【摘要】：本試驗(yàn)采用PCR-SSCP技術(shù)檢測(cè)了京海黃雞中_Ffbxl5(F-box and lecucine-rich repeat protein5)基因以及Myf6(myogenicfactor6)基因的多態(tài)性,并且運(yùn)用一般線性模型與京海黃雞的經(jīng)濟(jì)性狀進(jìn)行相關(guān)聯(lián)分析,旨在探討這兩個(gè)候選基因影響生長(zhǎng)、繁殖性狀的分子機(jī)理;同時(shí),我們利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究?jī)蓚�(gè)候選基因在京海黃雞和金茅黃雞公母雞的不同組織的表達(dá)譜,以及不同生長(zhǎng)時(shí)期的表達(dá)規(guī)律。主要研究結(jié)果如下:1.以Fbxl5基因?yàn)楹蜻x基因,對(duì)該基因CDS區(qū)進(jìn)行了單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)。結(jié)果表明:試驗(yàn)共發(fā)現(xiàn)了四個(gè)突變位點(diǎn),其中T14286C位于外顯子3上,T14291C位于內(nèi)含子3上,T15780C位于外顯子4上,G19048A位于外顯子5上,除了 T14286C突變?cè)斐闪司幋a氨基酸從亮氨酸變成脯氨酸,是非同義突變外,其余位點(diǎn)均未造成編碼氨基酸的改變,屬于同義突變。我們利用PHASE2.1軟件對(duì)該基因檢測(cè)到的4個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行單倍型分析,發(fā)現(xiàn)在京海黃雞12世代核心群母雞群體中,這4個(gè)突變位點(diǎn)形成了 8種單倍型。與生長(zhǎng)性狀關(guān)聯(lián)分析的結(jié)果表明,單倍型組合H1H8型個(gè)體的各周齡體重均高于其他單倍型組合個(gè)體,為優(yōu)勢(shì)單倍型組合,并且單倍型組合H1H8型個(gè)體和H3H8型個(gè)體在0、12、14、16周齡體重方面顯著或極顯著高于其他單倍型組合(P0.05或P0.01)。繁殖性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明:單倍型組合H9H11的開產(chǎn)日齡均值是所有單倍型組合中均值最大的組合,且極顯著大于H1H1、H1H3、H1H4、H1H8、H1H9組合(P0.01);單倍型組合H1H2是開產(chǎn)體重最大的組合,且單倍型組合H1H2、H1H3、H1H4、H1H8均顯著高于H8H9、H9H9組合(P0.05);單倍型組合H2H4是開產(chǎn)蛋重最大的組合,單倍型組合H4H9是開產(chǎn)蛋重最低組合;單倍型組合H1H2是300日齡體重最高組合,且H1H2、H1H3、H1H8組合極顯著高于H8H9組合(P0.01);單倍型組合H9H11是300日齡平均蛋重最高組合,除單倍型組合H2H4、H9H9之外,其余組合均有極顯著或者顯著差異(P0.05或P00.01);單倍型組合H1H4是300日齡產(chǎn)蛋數(shù)數(shù)量最高組合,單倍型組合H1H3、H1H4均顯著高于H3H8 組合(P0.01)。2.以Myf6基因?yàn)楹蜻x基因,對(duì)該基因CDS區(qū)進(jìn)行了單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)。結(jié)果表明:試驗(yàn)在外顯子1中共發(fā)現(xiàn)了一個(gè)變異位點(diǎn)T586C,經(jīng)檢測(cè),在此位點(diǎn)上形成了三種基因型,分別為HH、Hh、hh,此處的突變導(dǎo)致其編碼的氨基酸由丙氨酸突變成天冬氨酸,屬于非同義突變。運(yùn)用SPSS軟件將Myf6開基因在外顯子1中所形成的突變位點(diǎn)與生長(zhǎng)性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析,由結(jié)果可知,HH、Hh、hh三種基因型個(gè)體在0周、2周、4周、6周齡的體重?zé)o顯著差異(P0.05),但在8周、10周、12周、14周、16周齡上,Hh基因型個(gè)體體重極顯著高于HH基因型個(gè)體(P0.01)。繁殖性狀關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果表明,在開產(chǎn)蛋重上,基因型hh個(gè)體顯著高于HH個(gè)體(P0.05),除了開產(chǎn)日齡,在其余性狀上,三種基因型個(gè)體的性狀雖無(wú)顯著差異(P0.05),但Hh基因型個(gè)體均優(yōu)于其他兩種基因型個(gè)體。3.對(duì)兩個(gè)候選基因的表達(dá)譜和表達(dá)規(guī)律進(jìn)行的研究,發(fā)現(xiàn)在兩個(gè)雞種上,候選基因在胸肌、腿肌上均高表達(dá);Fbxl5基因的表達(dá)規(guī)律結(jié)果表明:在金茅黃雞公母雞、京海黃雞公雞上,候選基因的表達(dá)量在出雛期為最高,之后均是先大幅下降然后有少量回升,而在京海黃雞母雞上,其表達(dá)量為先持續(xù)上升然后大幅下降。Myf6基因的表達(dá)趨勢(shì)較為穩(wěn)定,在兩個(gè)品種的雞上,表達(dá)趨勢(shì)總體上均為上升趨勢(shì),并在16周齡時(shí)達(dá)到最高,兩個(gè)雞種的表達(dá)規(guī)律表明,Myf6基因在不同品種、不同時(shí)間段上、胸肌的表達(dá)量始終高于腿肌。
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S831
【圖文】：

｜ｉ２，２－１。結(jié)果表明，ＤＮＡ條帶清晰可見，且無(wú)明顯符合生物學(xué)試驗(yàn)要求。逡逑Ｍａｒｋｅｒ邋１２邐３邐４邐５逡逑灥逡逑圖２－１雞血液提取基因組ＤＮＡ電泳圖逡逑ｉｇ．２－１邋Ｇｅｎｏｍｉｃ邋ＤＮＡ邋ｉｓｏｌａｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋ｃｈｉｃｋｅｎ邋ｂｌｏｏｄ逡逑果檢測(cè)逡逑一對(duì)引物，經(jīng)檢測(cè)，特異性好，且擴(kuò)增效果良好，可見。聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)其引物的擴(kuò)增ＰＭａｒｋｅｒ邐Ｍａｒｋｅｒ逡逑

圖２－４突變位點(diǎn)的序列比較逡逑Ｆｉｇ．２－４邋Ｓｅｑｕｅｎｃｅ邋ａｌｉｇｎｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ｖａｒｉａｂｌｅ邋ｓｉｔｅ逡逑突變位點(diǎn)的等位基因和基因型頻率逡逑該基因第１４５６１邋ｂｐ處的突變位點(diǎn)ｒｓ３１６２４４７６７所形成的３種基因型進(jìn)行群體析，分別計(jì)算各基因型各等位基因頻率，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行卡方檢測(cè)（見表２－２）檢測(cè)出３種基因型，等位基因Ａ為優(yōu)勢(shì)等位基因，等位基因頻率為０．６９７，型的基因頻率分別是０．５６０、０．２７５，雜合子Ａａ的基因頻率為０．１６５。對(duì)突變樣性分析結(jié)果顯示，京海黃雞３６３只母雞群體中突變位點(diǎn)雜合度為０．４６０，邋Ｐ卡方檢測(cè)結(jié)果顯示在這個(gè)群體中，突變位點(diǎn)偏離哈代－溫伯格平衡定律。逡逑

逡逑＿＿＿＿逡逑圖２－３突變位點(diǎn)的不同基因型電泳圖逡逑Ｆｉｇ．２－３邋ＰＣＲ－ＳＳＣＰ邋ｅｌｅｃｔｒｏｐＨｏｒｅｓｉｓ邋ｏｆ邋ｖａｒｉａｂｌｅ邋ｓｉｔｅ逡逑ＡＡ邐ａａ邐Ａａ逡逑ｉ邐Ｉ邐Ｉ逡逑ａｇｔａｃ邋ａ邋ｔ邋ｔ邋ａ邋Ｃ邐Ａ邋ｇ邋ｔａｃ逡逑ｆ邐ｔ邐ｆ逡逑１４５６１ｂｐ邐１４５６１ｂｐ邐１４５６１ｂｐ逡逑Ａ邋Ａ逡逑（＼邐（＼ａａ／Ｖ＼逡逑圖２－４突變位點(diǎn)的序列比較逡逑Ｆｉｇ．２－４邋Ｓｅｑｕｅｎｃｅ邋ａｌｉｇｎｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ｖａｒｉａｂｌｅ邋ｓｉｔｅ逡逑３．２．２突變位點(diǎn)的等位基因和基因型頻率逡逑對(duì)該基因第１４５６１邋ｂｐ處的突變位點(diǎn)ｒｓ３１６２４４７６７所形成的３種基因型進(jìn)行群體遺傳學(xué)逡逑突變分析，分別計(jì)算各基因型各等位基因頻率，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行卡方檢測(cè)（見表２－２），在該逡逑群體中檢測(cè)出３種基因型，等位基因Ａ為優(yōu)勢(shì)等位基因，等位基因頻率為０．６９７，純合子逡逑ＡＡ、ａａ型的基因頻率分別是０．５６０、０．２７５，雜合子Ａａ的基因頻率為０．１６５。對(duì)突變位點(diǎn)的逡逑遺傳多樣性分析結(jié)果顯示，京海黃雞３６３只母雞群體中突變位點(diǎn)雜合度為０．４６０，邋ＰＩＣ值為逡逑０．３５４�？ǚ綑z測(cè)結(jié)果顯示在這個(gè)群體中，突變位點(diǎn)偏離哈代－溫伯格平衡定律。逡逑

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本文編號(hào)：2757714