【摘要】：胸腺(thymus)是T細胞發(fā)育、分化和成熟的場所,骨髓中淋巴祖細胞在多種趨化因子的作用下進入胸腺,在胸腺微環(huán)境內發(fā)育分化為成熟的T細胞,進入外周血和淋巴器官中,成為機體健康的衛(wèi)士。但動物胸腺的增齡性萎縮將導致其功能減退,機體也隨之衰老,疾病叢生。因此,掌握動物胸腺發(fā)育的基本規(guī)律,探索其萎縮的機理和能夠增強其功能抑制其退化的有效方法,對疾病的預防和診斷、抵抗免疫衰老具有非常重要的現實意義。目前關于雞胸腺生長發(fā)育過程中的基因表達變化和分子機制的研究鮮有報道。因此,本研究以科寶肉雞為研究對象,采用HE染色、甲苯胺藍染色、免疫組織化學染色、RNA-Seq以及實時熒光定量PCR等方法研究了雞胸腺生長發(fā)育過程中組織結構和基因表達變化規(guī)律,主要研究內容和結果如下:1.雞胸腺發(fā)育過程中重量和指數的變化規(guī)律測定了0w、1w、5w、9w、18w和27w雞(n=6)的體重及胸腺重量,并計算胸腺指數(胸腺重量(g)/體重(kg))。隨著周齡的增加,胸腺重量呈現先上升后下降的趨勢,18w時胸腺重量達到最大,27w時萎縮嚴重。0w到1w,胸腺指數呈上升趨勢,從1w到27w,胸腺指數呈下降趨勢。2.雞胸腺發(fā)育過程中組織結構的變化規(guī)律對不同周齡雞胸腺組織進行石蠟切片,并進行HE染色。結果顯示,胸腺分為外周的皮質和內層的髓質,皮質主要由淋巴細胞和少量上皮細胞構成,著色較深;髓質主要由上皮細胞和少量淋巴細胞構成,著色較淺,其中有典型的胸腺小體結構。隨著周齡增加,雞胸腺皮質逐漸變薄,髓質面積增加,皮髓面積比逐漸減小,胸腺中血管和胸腺小體呈增多趨勢。3.雞胸腺發(fā)育過程中細胞增殖的變化規(guī)律對不同周齡雞胸腺組織切片進行免疫組織化學染色,檢測PCNA陽性細胞的分布和發(fā)育變化規(guī)律。結果顯示,PCNA陽性細胞在胸腺皮質和髓質均有分布,隨周齡增加,陽性細胞數目逐漸減少。以上結果表明,雞胸腺中細胞增殖活動隨著周齡的增加而減弱。4.雞胸腺發(fā)育過程中肥大細胞的變化規(guī)律對不同周齡雞胸腺組織切片進行甲苯胺藍染色,檢測肥大細胞的分布和發(fā)育變化規(guī)律。結果顯示,肥大細胞主要位于胸腺髓質和血管周圍。肥大細胞數目在1w升高然后下降,在9w又升高以后逐漸減少。5.雞胸腺發(fā)育過程中基因表達的變化規(guī)律采用RNA-Seq技術檢測雞胸腺發(fā)育過程中的基因表達變化規(guī)律。測序共獲得原始數據21723697300bp,經過過濾質控去除低質量讀段后,剩余有效數據21708736650bp,有效讀段434174733條,平均24120819條有效讀段,有效讀段率均大于99.8%,與參考基因組比對率均達到了90%。根據基因表達量進行表達趨勢分析,共獲得顯著富集趨勢10個。對持續(xù)上調趨勢Profile39和持續(xù)下調趨勢Profile8進行GO和KEGG通路富集分析發(fā)現,profile39(即上調趨勢)GO富集主要與炎癥、免疫、信號轉導、凋亡等有關;KEGG富集主要與免疫系統(tǒng)、分泌系統(tǒng)、感染性疾病、信號傳遞、細胞活動和脂質代謝有關;profile8(即下調趨勢)GO富集主要與遺傳物質相關組成、傳遞、修復以及能量代謝等有關;KEGG富集主要與細胞生長和死亡、遺傳信息傳遞、能量和碳水化合物代謝、氨基酸和核苷酸代謝有關。對下調趨勢細胞周期通路中與細胞增殖和遺傳信息傳遞密切相關的幾個關鍵基因PCNA、CDK1、CCNA2、CCNB2進行實時熒光定量PCR檢測,發(fā)現其變化規(guī)律和測序結果一致,隨周齡增加表達量持續(xù)降低。以上研究結果表明,隨著周齡增加,細胞增殖減少,胸腺結構完整性被逐漸破壞,微環(huán)境發(fā)生變化,導致胸腺重量減少。胸腺中遺傳物質傳遞被破壞阻斷,胸腺中物質代謝水平降低,脂肪代謝增加,炎癥反應和免疫反應增強。
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S831.2
【圖文】：

雞胸腺生長發(fā)育過程中基因表達規(guī)律研究3 結果與分析3.1 不同周齡雞胸腺重量和胸腺指數變化規(guī)律對雞胸腺重量和胸腺指數統(tǒng)計分析發(fā)現，隨周齡增加胸腺重量不斷增加，在18w重量最大，然后開始下降；雞胸腺指數 0w 到 1w 呈增長趨勢，隨后隨周齡增加胸腺指數逐漸減�。▓D 3-1）。

圖 3-2 不同周齡雞胸腺組織結構變化規(guī)律（HE 染色）Fig.3-2 The histological changes of chicken thymus with the increase of age (HE staining)注：圖片放大倍數為 10×10，bar 為 200μ m。C 代表皮質，M 代表髓質。Note: The magnification of these pictures is 10×10 and bar is 200μm. C represents the cortex, M represents themedulla.

圖 3-2 不同周齡雞胸腺組織結構變化規(guī)律（HE 染色）The histological changes of chicken thymus with the increase of age (HE數為 10×10，bar 為 200μ m。C 代表皮質，M 代表髓質。ification of these pictures is 10×10 and bar is 200μm. C represents the cortex

【參考文獻】

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本文編號：2787637