【摘要】：本文以中草藥馬齒莧為研究主線,利用從仔豬泄瀉腸道中及其他相關(guān)病料,分離、篩選出導(dǎo)致泄瀉的的產(chǎn)ESBLs大腸桿菌構(gòu)建大鼠濕熱型泄瀉模型,探討馬齒莧對(duì)該大腸桿菌構(gòu)建的動(dòng)物模型的治療作用研究。試驗(yàn)主要方法和結(jié)果如下:1、從泄瀉仔豬的病料中分離病原菌,經(jīng)16sRNA鑒定為大腸桿菌。PCR檢測其毒力基因,可知其含有細(xì)菌含有多重耐藥調(diào)控基因marA、抗自由基基因sodA、卷曲菌毛基因csgA、腦膜炎相關(guān)和溫度調(diào)節(jié)的菌毛基因mat、脂多糖(LPS)基因R1、外膜蛋白基因ompA、Ⅰ型菌毛(D-甘露糖特異性粘附)基因fimC、血清存活基因iss、耶爾森氏鐵質(zhì)基因fyuA這9個(gè)毒力因子。該大腸桿菌的致瀉毒力可能與R1、csgA、fimC有關(guān)。2、采用二倍微量稀釋法對(duì)受試大腸桿菌進(jìn)行抗菌藥、馬齒莧水提物MIC的檢測;再以馬齒莧水提物的1/2MIC、抗菌藥的2MIC進(jìn)行細(xì)菌傳代試驗(yàn)。對(duì)該菌株的耐藥基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測。結(jié)果得該大腸桿菌攜帶耐藥基因有:磺胺類:sul2;四環(huán)素類:tetA;β-內(nèi)酰胺類:CTX-M-U;質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類:qnrD、qepA;耐磷霉素:fosA3;是一株多重耐藥的產(chǎn)ESBLs大腸桿菌。根據(jù)2018版CLSI標(biāo)準(zhǔn)1,受試菌株對(duì)以上類別抗菌藥均表現(xiàn)為耐藥,而傳代試驗(yàn)則表明,馬齒莧水提物能增強(qiáng)受試菌株對(duì)大部分抗菌藥的敏感性,使其MIC下降。3、動(dòng)物模型試驗(yàn):將SD大鼠隨機(jī)的分為6組:Ⅰ空白對(duì)照組,Ⅱ模型組,Ⅲ自愈組,Ⅳ馬齒莧低劑量治療組,V馬齒莧中劑量治療組,Ⅵ馬齒莧高劑量治療組。通過對(duì)大鼠實(shí)行高脂飲食、高溫高濕環(huán)境和腹腔注射致瀉型大腸桿菌液構(gòu)建濕熱型泄瀉大鼠模型;按照低、中、高劑量,用馬齒莧的水提取物對(duì)試驗(yàn)大鼠進(jìn)行灌胃治療。對(duì)各組大鼠血常規(guī)、肝腎功能指標(biāo)、炎癥因子(TNF-α IL-6、IL-17、IL-23)、臟器系數(shù)(肝、脾、胸腺)以及各臟器的病理組織學(xué)進(jìn)行檢查。結(jié)果顯示:模型組符合濕熱型泄瀉標(biāo)準(zhǔn),判定模型建立成功;試驗(yàn)大鼠機(jī)體出現(xiàn)了全身性炎癥、血脂水平上升,免疫功能下降,病理組織學(xué)檢查可見多臟器出血、變性、壞死。馬齒莧水提物通過促炎癥因子的抑制,對(duì)大鼠炎癥網(wǎng)絡(luò)功能的調(diào)控,對(duì)免疫器官的恢復(fù)保護(hù)功能,并具有止瀉、降血脂、降體溫的功效;對(duì)臟器的出血、變性情況也有一定的改善作用;并且馬齒莧的療效隨著劑量的增加而增強(qiáng)。表明馬齒莧對(duì)濕熱型泄瀉模型具有良好的治療作用。本試驗(yàn)初步探究了馬齒莧中藥對(duì)產(chǎn)ESBLs大腸桿菌構(gòu)建的大鼠濕熱型泄瀉模型的作用,為馬齒莧中藥的對(duì)大腸桿菌體內(nèi)應(yīng)用提供參考。
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S853.74
【圖文】：

圖2一1分離株在麥康凱形態(tài)

一分離株在伊紅美藍(lán)形態(tài)

Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３邋Ｇｒａｍ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｉｓｏｌａｔｅｓ逡逑出分離株在麥康凱培養(yǎng)基中為紅色菌落，在伊紅美藍(lán)中為從形態(tài)學(xué)中，我們可以觀察到：分離菌株為紅色短桿狀菌初步判定分離株為大腸桿菌。逡逑１６ＳＲＮＡＰＣＲ檢出后條帶送武漢金開瑞生物工程有限公司菌。逡逑擴(kuò)增結(jié)果逡逑示。逡逑圖知道：該細(xì)菌含有多重耐藥調(diào)控基因ｍａｒＡ、抗自由基

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本文編號(hào)：2795718