂升高、腸粘膜受損、腸道淤血為特征的病理變化。各劑量郁金散治療后均可改善其臨床癥狀和體征,回調(diào)血常規(guī)、血液生化及血清炎性因子水平,減輕回腸及結(jié)腸的病理變化,并呈現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)關(guān)系,且以高劑量治療效果最好。3.血清及腸組織胃腸激素研究對各組大鼠血清、回腸及結(jié)腸組織中的胃腸激素含量進(jìn)行了檢測。結(jié)果顯示,與正常對照組相比,模型組和自愈組大鼠血清、回腸及結(jié)腸組織中胃動(dòng)素(MTL)、胃泌素(GAS)、P物質(zhì)(SP)含量極顯著或顯著升高(P0.01,P0.05),血管活性腸肽(VIP)無顯著變化,生長抑素(SS)含量極顯著降低(P0.01);與自愈組相比,各劑量郁金散治療后,MTL、GAS、SP、VIP和SS都有不同程度的回調(diào),以高劑量組回調(diào)最為明顯,其中高劑量組大鼠血清、回腸、結(jié)腸中MTL、GAS和SP極顯著或顯著降低(P0.01,P0.05),SS極顯著或顯著升高(P0.01,P0.05)。4.HPA軸功能的研究對各組大鼠腎上腺指數(shù)及血清促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和皮質(zhì)醇(CORT)含量進(jìn)行了檢測。結(jié)果表明,與正常對照組相比,模型組和自愈組大鼠腎上腺指數(shù)及血清中CRH、ACTH、CORT的含量顯著或極顯著性升高(P0.05或P0.01);與自愈組相比,經(jīng)各劑量郁金散治療后,以上各指標(biāo)都有不同程度的回調(diào),以高劑量回調(diào)最為明顯。綜上所述,本實(shí)驗(yàn)成功運(yùn)用了HPLC法同時(shí)測定郁金散中7種有效成分的含量,建立了大腸濕熱證大鼠模型,郁金散對其有較好的治療作用,通過抗腹瀉、抗炎、降血脂、保護(hù)腸粘膜、調(diào)節(jié)胃腸激素紊亂及HPA軸功能亢進(jìn)來治療大腸濕熱證。
【學(xué)位單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S853.74
【部分圖文】：

2-1 郁金散中 7 種活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖igure 2-1 The chemical structures of seven selected active components of YJP 材料與方法.1 實(shí)驗(yàn)儀器表 2-1 主要實(shí)驗(yàn)儀器Table 2-1 The necessary instruments for experiment儀器 型號 生產(chǎn)地高效液相色譜儀 1260 Infinity 美國安捷倫公司恒溫水浴鍋 HH-S 金壇市恒豐儀器廠數(shù)控超聲波清洗器 KQ-300DE 昆山市超聲儀器有限公司恒溫水浴鍋 HH-S 金壇市恒豐儀器廠

18圖 2-2 對照品（A）及供試品（B）分別在相應(yīng)波長下的色譜圖；1.黃芩苷；2.沒食子酸；3.梔子苷；4.芍藥苷；5.鹽酸小檗堿；6.姜黃素；7.大黃素Figure 2-2. HPLC chromatogram of standard solutions (A) and sample solutions (B). 1. baicalin; 2.gallic acid; 3. geniposide; 4. paeoniflorin; 5. berberine; 6. curcumin; 7. emodin

圖 3-1 大腸濕熱證大鼠模型的癥狀 （A），（B）和（C）表示正常大鼠、高溫高濕下后大鼠的精神狀態(tài)；（D）肛門紅腫；（E）肛周和尾根污穢沾有黃色稀便；（F）黏液便；（（H）和（I）黃色稀黏便Fig. 3-1 The symptoms of LIDHS rat model. (A), (B) and (C) show the mental state of normratsinHTHE,andchallengedwithEscherichiacoli,respectively.(D)Theanuswasredands(E) Crissum and tail base were foul and covered with yellow loose stools. (F) Mucous stoo(H) and (I) loose, sticky and yellow stools.2.2 大鼠的體重變化各組大鼠體重如圖 3-2，各組大鼠體重在造模前差異不顯著，造模過程空白對照組大鼠體重逐漸增長，而其他各組在造模前 11 天體重增長緩慢呈形變化，飼喂充足飼料并灌油的一天體重上升，禁食的一天體重下降，但總

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本文編號：2824760