【摘要】：防御素(defensins)是一類富含半胱氨酸的陽(yáng)離子小分子抗菌肽,廣泛分布于生物界中,是最大的內(nèi)源性抗菌肽家族成員,β-防御素在綿羊瘤胃上皮細(xì)胞中的表達(dá)量最大,益生菌可作用于上皮細(xì)胞而提高機(jī)體免疫力。本研究選用益生枯草芽孢桿菌,研究其對(duì)體外培養(yǎng)的綿羊瘤胃上皮細(xì)胞β-防御素表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。首先,在體外培養(yǎng)綿羊瘤胃上皮細(xì)胞,然后用不同濃度的枯草芽孢桿菌分別對(duì)綿羊瘤胃上皮細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)間的刺激,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(realtime fluorescence quantitative PCR, RT-PCR)從mRNA水平及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)技術(shù)從蛋白水平檢測(cè)刺激后上皮細(xì)胞中綿羊β-防御素-1(Sheep Beta-Defensin-1, SBD-1)基因表達(dá)水平的差異,并對(duì)枯草芽孢桿菌對(duì)SBD-1誘導(dǎo)的信號(hào)通路進(jìn)行了探討。結(jié)果表明：菌液濃度為1010 cfu/mL且刺激時(shí)間為8h時(shí),SBD-1的表達(dá)量最大,且不同的菌液濃度對(duì)SBD-1的表達(dá)均有誘導(dǎo)作用,通過(guò)比較,菌液濃度為109、1010、1011cfu/mL刺激下SBD-1的表達(dá)量與空白相比差異極顯著(P0.01),且mRNA水平與蛋白水平的結(jié)果基本一致。枯草芽孢桿菌誘導(dǎo)SBD-1的表達(dá)是由絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信號(hào)通路中的p38分裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)通路、c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK 1/2)通路介導(dǎo)的,并且p38 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路途徑是主要通路。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S826
【圖文】：

邐‘逡逑用０．２５％的膜蛋白酶對(duì)瘤胃上皮組織進(jìn)行連續(xù)消化后，實(shí)時(shí)在顯微境下觀察，當(dāng)逡逑看到單個(gè)存在的、大小均一且折光度較高的細(xì)胞，并且數(shù)量較多時(shí)（圖１），即可收逡逑集培養(yǎng)。所培養(yǎng)的細(xì)胞４ｄ后觀察，貼壁的細(xì)胞有的單個(gè)存在，有的呈島咱狀出現(xiàn)，逡逑形態(tài)多為中間厚四周薄的楠圓形或圓形（圖２）。培養(yǎng)６邋ｄ后觀察，呈現(xiàn)為小島鳴狀的逡逑細(xì)胞團(tuán)生長(zhǎng)成了大片細(xì)胞（圖３）。培養(yǎng)８邋ｄ后觀察，片狀細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)，相互連接在逡逑一起，細(xì)胞數(shù)量達(dá)到培養(yǎng)瓶的８０％？９０％，有的幾乎鋪滿了整個(gè)細(xì)胞瓶，細(xì)胞狀態(tài)很逡逑好，呈鶴巧石鋪路狀，形狀多呈現(xiàn)為圓形或多角形，并且，界限較為清晰，因生長(zhǎng)密逡逑運(yùn)大，導(dǎo)致個(gè)別細(xì)胞的形態(tài)有所變化（圖４），這時(shí)的細(xì)胞可Ｗ進(jìn)行傳代培養(yǎng)。逡逑：。，，畫(huà)義秘；：＇；：：．一邐■逡逑V/U味婂義希у逋跡畢蟮牡拿嘌蛄鑫岡

本文編號(hào)：2762753