【摘要】：驢產(chǎn)業(yè)是我國重要的區(qū)域特色畜牧業(yè)。腹瀉是規(guī)�；H場最常見的一類疾病,也是影響犢驢駒成活率的主要因素之一。1.規(guī)模驢場腹瀉病的調(diào)查2015年~2017年,對49個規(guī)�；H場調(diào)查顯示:0~6月齡驢駒腹瀉病的場發(fā)病率約為67.3%(33/49),驢駒個體發(fā)病率為23.1%(1099/4755),其中高發(fā)日齡為15~45 d。約有15%的病例在發(fā)病48 h~72 h內(nèi)死亡,發(fā)病后驢駒的生長發(fā)育性能受到嚴(yán)重影響,造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。引起驢駒腹瀉的因素比較復(fù)雜,與長途運(yùn)輸應(yīng)激、飲水不潔過涼、衛(wèi)生狀況差、寄生蟲(蛔蟲)的感染、病原微生物的侵襲等有關(guān)。調(diào)查發(fā)現(xiàn)致病性大腸桿菌(血清型O78、O101和O8)感染是最主要的致病性因素。腹瀉驢駒的病變包括腸道組織粘膜脫落、絨毛斷裂、粘膜水腫、出血等,符合感染性腸炎的組織學(xué)特征。2.驢駒腹瀉病例中致病性大腸桿菌的分離鑒定2015年~2017年,從聊城市規(guī)模驢場腹瀉病料中分離到416株大腸桿菌,經(jīng)純化培養(yǎng)、電鏡分析,全自動生化鑒定,動物感染試驗(yàn)和16S rRNA測序,共鑒定出85株致病性大腸桿菌。電鏡分析表明純培養(yǎng)物的平均大小為329.4 nm×223.5 nm。使用全自動細(xì)菌鑒定儀通過生化鑒定方法可以快速的完成細(xì)菌學(xué)鑒定。對致病性大腸桿菌的敏感藥物包括氟苯尼考、阿米卡星、妥布霉素等,不敏感藥物包括哌拉西林、氨芐西林、頭孢噻吩、頭孢西叮等。DNAStar Megalign對16S rRNA序列分析表明7株E.coli驢源分離株之間的同源性為98.2%~99.7%,與牛、馬、豬、禽和人源菌株的同源性分別為97.0%~99.9%,88.6%~91.0%,97.7%~99.6%,95.8~97.3和98.8~99.9%,表明其來源復(fù)雜。3.驢駒致病性大腸桿菌全基因組序列分析對兩株致病性大腸桿菌分離株(E.coli La18,E.coli Lb73)菌株,進(jìn)行基因組重測序得到的原始數(shù)據(jù)量進(jìn)行過濾后數(shù)據(jù)量為2.55 G,原始數(shù)據(jù)在NCBI數(shù)據(jù)庫中登錄號為SRP148724。將其序列分別與NCBI中登錄的馬源大腸桿菌菌株(Escherichia coli3.2608 Contig0022)和牛源大腸桿菌菌株(Escherichia coli O157:H7 strain FRIK2455)參考基因組序列比對。對比對結(jié)果評估,突變質(zhì)控結(jié)果共有35586個SNP、20805個SNP,共有4157個In Del、23821個InDel;對結(jié)果進(jìn)行突變聲明和注釋,分析得到通過比對基因組突變密度的差異,發(fā)現(xiàn)與NZ-AEZS000010.1染色體、NZ-CP015843.2染色體,突變位點(diǎn)、突變頻率最多;本試驗(yàn)通過突變類型柱狀圖分析,在13種突變類型中發(fā)現(xiàn)3種(downsteam-gene-variant、synonymous-variant、upstream-gene-variant)突變類型的計(jì)數(shù)最高,分別達(dá)到175222個、27751個、178117個;通過突變位置分布統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn):3個基因組區(qū)域(DOWNSTREAM、EXON、UPSTREAM)突變數(shù)最高。4.驢駒致病性大腸桿菌新型疫苗的研制將E.coli La18分離株在CGMCC進(jìn)行細(xì)菌保藏(登記號為CGMCC No.14058)。使用其菌體和K99亞單位成分制成復(fù)合疫苗,經(jīng)穩(wěn)定性試驗(yàn)、攻毒保護(hù)試驗(yàn)、安全試驗(yàn)和對比試驗(yàn),測定了臨床保護(hù)率。菌體與疫苗亞單位的最佳比例為75億:2.375mg。與對照組相比,臨床保護(hù)率達(dá)到95.7%。綜上所述,在驢駒腹瀉病例中致病性大腸桿菌的分離鑒定、全基因組重測序和復(fù)合疫苗的研制,將為驢駒腹瀉性疾病的防治提供重要理論依據(jù)和技術(shù)支撐。
【學(xué)位授予單位】：聊城大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S858.22

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本文編號：2724200