發(fā)布時(shí)間：2020-09-11 12:06

　　 血管生成素樣蛋白5(ANGPTL5)為ANGPTLs家族成員,主要表達(dá)于心臟、脂肪組織。目前,研究顯示ANGPTL5參與體內(nèi)血管生成,同時(shí)其在調(diào)節(jié)脂質(zhì)合成與代謝方面也發(fā)揮著重要作用。本課題組前期研究結(jié)果顯示,在日本和牛內(nèi)臟脂肪和皮下脂肪中ANGPTL5表達(dá)水平存在顯著差異,表明ANGPTL5基因很可能參與并影響牛機(jī)體內(nèi)脂肪沉積。因此,本試驗(yàn)以ANGPTL5作為影響牛脂肪代謝的候選基因,在中國(guó)西門塔爾牛和中國(guó)荷斯坦奶牛群體中對(duì)ANGPTL5基因的遺傳多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè),并統(tǒng)計(jì)分析ANGPTL5基因的SNPs位點(diǎn)與乳品質(zhì)性狀和肉品質(zhì)性狀的相關(guān)性。為進(jìn)一步研究ANGPTL5基因?qū)εＶ敬x的影響,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增,檢測(cè)了牛脂肪組織、肌肉組織和各器官以及前體脂肪細(xì)胞中的表達(dá)水平。在細(xì)胞水平上,將構(gòu)建的p BI-CMV3-ANGPTL5基因過(guò)表達(dá)載體和sh RNA干擾載體分別轉(zhuǎn)染牛乳腺上皮和前體脂肪細(xì)胞,檢測(cè)ANGPTL5基因?qū)?xì)胞內(nèi)甘油三酯含量的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在中國(guó)荷斯坦奶牛群體中共篩查到三個(gè)SNPs位點(diǎn),分別為I1-1776GA位點(diǎn)、I5-2743AC位點(diǎn)和I5-2757TC位點(diǎn)。其中,I5-2743AC和I5-2757TC位點(diǎn)與中國(guó)荷斯坦牛產(chǎn)奶和乳品質(zhì)性狀沒(méi)有相關(guān)關(guān)系;I1-1776GA位點(diǎn)與中國(guó)荷斯坦牛尿素氮含量顯著相關(guān)(p0.05)。在中國(guó)西門塔爾肉牛群體中,檢測(cè)到了四個(gè)SNPs位點(diǎn),分別為I1-1776GA、I2-77TC、I2-1505AT和I2-1391CT位點(diǎn)。其中,I1-1776GA位點(diǎn)與中國(guó)西門塔爾牛前蹄重、后蹄重、肝臟重、脾臟重、背膘厚呈顯著相關(guān)關(guān)系(p0.05);I2-1391CT位點(diǎn)與中國(guó)西門塔爾牛前蹄重、后蹄重、肝臟重、脾臟重、背膘厚呈顯著相關(guān)關(guān)系(p0.05);I2-1391CT和I2-1505AT位點(diǎn)與中國(guó)西門塔爾牛背膘厚呈顯著相關(guān)關(guān)系(p0.05)。ANGPTL5基因在心臟中的表達(dá)水平最高,肝臟中的表達(dá)水平最低。前體脂肪細(xì)胞中ANGPTL5表達(dá)水平,顯著低于乳腺上皮細(xì)胞的表達(dá)水平,皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪中的基因表達(dá)水平顯著高于前體脂肪細(xì)胞。在過(guò)表達(dá)牛ANGPTL5基因的牛前體脂肪細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞中甘油三酯的含量顯著升高(p0.05),而在ANGPTL5基因沉默的牛前體脂肪細(xì)胞中甘油三酯的含量顯著下降(p0.05),ANGPTL5基因沉默的牛乳腺上皮細(xì)胞中甘油三酯的含量顯著升高(p0.05)。綜上所述,本試驗(yàn)結(jié)果表明ANGPTL5基因內(nèi)含子區(qū)域的SNPs位點(diǎn)與牛肉質(zhì)、胴體和乳品質(zhì)性狀均存在顯著相關(guān)性;ANGPTL5基因表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯合成。以上研究結(jié)果為解析ANGPTL5對(duì)脂肪代謝的功能提供研究基礎(chǔ),也為牛乳品質(zhì)和肉品質(zhì)改良以及分子育種提供功能基因和遺傳標(biāo)記。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S823
【部分圖文】：

圖 1.1 血液基因組 DNA 瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果注：1~6.中國(guó)荷斯坦奶牛血液基因組 DNAThe agarose electrophoresis result of bovine blood genNote：1~6. The genomic DNA of Chinese Holstein cow blood增結(jié)果取基因組 DNA 為模板，用設(shè)計(jì)的 6 對(duì)引物進(jìn)行擴(kuò)增2、3、4、6 泳道 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度與預(yù)期相符，條帶均 泳道 PCR 產(chǎn)物有兩條帶，引物特異性不好，產(chǎn)生非續(xù)膠回收測(cè)序，結(jié)果見(jiàn)圖 1.2。

PTL5 基因中國(guó)荷斯坦奶�；斐啬０� PCR 產(chǎn)物瓊脂糖注：M.DL2000Marker, 1～6.PCR 產(chǎn)物。he result of PCR amplification of ANGPTL5 gene in Chindairy cowsNote: M. DL2000 marker, 1～6. Production of PCR.斯坦奶牛群體中 ANGPLT5 基因 SNPs 位點(diǎn)篩查 PCR 擴(kuò)增后送金唯智測(cè)序，通過(guò)分析混池測(cè)序結(jié)果R 產(chǎn)物中存在一處明顯的雙峰，是 I1-1776 處的 G>A 荷斯坦奶牛群體中，ANGPTL5 基因在這兩個(gè)位點(diǎn)具果見(jiàn)圖 1.3，引物 6 擴(kuò)增的 PCR 產(chǎn)物中存在兩處明顯 處的 A>C 顛換和 I5-2757 處的 T>C 轉(zhuǎn)換，由此可得，和 SNPs 位點(diǎn)篩查測(cè)序，在中國(guó)荷斯坦奶牛群體中針對(duì)個(gè) SNPs 位點(diǎn)。

圖 1.3 中國(guó)荷斯坦牛 ANGPTL5 基因混池 PCR 產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果注：A. I1-1776 G>A 位點(diǎn)測(cè)序圖，B. I5-2743A>C 位點(diǎn)測(cè)序圖，C .I5-2757 T>C 位點(diǎn)測(cè)序圖。Fig 1.3 The sequencing results of ANGPTL5 gene for Chinese Holstein dairy cowssamplesNote: A. I1-1776 G>A sequencing result, B.I5-2743 A>C locus sequencing result, C.I5-2757 T>Clocus sequencing result.基于在混池測(cè)序結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，在引物 E6 擴(kuò)增的 PCR 產(chǎn)物中存在兩個(gè) SNPs位點(diǎn)，而且片段大小適中，能夠通過(guò)一個(gè)測(cè)序反應(yīng)同時(shí)對(duì)兩個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，因此選用直接測(cè)序的方法來(lái)檢測(cè)該中國(guó)荷斯坦奶牛群體的 SNP。進(jìn)行該群體單個(gè)樣品 PCR 擴(kuò)增后，將部分產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，選取電泳條帶清晰均一，無(wú)二聚體和抹帶的PCR產(chǎn)物送測(cè)序，共對(duì)103個(gè)樣本進(jìn)行測(cè)序。最終，I5-2743A>C位點(diǎn)獲得 96 個(gè)有效結(jié)果，I5-2757T>C 位點(diǎn)也獲得了 96 個(gè)有效結(jié)果。對(duì)引物 2擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物也采取直接測(cè)序的方法，共對(duì)116個(gè)樣本進(jìn)行測(cè)序，最終，I1-1776G>A 位點(diǎn)獲得 113 個(gè)有效結(jié)果。各 SNPs 不同基因型部分測(cè)序結(jié)果如圖 1.4 所示。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 杜琛;付紹印;韓志玲;孟麗云;愛(ài)倫高娃;高麗霞;成立新;張文廣;李金泉;;絨山羊肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞的基因表達(dá)分析[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2013年10期

2 王麗;孫超;康靖全;;鈣信號(hào)調(diào)節(jié)小鼠前體脂肪細(xì)胞分化和脂質(zhì)蓄積的機(jī)制[J];生物工程學(xué)報(bào);2009年05期

3 王博;吳江維;于太永;楊公社;;干擾素-γ對(duì)豬前體脂肪細(xì)胞分化的影響[J];自然科學(xué)進(jìn)展;2008年11期

4 張萌萌;魏勝娟;王藝如;王深圳;鄭月英;鄭豪;顏培實(shí);;牛肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞的分離培養(yǎng)及分化相關(guān)基因的表達(dá)規(guī)律研究[J];畜牧與獸醫(yī);2018年05期

5 陳妍;張國(guó)華;陸會(huì)寧;盧建雄;;八眉豬肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞的分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年13期

6 張艷芳;任陽(yáng);朱琳娜;單體中;汪以真;;豬肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞的體外培養(yǎng)[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2011年01期

7 羅燕;趙宗勝;谷新利;邵永斌;時(shí)敏;;綿羊肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞的體外培養(yǎng)[J];石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年03期

8 張朝;楊揚(yáng);龐衛(wèi)軍;孫超;楊公社;;白藜蘆醇對(duì)豬前體脂肪細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)理[J];生物工程學(xué)報(bào);2010年08期

9 單保森;劉鑫;羅武;邵勇鋼;韋偉;陳杰;張立凡;;siRNA干擾CAT基因表達(dá)對(duì)豬皮下前體脂肪細(xì)胞分化的影響[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2019年04期

10 徐鐵山;張小輝;劉佩;廖輝;李亦昕;;檸檬苦素對(duì)牛前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中核纖層蛋白基因表達(dá)的影響[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2017年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 仲偉靜;鄭春田;林映才;蔣宗勇;楊琳;;共軛亞油酸對(duì)離體培養(yǎng)豬前體脂肪細(xì)胞增殖與分化的影響[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第九次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2006年

2 李舜;周杰;鄭智勇;陸春瑞;石水云;;共軛亞油酸對(duì)大鼠前體脂肪細(xì)胞增殖與分化的影響[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第九次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2006年

3 肖成;金海國(guó);魏天;曹陽(yáng);;綿羊前體脂肪細(xì)胞分離培養(yǎng)及脂代謝相關(guān)基因表達(dá)規(guī)律研究[A];2018年全國(guó)養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2018年

4 李虹儀;習(xí)欠云;張永亮;;TNF-α在脂肪中的研究進(jìn)展[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

5 高妍;李付娟;姜昊;陳承禎;張嘉保;;脂聯(lián)素基因?qū)ωi前體脂肪細(xì)胞分化的影響[A];中國(guó)豬業(yè)科技大會(huì)暨中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2015年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2015年

6 張國(guó)華;屈長(zhǎng)青;楊公社;;豬前體脂肪細(xì)胞的分離培養(yǎng)[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

7 盛晟;周杰;張佳;邵康;吳小雪;李維新;;重組脂聯(lián)素對(duì)豬原代脂肪細(xì)胞的影響[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

8 許晴;林森;朱江江;王永;林亞秋;;山羊肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性分析[A];2018年全國(guó)養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2018年

9 楊揚(yáng);楊公社;龐衛(wèi)軍;;豬Sirt1基因慢病毒干擾載體的構(gòu)建及其對(duì)前體脂肪細(xì)胞凋亡的初步研究[A];中國(guó)動(dòng)物遺傳育種研究進(jìn)展——第十五次全國(guó)動(dòng)物遺傳育種學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2009年

10 喬利英;劉建華;潘洋洋;劉文忠;;MiR-124-3p調(diào)控綿羊前體脂肪細(xì)胞分化的研究[A];2018年全國(guó)養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2018年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 支勇平;我國(guó)利用生物技術(shù)控制豬肉脂肪含量研究取得重大突破[N];陜西日?qǐng)?bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李東偉;miR-143和miR-378對(duì)牛前體脂肪細(xì)胞成脂分化的調(diào)控作用研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 潘洋洋;綿羊皮下脂肪小RNA組及miR-124-3p調(diào)控前體脂肪細(xì)胞分化的研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

3 徐小春;綿羊尾部脂肪代謝相關(guān)調(diào)控基因的作用研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 張貞貞;miR-103通過(guò)結(jié)合circRNAs調(diào)節(jié)機(jī)體脂肪發(fā)育的分子機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2018年

5 林亞秋;RXRα在豬前體脂肪細(xì)胞分化中的作用及其機(jī)理研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

6 羅桂芬;PGC-1α和PGC-1β表達(dá)調(diào)控及其對(duì)脂肪細(xì)胞線粒體發(fā)育的作用研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

7 龐衛(wèi)軍;豬FoxO1基因cDNA的克隆及對(duì)前體脂肪細(xì)胞和成肌細(xì)胞分化的調(diào)控作用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

8 李惠俠;Wnt/β-catenin信號(hào)通路在豬ADSCs向脂肪細(xì)胞分化中的作用及機(jī)理研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

9 程佳;RBP4調(diào)控豬前體脂肪細(xì)胞分化的機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

10 盧榮華;PGC-1β在大鼠前體脂肪細(xì)胞分化及線粒體發(fā)育中的作用及其機(jī)理研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 葛言亮;牛ANGPTL5基因遺傳多態(tài)性分析及對(duì)牛乳腺上皮和前體脂肪細(xì)胞甘油三脂含量的影響[D];吉林大學(xué);2019年

2 鄭月英;原花青素對(duì)豬前體脂肪細(xì)胞增殖與分化影響的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

3 席鳳雪;miR-214-3p對(duì)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞分化的作用及機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

4 張慧芳;miR-10a-5p在前體脂肪細(xì)胞增殖分化中的作用及機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

5 秦晉;lncIMF4對(duì)豬肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞增殖、分化與自噬的作用研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

6 馬雪瑤;Bta-miR-130調(diào)控秦川牛前體脂肪細(xì)胞分化的作用機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

7 魏海燕;Hhip對(duì)前體脂肪細(xì)胞成脂的作用與機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

8 王香明;DNMT3A對(duì)豬肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞增殖與分化的作用機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2018年

9 林森;KLF4對(duì)山羊肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控作用[D];西南民族大學(xué);2018年

10 趙艷艷;miR-142和miR-144靶向FoxO1基因調(diào)節(jié)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化的研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2816652