【摘要】：胸腺(thymus)是T細胞發(fā)育、分化和成熟的場所,骨髓中淋巴祖細胞在多種趨化因子的作用下進入胸腺,在胸腺微環(huán)境內(nèi)發(fā)育分化為成熟的T細胞,進入外周血和淋巴器官中,成為機體健康的衛(wèi)士。但動物胸腺的增齡性萎縮將導致其功能減退,機體也隨之衰老,疾病叢生。因此,掌握動物胸腺發(fā)育的基本規(guī)律,探索其萎縮的機理和能夠增強其功能抑制其退化的有效方法,對疾病的預防和診斷、抵抗免疫衰老具有非常重要的現(xiàn)實意義。目前關(guān)于雞胸腺生長發(fā)育過程中的基因表達變化和分子機制的研究鮮有報道。因此,本研究以科寶肉雞為研究對象,采用HE染色、甲苯胺藍染色、免疫組織化學染色、RNA-Seq以及實時熒光定量PCR等方法研究了雞胸腺生長發(fā)育過程中組織結(jié)構(gòu)和基因表達變化規(guī)律,主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1.雞胸腺發(fā)育過程中重量和指數(shù)的變化規(guī)律測定了0w、1w、5w、9w、18w和27w雞(n=6)的體重及胸腺重量,并計算胸腺指數(shù)(胸腺重量(g)/體重(kg))。隨著周齡的增加,胸腺重量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,18w時胸腺重量達到最大,27w時萎縮嚴重。0w到1w,胸腺指數(shù)呈上升趨勢,從1w到27w,胸腺指數(shù)呈下降趨勢。2.雞胸腺發(fā)育過程中組織結(jié)構(gòu)的變化規(guī)律對不同周齡雞胸腺組織進行石蠟切片,并進行HE染色。結(jié)果顯示,胸腺分為外周的皮質(zhì)和內(nèi)層的髓質(zhì),皮質(zhì)主要由淋巴細胞和少量上皮細胞構(gòu)成,著色較深;髓質(zhì)主要由上皮細胞和少量淋巴細胞構(gòu)成,著色較淺,其中有典型的胸腺小體結(jié)構(gòu)。隨著周齡增加,雞胸腺皮質(zhì)逐漸變薄,髓質(zhì)面積增加,皮髓面積比逐漸減小,胸腺中血管和胸腺小體呈增多趨勢。3.雞胸腺發(fā)育過程中細胞增殖的變化規(guī)律對不同周齡雞胸腺組織切片進行免疫組織化學染色,檢測PCNA陽性細胞的分布和發(fā)育變化規(guī)律。結(jié)果顯示,PCNA陽性細胞在胸腺皮質(zhì)和髓質(zhì)均有分布,隨周齡增加,陽性細胞數(shù)目逐漸減少。以上結(jié)果表明,雞胸腺中細胞增殖活動隨著周齡的增加而減弱。4.雞胸腺發(fā)育過程中肥大細胞的變化規(guī)律對不同周齡雞胸腺組織切片進行甲苯胺藍染色,檢測肥大細胞的分布和發(fā)育變化規(guī)律。結(jié)果顯示,肥大細胞主要位于胸腺髓質(zhì)和血管周圍。肥大細胞數(shù)目在1w升高然后下降,在9w又升高以后逐漸減少。5.雞胸腺發(fā)育過程中基因表達的變化規(guī)律采用RNA-Seq技術(shù)檢測雞胸腺發(fā)育過程中的基因表達變化規(guī)律。測序共獲得原始數(shù)據(jù)21723697300bp,經(jīng)過過濾質(zhì)控去除低質(zhì)量讀段后,剩余有效數(shù)據(jù)21708736650bp,有效讀段434174733條,平均24120819條有效讀段,有效讀段率均大于99.8%,與參考基因組比對率均達到了90%。根據(jù)基因表達量進行表達趨勢分析,共獲得顯著富集趨勢10個。對持續(xù)上調(diào)趨勢Profile39和持續(xù)下調(diào)趨勢Profile8進行GO和KEGG通路富集分析發(fā)現(xiàn),profile39(即上調(diào)趨勢)GO富集主要與炎癥、免疫、信號轉(zhuǎn)導、凋亡等有關(guān);KEGG富集主要與免疫系統(tǒng)、分泌系統(tǒng)、感染性疾病、信號傳遞、細胞活動和脂質(zhì)代謝有關(guān);profile8(即下調(diào)趨勢)GO富集主要與遺傳物質(zhì)相關(guān)組成、傳遞、修復以及能量代謝等有關(guān);KEGG富集主要與細胞生長和死亡、遺傳信息傳遞、能量和碳水化合物代謝、氨基酸和核苷酸代謝有關(guān)。對下調(diào)趨勢細胞周期通路中與細胞增殖和遺傳信息傳遞密切相關(guān)的幾個關(guān)鍵基因PCNA、CDK1、CCNA2、CCNB2進行實時熒光定量PCR檢測,發(fā)現(xiàn)其變化規(guī)律和測序結(jié)果一致,隨周齡增加表達量持續(xù)降低。以上研究結(jié)果表明,隨著周齡增加,細胞增殖減少,胸腺結(jié)構(gòu)完整性被逐漸破壞,微環(huán)境發(fā)生變化,導致胸腺重量減少。胸腺中遺傳物質(zhì)傳遞被破壞阻斷,胸腺中物質(zhì)代謝水平降低,脂肪代謝增加,炎癥反應和免疫反應增強。
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S831.2
【圖文】：

雞胸腺生長發(fā)育過程中基因表達規(guī)律研究3 結(jié)果與分析3.1 不同周齡雞胸腺重量和胸腺指數(shù)變化規(guī)律對雞胸腺重量和胸腺指數(shù)統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，隨周齡增加胸腺重量不斷增加，在18w重量最大，然后開始下降；雞胸腺指數(shù) 0w 到 1w 呈增長趨勢，隨后隨周齡增加胸腺指數(shù)逐漸減�。▓D 3-1）。

圖 3-2 不同周齡雞胸腺組織結(jié)構(gòu)變化規(guī)律（HE 染色）Fig.3-2 The histological changes of chicken thymus with the increase of age (HE staining)注：圖片放大倍數(shù)為 10×10，bar 為 200μ m。C 代表皮質(zhì)，M 代表髓質(zhì)。Note: The magnification of these pictures is 10×10 and bar is 200μm. C represents the cortex, M represents themedulla.

圖 3-2 不同周齡雞胸腺組織結(jié)構(gòu)變化規(guī)律（HE 染色）The histological changes of chicken thymus with the increase of age (HE數(shù)為 10×10，bar 為 200μ m。C 代表皮質(zhì)，M 代表髓質(zhì)。ification of these pictures is 10×10 and bar is 200μm. C represents the cortex

【參考文獻】

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本文編號：2787637