【摘要】：本文用2-DE和iTRAQ對6只湖羊產(chǎn)后1 d、3 d、7 d、14 d、28 d和56 d的脫脂乳和乳清蛋白質(zhì)組進(jìn)行了分析,主要結(jié)果如下:(1)湖羊不同泌乳時間脫脂乳蛋白質(zhì)組分析將6只湖羊不同時間點全乳等體積混合,經(jīng)3,000×g離心獲得脫脂乳,用雙向電泳(2-DE)技術(shù)檢測脫脂乳蛋白。在6個時間點的脫脂乳樣中,共檢測出44個差異表達(dá)的蛋白點。對比薩爾達(dá)綿羊脫脂乳的研究結(jié)果,發(fā)現(xiàn)湖羊脫脂乳中蛋白主要包括α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、αS1-酪蛋白、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、白蛋白以及Ig重鏈前體。與1 d相比,3 d、7 d、14 d、28 d和56 d的差異蛋白點數(shù)分別為38、35、34、38和36。(2)湖羊不同泌乳時間乳清蛋白質(zhì)組分析將上述湖羊混合脫脂乳經(jīng)100,000×g超高速離心,獲得乳清蛋白,利用2-DE結(jié)合MALDI TOF/TOF質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行分離和鑒定。在6個時間點的乳清蛋白樣品中共檢測到41個差異蛋白點,對應(yīng)15種蛋白質(zhì)。其中6種蛋白已收錄在綿羊蛋白組學(xué)庫中,分別為κ-酪蛋白、αS1-酪蛋白變異體、叢生蛋白、α-1抗胰蛋白酶、氣道過氧化物酶和驅(qū)動樣蛋白;其余9種蛋白已收錄于脊椎動物蛋白數(shù)據(jù)庫,分別為Igμ鏈、補體C3、多聚Ig受體亞型x2、IgG重鏈恒定區(qū)四聚體前體、核結(jié)合蛋白-1型x1、維生素D結(jié)合蛋白、角蛋白、糖基化依賴性細(xì)胞粘附分子1和肌動蛋白細(xì)胞質(zhì)2亞型x1。與1 d相比,3 d、7 d、14 d、28 d和56 d的的差異蛋白點數(shù)分別為30、29、39、20和31。叢生蛋白在泌乳初期,豐度較高。14 d豐度迅速下降,28 d和56 d豐度降低到0。α-1抗胰蛋白酶豐度在14 d較高,其它時間點豐度較低。氣道過氧化物酶在泌乳初期豐度較高,7 d豐度迅速下降為0,之后上升,在56 d豐度又降為0。驅(qū)動樣蛋白僅在7 d和14 d豐度較高,其它時間點豐度較低。補體C3在1 d豐度很高,之后豐度不規(guī)律變化。維生素D結(jié)合蛋白在1 d、7 d、28 d豐度較高,3 d、14 d、56 d豐度較低。糖基化依賴性細(xì)胞粘附分子1僅在7 d和14d時豐度較高。肌動蛋白在1 d豐度較高,其后下降,28 d和56 d降為0。(3)不同泌乳時間點湖羊乳蛋白質(zhì)組差異用iTRAQ技術(shù)分析湖羊不同泌乳期的乳清蛋白,共檢出310個蛋白質(zhì)。其中有111種蛋白收錄于綿羊數(shù)據(jù)庫,199種蛋白收錄于脊椎動物數(shù)據(jù)庫。6個時間點的差異蛋白為121個。熱圖分析表明121個差異蛋白的豐度隨時間變化。與1 d相比,3 d、7 d、14 d、28 d和56 d的差異蛋白數(shù)分別為30、42、63、80和85。將蛋白進(jìn)行GO功能注釋,對6個時間點乳清中差異蛋白進(jìn)行分類。根據(jù)分子功能分為9類,即結(jié)構(gòu)分子活性、轉(zhuǎn)錄因子活性、抗氧化劑活性、分子轉(zhuǎn)導(dǎo)活性、結(jié)合活性、轉(zhuǎn)運活性、催化活性、趨化活性和分子調(diào)節(jié)功能。產(chǎn)后1 d與3 d差異蛋白分子功能分類最多;而3 d與7 d差異蛋白分子功能失去兩類,即轉(zhuǎn)錄因子活性和抗氧化劑活性;7 d與14 d、14 d與28 d、28 d與56 d差異蛋白分子功能失去4類,即轉(zhuǎn)錄因子活性、抗氧化劑活性、結(jié)構(gòu)分子活性和趨化活性。根據(jù)細(xì)胞定位,不同泌乳期差異蛋白分為9類,即細(xì)胞器、細(xì)胞、胞外區(qū)域、膜封閉腔、神經(jīng)元突觸、細(xì)胞連接、大分子復(fù)合物、細(xì)胞外基質(zhì)和膜。1 d與3 d差異蛋白分類最多。而3 d與7 d差異蛋白分類缺少神經(jīng)元突觸。7 d與14 d差異蛋白分類缺少神經(jīng)元突觸、細(xì)胞連接。14 d與28 d差異蛋白分類最少,但28 d與56 d的差異蛋白分類增多,增加了大分子復(fù)合物和膜封閉腔。根據(jù)生物途徑,差異蛋白分為17類,即發(fā)展過程、多細(xì)胞生物過程、細(xì)胞過程、單生物過程、生物附著、代謝過程、定位、細(xì)胞組成的組織、免疫系統(tǒng)、信號傳遞、行為反應(yīng)、刺激應(yīng)答、生長、轉(zhuǎn)移、生物調(diào)控、多生物過程和節(jié)律過程等。不同泌乳期,乳中差異蛋白在6類生物途徑中表現(xiàn)出較大變化,這些生物途徑分別為行為反應(yīng)、節(jié)律過程、生長、轉(zhuǎn)移、生物附著和多生物過程。通過Pathway代謝通路注釋分析,發(fā)現(xiàn)不同泌乳期的差異蛋白所涉及的通路主要涉及3類,即免疫通路、代謝通路和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S826

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本文編號：2741725