發(fā)布時(shí)間：2020-06-19 08:37

【摘要】：本研究通過胚蛋注射試驗(yàn)以及子代高溫長期應(yīng)激試驗(yàn)共6個(gè)系列試驗(yàn),從孵化性能、抗氧化性能及表觀遺傳方面,系統(tǒng)深入研究胚蛋注射微量元素鋅、錳對胚胎發(fā)育、抗氧化性能和出殼后子代肉雞后期生長發(fā)育階段抗熱應(yīng)激效應(yīng)及其分子機(jī)制。試驗(yàn)一采用單因子完全隨機(jī)設(shè)計(jì)。為了找出早期胚蛋注射適宜的胚齡,試驗(yàn)一選取了 720枚蛋重接近的受精胚蛋隨機(jī)分到4個(gè)處理組,每個(gè)處理6個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)30枚胚蛋。在3個(gè)注射胚齡處理組(孵化的第3、6和9天,E3、E6和E9),往胚蛋卵黃囊內(nèi)注射0.1 mL滅菌超純水,對照組不注射。結(jié)果表明,和對照組相比,在E3和E6注射,增加了(P0.05)胚胎死亡率,降低了(P0.05)胚胎孵化率;在E9注射對胚胎死亡率和孵化率均無顯著影響(P0.05)。以上結(jié)果顯示,9胚齡是最適宜的早期胚蛋注射胚齡。試驗(yàn)二在試驗(yàn)一結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究胚蛋注射不同劑量鋅的適宜劑量。選取了 672枚蛋重接近的受精胚蛋隨機(jī)分到7個(gè)處理組,每個(gè)處理6個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)16個(gè)胚蛋。各處理胚蛋在9-10胚齡時(shí),注射0.1mL溶液,分別含0、50、100、150、200和250μg鋅/枚(ZnSO4·7H2O),另設(shè)未注射組(陽性對照)以檢驗(yàn)注射帶來的機(jī)械損傷情況。結(jié)果表明,和對照組相比,胚蛋注射50和100 μg鋅/枚對胚胎死亡率和孵化率無顯著影響(P0.05),但是胚蛋注射200 μg鋅/枚增加了(P0.05)胚胎死亡率,胚蛋注射150和200 μg鋅/枚對降低了(P0.05)胚胎孵化率。胚蛋注射150、200和250 μg鋅/枚增加了(P0.05)20胚齡胚胎脛骨鋅含量。胚蛋注射鋅對15和20胚齡雞胚肝臟和心臟的丙二醛(MDA)含量和銅鋅超氧化物歧化酶活性(CuZnSOD)及其mRNA表達(dá)量均無顯著影響(P0.05)。和陰性對照組相比,胚蛋注射50、150和200 μ g鋅/枚增加了(P0.05)20胚齡雞胚肝臟金屬硫蛋白Ⅳ(MT4)mRNA表達(dá)量。以上結(jié)果表明,鋅滿足肉種雞胚蛋注射鋅增加了 20胚齡胚胎脛骨鋅含量和MT4mRNA基因表達(dá),但是胚蛋注射150-250 μg鋅/枚對胚胎發(fā)育有害。試驗(yàn)三進(jìn)一步研究胚蛋注射鋅對肉種蛋胚胎發(fā)育、抗氧化性能和子代抗熱應(yīng)激效應(yīng)。胚蛋注射鋅試驗(yàn),采用2X2+1+1二因子完全隨機(jī)設(shè)計(jì),試驗(yàn)設(shè)2個(gè)鋅源(硫酸鋅形態(tài)鋅與中等鰲合強(qiáng)度賴氨酸形態(tài)鋅)和2個(gè)鋅濃度處理(卵黃囊注射鋅50和100 μg),其中2個(gè)鋅源處理組共用注射鋅0 μg處理組,另設(shè)未注射組,以檢驗(yàn)注射帶來的損傷情況,共6個(gè)處理。各處理的獲得子代肉仔雞于23日齡按體重和性別隨機(jī)分為常溫(21℃)、高溫(34℃)2個(gè)處理。因此,子代后期肉雞熱應(yīng)激試驗(yàn)共有12個(gè)處理組。結(jié)果表明,胚蛋注射鋅降低了(P0.05)胚胎死亡率,提高了(P0.05)孵化率、健雛率和胚胎脛骨鋅含量(P0.05)。胚蛋注射鋅降低了子代1-22口齡子代死亡率。胚蛋注射100 μg鋅/枚的處理組日采食量和日增重顯著高于(P0.05)50 μg鋅/枚處理。高溫?zé)釕?yīng)激降低了(P0.05)子代23-42d肉仔雞日采食量和日增重,增加了(P0.05)耗料增重比;而注射鋅各處理組日采食量和日增重顯著增加(P0.05),耗料增重比顯著降低(P0.05)。高溫?zé)釕?yīng)激降低了 42d肉仔雞全凈膛率和胸肌率(P0.05),增加了(P0.05)胸肌和腿肌的滴水損失、腿肌的pH和剪切力、血漿TG和T4含量。胚蛋注射鋅提高了(P0.05)全凈膛率。胚蛋注射鋅對胚胎肝臟CuZnSOD活性和MT4的含量及其mRNA表達(dá)量和MDA含量無顯著影響(P0.05)。胚蛋注射鋅處理和子代溫度及二者的互作對42日齡肝臟和胰腺的CuZnSOD活性及MDA含量無顯著影響(P0.05)。高溫?zé)釕?yīng)激降低了(0.05)HSP90 mRNA的表達(dá)。胚蛋注射鋅處理和子代高溫?zé)釕?yīng)激及二者互作對42d肝臟CuZnSOD、MT4、MT1、HSP70和HSF3基因mRNA表達(dá)均無影響(P0.05)。胚蛋注射鋅對雞胚肝臟總DNA甲基化及MT4啟動(dòng)子區(qū)甲基化率和AcH3K9乙�；綗o顯著影響(P0.05)。鋅源顯著影響了胚胎肝臟MT4啟動(dòng)子區(qū)甲基化率和AcH3K9乙酰化水平(P0.05)。胚蛋注射有機(jī)賴氨酸鋅,提高M(jìn)T4啟動(dòng)子區(qū)甲基化和AcH3K9乙酰化水平(P0.05)。胚蛋注射鋅處理和子代溫度及二者互作對子代42d肝臟MT4啟動(dòng)子區(qū)甲基化和AcH3K9乙�；綗o顯著影響(P0.05)。以上結(jié)果表明,低鋅肉種雞胚蛋注射鋅提高了肉種蛋的孵化性能,降低了子代1-21日齡死亡率。高溫?zé)釕?yīng)激降低了子代后期生長性能、胴體性能和肉品質(zhì),破壞了肝臟HSP90 mRNA的表達(dá);胚蛋注射鋅提高了子代后期生長性能和全凈膛率,但對胚胎和子代CuZnSODmRNA表達(dá)和活性,以及MT4啟動(dòng)子區(qū)甲基化率和組蛋白乙酰化率無影響。試驗(yàn)四在試驗(yàn)一的基礎(chǔ)上觀測胚蛋注射不同劑量錳對肉種蛋孵化性能的影響,以研究9胚齡胚胎卵黃囊注射錳的最佳劑量。采用單因子完全隨機(jī)設(shè)計(jì),設(shè)5個(gè)胚蛋注射錳濃度,每枚蛋注射硫酸錳形態(tài)錳0.00、6.25、12.5、25和50 μg。注射0.00 μg錳組為對照組,另設(shè)不注射組,以檢驗(yàn)卵黃囊注射對雞胚發(fā)育的損傷情況,共6個(gè)處理。結(jié)果表明,和未注射組相比,胚蛋注射錳對胚胎死亡率和出生重均無顯著影響(P0.05),但顯著影響了(P0.05)孵化率。與未注射組相比,胚蛋注射50 μgMn/枚處理組的孵化率降低了 14.3%(P0.05)。胚蛋注射6.25、12.5和25 μgMn/枚處理組間孵化率無顯著差異。以上結(jié)果表明,錳滿足的肉種雞胚蛋注射錳的最大劑量為25 μg錳/枚。試驗(yàn)五在試驗(yàn)四的基礎(chǔ)上研究胚蛋注射錳對肉種蛋胚胎發(fā)育、抗氧化性能和子代肉雞抗熱應(yīng)激效應(yīng)。胚蛋注射錳試驗(yàn),采用2X2+1+1二因子完全隨機(jī)設(shè)計(jì),試驗(yàn)設(shè)2個(gè)錳源(硫酸錳形態(tài)錳與中等鰲合強(qiáng)度有機(jī)蛋白錳)和2個(gè)錳濃度處理(卵黃囊注射錳12.5和25 μg),另設(shè)未注射組,以檢驗(yàn)注射帶來的機(jī)械損傷情況,共6個(gè)處理。各處理獲得的子代肉仔雞于29日齡按體重和性別隨機(jī)分為常溫(21℃)、高溫(34℃)2個(gè)處理。因此,子代肉雞后期熱應(yīng)激試驗(yàn)共有12個(gè)處理組。結(jié)果表明,胚蛋注射錳對胚胎死亡率、孵化率、健雛率和雛雞出生重均無顯著影響(P0.05)。胚蛋注射錳增加了(P0.05)雞胚心臟MnSODmRNA相對表達(dá)量,但對MnSOD活性和MDA含量均無顯著影響(P0.05)。胚蛋注射錳對子代1-21d和22-28d日采食量、日增重、耗料增重比和死亡率均無顯著影響(P0.05)。高溫?zé)釕?yīng)激降低了 29-42d肉仔雞日增重和日采食量(P0.05),增加了耗料增重比(P0.05)。和常溫組相比,子代高溫?zé)釕?yīng)激提高了(P0.05)AST和LDH活性、UA和T3含量、腹脂率、胸肌和腿肌亮度及腿肌剪切力,降低了(P0.05)胸肌率、ALP活性、胸肌和腿肌的紅度。以上結(jié)果表明,胚蛋注射錳對子代孵化性能和子代1-21d和22-28d生長性能無影響,但是提高了胚胎MnSOD mRNA相對表達(dá)量。子代高溫?zé)釕?yīng)激激提高了谷丙轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶活性活性,降低了胴體性能和肉品質(zhì)。試驗(yàn)六在上述試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,研究聯(lián)合注射微量元素鋅和錳對胚胎發(fā)育、抗氧化性能和子代肉雞生長發(fā)育不同階段的抗熱應(yīng)激效應(yīng)的影響。胚蛋聯(lián)合注射鋅錳試驗(yàn)設(shè)注射0、硫酸錳、硫酸鋅、硫酸錳和硫酸鋅,4個(gè)處理組;其中注射鋅和錳的濃度分別是100和25 μg/枚,另設(shè)未注射組,以檢驗(yàn)注射帶來的機(jī)械損傷情況,共5個(gè)處理。各處理獲得的子代肉仔雞于22日齡按體重和性別隨機(jī)分為常溫(21℃)、高溫(34℃)2個(gè)處理,共有12個(gè)處理組。結(jié)果表明,胚蛋注射鋅錳對胚胎死亡率、孵化率、健雛率、雛雞出生重、胚胎肝臟MT4和CuZnSOD以及心臟MnSOD mRNA相對表達(dá)量均無顯著影響(P0.05)。胚蛋注射鋅和錳處理組MnSOD活性顯著高于胚蛋注射錳處理組(P0.05),但和注射對照組無顯著差異(P0.05)。胚蛋注射鋅錳處理對子代1-21d和22-42d日采食量、日增重、耗料增重比和死亡率均無顯著影響(P0.05)。高溫?zé)釕?yīng)激降低了(P0.05)22-42d肉仔雞日增重和日采食量、胸肌率和腹脂率、胸肌和腿肌的紅度,增加了(P0.05)耗料增重比、死亡率、血漿TC和T3含量、胸肌和腿肌亮度及腿肌剪切力。胚蛋注射鋅和錳處理組血漿T3含量顯著高于(P0.05)單獨(dú)注射鋅處理組和對照組。胚蛋注射鋅錳處理對屠宰率、全凈膛率、胸肌率、腿肌率和腹脂率均無顯著影響(P0.05)。和單獨(dú)注射鋅或錳處理組相比,胚蛋聯(lián)合注射鋅和錳處理組腿肌滴水損失無顯著差異(P0.05),但顯著低于對照組(P0.05)。以上結(jié)果表明,胚蛋聯(lián)合注射鋅和錳對胚胎發(fā)育和子代肉雞生長性能無影響;高溫?zé)釕?yīng)激降低了子代后期生長性能和42d肉品質(zhì);胚蛋聯(lián)合注射鋅和錳提高血漿T3含量及肉品質(zhì)。綜上所述,9胚齡胚蛋卵黃囊注射對胚胎損傷最小,鋅滿足肉種雞胚蛋注射鋅提高了脛骨鋅含量和20胚齡肝臟MTmRNA表達(dá)水平,但是注射150-250 μg鋅/枚對胚胎發(fā)育有害。低鋅肉種雞胚蛋注射鋅提高了肉種蛋的孵化性能,降低了子代1-21日齡死亡率。高溫?zé)釕?yīng)激降低了子代后期生長性能、胴體性能和肉品質(zhì),破壞了肝臟HSP90 mRNA的表達(dá);胚蛋注射鋅提高了子代后期生長性能和全凈膛率,但對胚胎和子代CuZnSOD mRNA表達(dá)和活性,以及MT4啟動(dòng)子區(qū)甲基化率和組蛋白乙�；薀o影響。錳滿足的肉種雞胚蛋注射錳的最大劑量為25 ug猛/枚。胚蛋注射錳對子代孵化性能和子代1-21d和22-28d生長性能無影響,但是提高了胚胎MnSOD mRNA相對表達(dá)量。子代高溫?zé)釕?yīng)激激提高了谷丙轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶活性活性,降低了胴體性能和肉品質(zhì)。鋅和錳缺乏的肉種雞胚蛋注射鋅和錳對胚蛋孵化性能和子代前期生長性能無影響。高溫?zé)釕?yīng)激降低了子代后期生長性能和42日齡肉品質(zhì)。胚蛋同時(shí)注射鋅和錳提高血漿T3含量和腿肌系水力。以上研究發(fā)現(xiàn)在迄今所查閱到的國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)中尚未見到報(bào)道,是本文的突出創(chuàng)新點(diǎn),對于從分子水平上推動(dòng)微量元素營養(yǎng)-表觀遺傳學(xué)的發(fā)展以及肉雞生產(chǎn)中高效提高肉仔雞生長發(fā)育和胴體性能,具有重要理論與現(xiàn)實(shí)指導(dǎo)意義。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S831

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本文編號：2720552