【摘要】：分子育種是用于改良現(xiàn)代奶牛群體的重要手段。而對(duì)于奶牛群體而言,種公牛對(duì)奶牛群體的遺傳貢獻(xiàn)超過(guò)70%,因而精液品質(zhì)性狀對(duì)于奶牛群體的影響不言而喻。本研究前期對(duì)高通量測(cè)序數(shù)據(jù)篩選出表達(dá)存在差異且與精子活力相關(guān)的基因作為候選基因,采用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行后期驗(yàn)證,從而篩選出影響公牛精液品質(zhì)的候選基因作為分子遺傳標(biāo)記。為后期的分子育種工作提供參考依據(jù)。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)FBXW11在不同精液品質(zhì)樣品中其表達(dá)存在差異(P0.05)。而在精子成熟的過(guò)程中離不開(kāi)FBXW11型泛素連接酶對(duì)睪丸中蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)。因此,我們將FBXW11基因作為候選基因,并進(jìn)行差異表達(dá)驗(yàn)證及產(chǎn)生差異表達(dá)的原因進(jìn)行分析。研究結(jié)果顯示精液品質(zhì)差異的中國(guó)荷斯坦奶牛的睪丸樣品中FBXW11表達(dá)存在差異(P0.05),并且在研究中發(fā)現(xiàn)FBXW11基因在睪丸樣品中存在三個(gè)剪接異構(gòu)體。而可變剪接對(duì)于調(diào)節(jié)基因表達(dá)和豐富轉(zhuǎn)錄本數(shù)量具有重要意義,并且在樣品中未能檢測(cè)到全長(zhǎng)FBXW11基因的存在,這間接證明了可變剪接對(duì)于FBXW11的調(diào)控進(jìn)而對(duì)精液品質(zhì)產(chǎn)生影響。免疫組化和蛋白免疫印跡試驗(yàn)驗(yàn)證FBXW11蛋白表達(dá)水平在不同樣品中表達(dá)量存在差異(P0.05),熒光定量試驗(yàn)和半定量試驗(yàn)分析FBXW11基因的表達(dá)在不同分組的樣品中同樣存在差異(P0.05)。因此,驗(yàn)證試驗(yàn)與測(cè)序結(jié)果一致,即FBXW11基因在不同精子活力的樣品中表達(dá)存在差異(P0.05)。并且對(duì)FBXW11基因產(chǎn)生差異表達(dá)的原因進(jìn)行了分析,分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)FBXW11基因兩個(gè)剪接異構(gòu)體在不同精液品質(zhì)樣品中的表達(dá)比例發(fā)生改變,從而導(dǎo)致了FBXW11在不同樣品間的表達(dá)存在差異。之后對(duì)剪接體表達(dá)比例產(chǎn)生的原因進(jìn)行分析,研究發(fā)現(xiàn)一個(gè)位于FBXW11基因第一外顯子的CpG島的甲基化水平在不同樣品間存在差異(P0.05)。最終試驗(yàn)結(jié)論為DNA甲基化與可變剪接共同調(diào)節(jié)FBXW11基因的表達(dá)從而對(duì)精液品質(zhì)產(chǎn)生影響。
【學(xué)位授予單位】：河北工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S823
【圖文】：

圖 2-1 H3、L3 樣品 HE 染色切片結(jié)果Fig. 2-1 HE staining results of H3, L32.5.2 抗體的選擇與分析對(duì)候選基因在樣品中的蛋白表達(dá)量進(jìn)行分析，驗(yàn)證 FBXW11 基因樣品間的差異情況�？贵w購(gòu)自中國(guó)商業(yè)公司（武漢三鷹），將抗體信息歸納整理如表 2-4，表 2-4 抗體信息Table 2-4 Antibody information抗體信息 FBXW11來(lái)源 兔同種型 IgG純化方式 抗原親和純化儲(chǔ)存方式0.1%疊氮化鈉 PBS 溶液和 PH7.3含 50%甘油溶液，-20℃保存�？乖畔⑷缦卤� 2-5。

河北工程大學(xué)碩士學(xué)位論文表 2-5 抗原信息Table2-5 Immunogenic Information抗原信息 FBXW11抗原 FBXW11 fusion proteinAg3761全名F-box and WD repeat domain containing11基因 ID 23291GenBank 登錄號(hào) BC026213分子量 542aa,61 kDa將抗體的參考氨基酸序列和 mRNA 序列與荷斯坦奶牛牛中 FBXW11 基因的mRNA 序列和蛋白質(zhì)序列進(jìn)行比對(duì)，整理結(jié)果如圖 2-2。

全名11基因 ID 23291GenBank 登錄號(hào) BC026213分子量 542aa,61 kDa將抗體的參考氨基酸序列和 mRNA 序列與荷斯坦奶牛牛中 FBXW11 基因的mRNA 序列和蛋白質(zhì)序列進(jìn)行比對(duì)，整理結(jié)果如圖 2-2。圖 2-2 mRNA 序列比對(duì)結(jié)果Fig. 2-2 mRNA Sequence alignment result

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本文編號(hào)：2773917