【摘要】：精子是一種遺傳物質(zhì)高度濃縮的細胞,由于其RNA的含量顯著低于卵母細胞,使得大多數(shù)科研工作者忽略了精子RNA的功能而將與胚胎發(fā)育相關(guān)的研究聚焦在了卵母細胞RNA。RNA組成性分析表明,精子RNA主要由mRNAs、miRNAs、tRNAs和siRNA組成,這些RNAs能通過受精過程隨精子進入卵母細胞,暗示精源性miRNA與endo-siRNA在胚胎發(fā)育過程中扮演重要角色。因此,更深入探討精源性miRNAs的功能對我們擴展早期胚胎發(fā)育事件及其調(diào)控機理的認識是十分必要的。本研究根據(jù)已有文章公布的miRNA測序數(shù)據(jù)以及本課題組構(gòu)建的牛精子small RNA文庫,初步篩選出bta-miR-301a作為研究對象。隨后利用實時熒光定量PCR檢測方法證實了bta-miR-301a為精源性miRNA。綜合多個數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-301a的靶基因,取交集后進行基因聚類分析,選擇可信度較高的TGF-β通路的靶基因用于后續(xù)研究。通過靶基因mRNA物種保守性比對、3’-UTR結(jié)合位點查詢、MII期卵母細胞表達水平檢測以及雙熒光素酶報告基因檢測后,最終確定ACVR1為miR-301a的靶基因。熒光定量PCR結(jié)果顯示,體外受精組原核至2-細胞發(fā)育過程中,bta-miR-301a的表達量顯著下降,靶基因ACVR1的表達趨勢在孤雌組、核移植組及體外受精組胚胎中也存在差異。其中,在MII期卵母細胞至體外受精2-細胞發(fā)育階段,ACVR1的表達量顯著降低,而核移植組與孤雌組的表達量卻顯著升高。因此,暗示精子miR-301a可能靶向下調(diào)了體外受精組2-細胞時期ACVR1的表達。為了確定mi R-301a對牛早期胚胎發(fā)育的影響,對激活后的卵母細胞進行了mi R-301a mimic的顯微注射試驗。與對照組相比,注射組孤雌胚胎2-細胞時期的ACVR1蛋白表達量顯著降低,第一次卵裂時間延長并且囊胚率升高。因此,推測2-細胞時期,mi R-301a能夠靶向調(diào)控ACVR1延長了第一次卵裂時間并影響后續(xù)囊胚的發(fā)育。綜上所述,本研究初步確定了精源性miR-301a能夠影響牛早期胚胎發(fā)育進程。
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S823
【圖文】：

分析各個靶基因的 CT 值，根據(jù) CT 值的大中的表達情況。1a 精源性驗證量 PCR 的檢測方法，分別測定了 MII 期卵母細胞、IV、SCNT 類原核期胚胎及 SCNT 2-細胞胚胎中 bta-miR-以 MII 期卵母細胞作為參照樣本，按照 2- Ct的計算方趨勢，并用 t 檢驗進行差異性分析。結(jié)果如圖 3-1 所胚胎的相對表達量顯著高于 MII 期卵母細胞及 2-細胞在 SCNT 胚胎中，miR-301a 在類原核期的相對表達量顯)，但卻顯著高于 SCNT 2-細胞胚胎(P＜0.05)。urve Analysis1min Increment rate 0.5℃/s

a 在 MII 期卵母細胞、核移植類原核期胚胎及核移植 2-細胞胚同組間的顯著性差異(P＜0.05)。bundance of bta-miR-301a in MII oocytes; embryos of Pseudo-Prcell stage in SCNT. Different letters indicate differences (P <1a 靶基因預(yù)測及通路分析、TargetScan 與 PicTar 數(shù)據(jù)庫中 miR-301a 靶基因預(yù)測據(jù)庫中共有 361 個交集的靶基因。

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郭爽;;獼猴早期胚胎發(fā)育研究獲進展[J];科學觀察;2017年01期

2 魏慶信;樊俊華;李榮基;;豬早期胚胎發(fā)育的試驗觀察[J];湖北畜牧獸醫(yī);1989年04期

3 ;科學家在獼猴早期胚胎發(fā)育研究中取得進展[J];江西飼料;2017年02期

4 陳偉庭,李東風;中國林蛙早期胚胎發(fā)育觀察[J];華南師范大學學報(自然科學版);2005年03期

5 陳預(yù)明;陳志林;衛(wèi)恒習;李莉;張守全;;豬早期胚胎發(fā)育調(diào)控相關(guān)的因子[J];中國豬業(yè);2014年05期

6 米小其;鄧學建;郭克疾;牛艷東;周毅;;掛榜山小鯢早期胚胎發(fā)育初步觀察[J];四川動物;2007年02期

7 唐修君;曹訪;王杏龍;;早期胚胎發(fā)育中基因調(diào)控的研究進展[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2006年01期

8 張米娜;于月成;黃侃;宋暉;張紅菊;王曉紅;;胰島素樣生長因子對早期胚胎發(fā)育的保護作用[J];第四軍醫(yī)大學學報;2006年09期

9 邵西兵,雷明明,郭文軍,施振旦;牛早期胚胎發(fā)育影響因子研究進展[J];黃牛雜志;2004年02期

10 韓曜平,陳海波,沈軼君;中華大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)早期胚胎發(fā)育的初步觀察[J];常熟高專學報;2000年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 耿寶榮;陳友鈴;張秋金;;中國雨蛙的早期胚胎發(fā)育[A];中國動物科學研究——中國動物學會第十四屆會員代表大會及中國動物學會65周年年會論文集[C];1999年

2 邱志芳;段恩奎;章孝榮;陶勇;;哺乳動物早期胚胎發(fā)育過程中超微結(jié)構(gòu)的變化[A];第一屆中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會、中國動物學會生殖生物學分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

3 倉明;劉東軍;周平;李海軍;張東;旭日干;;牛羊早期胚胎發(fā)育過程中生長因子的表達研究[A];第一屆中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會、中國動物學會生殖生物學分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

4 時永香;翟玉梅;孫潔;張孝軍;王正平;;激光照射對中華大蟾蜍早期胚胎發(fā)育的影響[A];中國細胞生物學學會第七次會議論文摘要匯編[C];1999年

5 劉鋒;楊華;盧克煥;丘映;;卵丘細胞線粒體移植對年老小鼠早期胚胎發(fā)育的影響[A];第一屆中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會、中國動物學會生殖生物學分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

6 孫青原;王中偉;;DNA損傷卵裂的命運及其對早期胚胎發(fā)育的影響[A];中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會第三次全國實驗室學組會議論文匯編[C];2014年

7 徐倩華;王鳳超;張小欣;高紹榮;李磊;;母源BCAS2在小鼠早期胚胎發(fā)育中的功能[A];2012全國發(fā)育生物學大會摘要集[C];2012年

8 李海軍;劉東軍;倉明;周平;旭日干;;VEGF與其受體Flt-1在牛早期發(fā)育胚胎中的表達及其對早期胚胎發(fā)育的影響[A];第十屆全國生殖生物學學術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

9 王凈;李光;王義權(quán);;文昌魚早期胚胎發(fā)育中Dvl基因的表達分析[A];第三屆“模式生物與人類健康”發(fā)育遺傳學全國學術(shù)研討會論文集[C];2014年

10 林瑩;陳莉;姚兵;;鴉膽子苦醇通過下調(diào)Nrf2抑制小鼠早期胚胎發(fā)育[A];中國生理學會生殖科學專業(yè)委員會—中國動物學會生殖生物學分會第二次聯(lián)合學術(shù)年會暨“生殖科學專業(yè)委員會第二次學術(shù)交流會”和“生殖生物學分會第十六次學術(shù)年會”論文集[C];2017年

相關(guān)重要報紙文章 前4條

1 記者 李季;人類早期胚胎發(fā)育“秘密”獲揭示[N];健康報;2018年

2 記者 張夢然;CRISPR技術(shù)可研究人類早期胚胎發(fā)育[N];科技日報;2017年

3 記者 王丹 通訊員 仰東萍;人類早期胚胎發(fā)育調(diào)控研究獲新突破[N];健康報;2014年

4 記者 王丹;卵子主導(dǎo)早期胚胎發(fā)育觀念被顛覆[N];健康報;2013年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 李競宇;豬受精及早期胚胎發(fā)育相關(guān)因子的篩選與功能解析[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2016年

2 時永香;人為亞極端環(huán)境對蟾蜍類動物早期胚胎發(fā)育及種群命運的影響[D];山東大學;2005年

3 李擁軍;山羊早期胚胎發(fā)育基因表達的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2005年

4 張銀麗;DCAF13在小鼠早期胚胎發(fā)育中的調(diào)節(jié)機制研究[D];浙江大學;2016年

5 劉玉勝;母源BTG4在小鼠早期胚胎發(fā)育中的功能和機制研究[D];中國科學技術(shù)大學;2017年

6 殷松娜;SHP-1在小鼠早期胚胎發(fā)育中的作用及其作用機制的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2014年

7 畢曄;Wdr82蛋白在小鼠早期胚胎發(fā)育中的功能研究[D];南京醫(yī)科大學;2009年

8 禹苗;煙草早期胚胎發(fā)育和極性建立中AGPs的作用及RC18基因功能的分析[D];武漢大學;2011年

9 余超;卵母細胞轉(zhuǎn)錄組的調(diào)節(jié)及其在卵泡存活和早期胚胎發(fā)育中的作用[D];浙江大學;2016年

10 銀鳳霞;Shugoshin1對牛卵母細胞成熟、早期胚胎發(fā)育及體細胞有絲分裂影響的研究[D];內(nèi)蒙古大學;2013年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 馬曉楠;精源性Bta-miR-301a對牛早期胚胎發(fā)育影響的初步研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2018年

2 喬芳;牛精源性miR-183對早期胚胎發(fā)育的影響[D];西北農(nóng)林科技大學;2018年

3 周城;RNF114蛋白在小鼠早期胚胎發(fā)育中的功能研究及機制探索[D];南京醫(yī)科大學;2016年

4 李媛;組蛋白及其變體對小鼠早期胚胎發(fā)育的影響[D];內(nèi)蒙古大學;2017年

5 曹筠青;miR-29b的表達及其對豬早期胚胎發(fā)育影響的研究[D];吉林大學;2017年

6 林瑩;鴉膽子苦醇對小鼠早期胚胎發(fā)育的阻滯作用及其機制探究[D];南京師范大學;2017年

7 錢紅娟;山羊早期胚胎發(fā)育的基因表達[D];揚州大學;2008年

8 李威;小鼠早期胚胎發(fā)育過程中細胞凋亡及凋亡基因表達的檢測[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2006年

9 栗雪冰;牛早期胚胎發(fā)育差異表達基因的研究[D];內(nèi)蒙古大學;2010年

10 劉鵬超;長牡蠣早期胚胎發(fā)育中生化成分和能量變化的研究[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2010年

本文編號：2728300