MMP9對奶牛乳腺上皮細胞泌乳功能的作用研究
【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S823
【圖文】：
結(jié) 果上皮細胞的培養(yǎng)與鑒定上皮細胞的原代培養(yǎng)取奶牛乳腺上皮細胞原代細胞。培養(yǎng)約 3-5 天后，在光學顯微出，呈長梭型。繼續(xù)培養(yǎng) 3-5 天后，乳腺上皮細胞開始爬出細胞混合生長。繼續(xù)培養(yǎng)直至細胞達到 90%以上。利用兩種行細胞梯度消化，消化 2-3 次后獲得純的奶牛乳腺上皮細胞后，進行傳代處理，用于后續(xù)實驗。
圖 3-2.奶牛乳腺上皮細胞角蛋白 18 鑒定（200×）Fig. 3-2. Expression of cytokeratin 18 in cultured dairy cows mammary epithelial cells（200×3.2 MMP9 基因?qū)δ膛Ｈ橄偕掀ぜ毎淖饔?.2.1 MMP9 基因過表達對奶牛乳腺上皮細胞的作用3.2.1.1 MMP9 基因過表達質(zhì)粒的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染將純化后的 MMP9 DNA進行經(jīng) KpnI和 NotI位點的雙酶切，與質(zhì)粒 pcDNA3.1+（5400相連，得到表達載體 pcDNA3.1 -MMP9。表達載體 pcDNA3.1-MMP9 經(jīng) KpnI 和 NotI 雙切后分別得到清晰的兩個條帶，分別為 MMP9 基因和載體質(zhì)粒 pcDNA3.1+，在預(yù)期的位出現(xiàn)明顯的條帶（如圖 3-3.第 2 泳道），說明真核表達載體 pcDNA3.1-MMP9 構(gòu)建成功。序結(jié)果與 Genebank 數(shù)據(jù)庫相關(guān)序列進行比對，氨基酸無突變，同源性達 100%如圖 3-4。
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本文編號：2720714
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