【摘要】：睪丸間質(zhì)細胞分泌的睪酮在維持雄性第二性征和促進精子成熟中發(fā)揮著重要作用。睪酮的分泌過程需要多種類固醇激素合成酶的參與和調(diào)節(jié)。研究表明低濃度人絨毛膜促性腺激素(Human Chorionic Gonadotropin,hCG)能夠提高睪丸間質(zhì)細胞類固醇激素合成酶的表達,增加睪酮的分泌;高濃度hCG則會誘導(dǎo)睪丸間質(zhì)細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,抑制類固醇激素合成酶的表達,減少睪酮的分泌。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白Luman屬于堿性亮氨酸拉鏈家族轉(zhuǎn)錄因子,在動物體內(nèi)表達分布廣泛且功能多樣。研究表明Luman在小鼠子宮和卵巢中的表達呈生殖周期相關(guān)性,干擾卵巢顆粒細胞Luman蛋白表達能夠下調(diào)類固醇激素合成酶的表達,減少雌激素和孕酮的分泌。在布雷菲德菌素(Brefeldin A,BFA)誘導(dǎo)細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時,Luman通過其特有的結(jié)構(gòu)激活未折疊蛋白反應(yīng),促進錯誤折疊蛋白的運輸和降解,緩解細胞的應(yīng)激狀態(tài)。然而,Luman在雄性小鼠生殖系統(tǒng)中的表達和在睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌與hCG介導(dǎo)的睪丸間質(zhì)細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用與機制尚不清楚。本試驗運用Western-blotting、實時熒光定量PCR、免疫組織化學(xué)染色、組織和細胞免疫熒光、RNA干擾、睪丸顯微注射、ELISA、細胞流式和雙熒光素酶報告系統(tǒng)等方法,探究了(1)Luman在雄性小鼠生殖系統(tǒng)中的表達規(guī)律;(2)Luman在小鼠睪丸間質(zhì)細胞中的表達定位及對睪酮分泌的影響;(3)Luman影響睪酮分泌的機制;(4)Luman在hCG誘導(dǎo)的MLTC-1細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激過程中的作用。得到如下結(jié)果:1.運用免疫組化、免疫熒光、RT-qPCR和Western-blotting技術(shù)檢測,發(fā)現(xiàn)Luman在小鼠睪丸、附睪、輸精管、儲精囊、凝固腺、包皮腺等處表達廣泛,在睪丸、附睪和輸精管中相對表達量較高。在附睪中,Luman在附睪管壁和管腔內(nèi)精子中均有表達。在精子中,Luman主要表達于成熟精子的尾部,表達量隨精子成熟程度的增加而增加。在睪丸中,Luman特異性地表達定位于睪丸間質(zhì)細胞中,表達量隨小鼠日齡的增長而增加。2.采用RT-qPCR、Western-blotting、免疫熒光和RNAi技術(shù)探究Luman在MLTC-1、原代睪丸間質(zhì)細胞和睪丸中的功能。篩選出刺激睪丸間質(zhì)細胞分泌睪酮的最適hCG濃度為1 IU/mL。shLuman慢病毒感染MLTC-1細胞能夠顯著干擾細胞中Luman蛋白的表達,干擾率達80%。干擾Luman能夠顯著增加MLTC-1細胞睪酮的分泌量,上調(diào)類固醇激素合成酶StAR、Cyp11a1、3β-HSD和Cyp17a1的表達。通過睪丸顯微注射的方法證明,注射進睪丸的shLuman慢病毒能顯著干擾睪丸中Luman的表達,提高血清中睪酮的濃度。使用si-Luman能夠有效地干擾原代睪丸間質(zhì)細胞中Luman的表達,干擾效率達到75%。干擾Luman能夠顯著增加原代睪丸間質(zhì)細胞睪酮的分泌量,上調(diào)類固醇激素合成酶StAR、Cyp11a1、3β-HSD和Cyp17a1的表達。3.運用RT-qPCR、ELISA和雙熒光素酶報告系統(tǒng)等對Luman調(diào)節(jié)睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌的機制進行了探究。試驗表明,干擾Luman能提高類固醇激素合成相關(guān)核受體Nur-77和SF-1啟動子的活性,上調(diào)類固醇激素合成酶的表達,增加睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌;干擾Luman可以提高LH/CG受體啟動子活性,增加LH/CG受體的表達,提高細胞內(nèi)cAMP的濃度,激活PKA通路,上調(diào)類固醇激素合成相關(guān)酶的表達,增加睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌。4.運用Western-blotting、RT-qPCR、ELISA和流式細胞術(shù)等技術(shù),對Luman在MLTC-1細胞周期以及高濃度hCG誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激過程中的作用進行了探究。干擾Luman上調(diào)了細胞周期蛋白Cyclin A1、Cyclin B1和Cyclin D2表達,降低了S期MLTC-1細胞的比例。10 IU/mL的hCG能夠誘導(dǎo)MLTC-1細胞發(fā)生明顯的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,并且內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達量隨hCG處理時間的增長而增加。在10 IU/mL hCG處理下,干擾Luman能顯著增加MLTC-1細胞睪酮分泌,上調(diào)Cyp11a1、p-IRE1、p-EIF2S1和BCL-2的表達,下調(diào)GRP78、CHOP和Caspase-3的表達。表明干擾Luman可以增加UPR相關(guān)蛋白和凋亡抑制因子的表達,減少促凋亡蛋白和因子的表達,促進MLTC-1細胞的存活與功能恢復(fù),增加睪酮的分泌。以上結(jié)果揭示了Luman在雄性小鼠生殖系統(tǒng)中的表達規(guī)律,探究了Luman影響睪酮合成的機制,充實了Luman在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激過程中的作用。為進一步研究Luman在哺乳動物生殖過程中的作用提供試驗依據(jù),也為認識內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與內(nèi)分泌之間的關(guān)系提供了一個新的思路。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S814.1
【圖文】：

圖 1-1 Luman 結(jié)構(gòu)與活化示意圖膜內(nèi)蛋白水解酶；TMD，跨膜區(qū)域；ZIP，亮氨酸拉鏈區(qū)域；AD，轉(zhuǎn)錄激活區(qū)Fig 1-1 The diagram of Luman structure and activeulm; RIP, Regulated intramembrane proteolysis; TMD, Transmleucine zipper; BD, DNAbinding domain; AD,Active domai物學(xué)功能在 HSV-1 病毒感染過程的作用被發(fā)現(xiàn)后，越來越功能的研究上。研究表明，在細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時水解激活釋放 N 端活性區(qū)域，調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的轉(zhuǎn)錄man 可以促進軸突的再生和延長，同時還會影響海可以通過改變糖皮質(zhì)激素受體（Glucocorticoid Recc糖皮質(zhì)激素刺激的效應(yīng)。還有研究表明 Luman 與雌的復(fù)制和釋放有關(guān)系。質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

圖 2-1 酶催化膽固醇轉(zhuǎn)變?yōu)椴G酮示意圖g 2-1 Enzyme-catalyzed conversion of cholesterol to testoste調(diào)節(jié)成的過程非常復(fù)雜，受多種通路和因子的共同調(diào)節(jié)外，機體內(nèi)其他因素也能調(diào)控睪酮的合成(Che合成的調(diào)節(jié)睪酮分泌的過程受線粒體結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)。正常情況下體內(nèi)酶的活性，調(diào)節(jié)相關(guān)的生理過程。LH 的刺激的活性，促進膽固醇的運輸，增加睪酮的合成(Du類固醇激素的合成主要在線粒體膜上進行，所以分泌至關(guān)重要(Issop et al. 2015)。酮合成的調(diào)節(jié)中類固醇激素合成酶 3β-HSD、Cyp11a1 和 Cyp17（Fibroblast Growth Factors，F(xiàn)GF9）和胰島素生長

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王曉云,張健,李健,段相林;睪丸間質(zhì)細胞分泌功能調(diào)節(jié)因素的研究進展[J];解剖科學(xué)進展;2002年03期

2 童國遐;胰島素樣生長因子-Ⅰ mRNA調(diào)節(jié)睪丸間質(zhì)細胞的功能[J];生理科學(xué)進展;1991年02期

3 湯雪明;大鼠睪丸間質(zhì)細胞的自體吞噬活動[J];實驗生物學(xué)報;1988年01期

4 劉建忠;睪丸間質(zhì)細胞調(diào)控的研究現(xiàn)狀[J];草食家畜;1994年03期

5 童國遐;白蛋白是一種作用于睪丸間質(zhì)細胞的生物活性蛋白質(zhì)[J];生理科學(xué)進展;1990年02期

6 黃洋;靳輝;曹霞;李鵬飛;姜曉龍;陳建偉;姚曉磊;趙妙妙;呂麗華;;一種簡便的機械法分離綿羊睪丸間質(zhì)細胞的研究[J];黑龍江動物繁殖;2014年05期

7 肖愛嬌,王晶磊;睪丸間質(zhì)細胞睪酮生成的影響因素及作用機理[J];實用臨床醫(yī)學(xué);2002年03期

8 孫杰;施誠仁;席曄斌;李偉毅;李懷遠;;大鼠睪丸間質(zhì)細胞移植的實驗研究[J];中華男科學(xué)雜志;2008年09期

9 高潔,申立山,韓秀婕;睪丸間質(zhì)細胞及淋巴管的超微結(jié)構(gòu)[J];解剖科學(xué)進展;2000年03期

10 楊建明,吳向東,蔣學(xué)之,丁訓(xùn)誠,吳曉蕓;鎘對大鼠睪丸間質(zhì)細胞脂質(zhì)過氧化的影響[J];中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志;1998年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 湯雪明;張惠心;易靜;張嵐;;睪丸間質(zhì)細胞的吸附內(nèi)吞過程[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 胡園園;李曉珩;蘇慧娜;單鴛鴛;王義炎;董瑤瑤;陳東鑫;朱琦琦;李林溪;李軍偉;胡國新;連慶泉;Jian Jin;葛仁山;;宮內(nèi)暴露鄰苯二甲酸二環(huán)己酯對胎兒型睪丸間質(zhì)細胞的影響[A];浙江省毒理學(xué)會第二屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2015年

3 馬海田;韓正康;王國杰;鄒思湘;;大豆異黃酮植物雌激素對大鼠睪丸間質(zhì)細胞分泌睪酮機理的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2004學(xué)術(shù)年會暨第五屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2004年

4 劉建中;郭海彬;李曉原;鄧春華;孫祥宙;段艷芳;李燕;;激光照射大鼠睪丸間質(zhì)細胞的初步研究[A];中國光學(xué)學(xué)會2006年學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

5 李發(fā)弟;馬友記;趙有璋;夏東;趙茹茜;陳杰;;重組生長激素對豬睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌的影響[A];動物生理生化學(xué)分會第八次學(xué)術(shù)會議暨全國反芻動物營養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2004年

6 董偉航;孫大林;金保方;;睪丸間質(zhì)細胞內(nèi)調(diào)控StAR影響睪酮合成因素的研究進展[A];第十二次全國中西醫(yī)結(jié)合男科學(xué)術(shù)大會暨全國中西醫(yī)結(jié)合男科診療技術(shù)研修班暨2017上海市中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會上海市中醫(yī)藥學(xué)會泌尿男科專業(yè)委員會學(xué)術(shù)年會講義論文資料匯編[C];2017年

7 劉昊;梁文妹;;食用白酒對大鼠睪丸間質(zhì)細胞內(nèi)StAR表達及血清睪酮水平的影響[A];中國解剖學(xué)會2015年年會論文文摘匯編[C];2015年

8 鐘曼麗;王占友;;鋅轉(zhuǎn)運體ZnT8參與睪丸間質(zhì)細胞睪酮合成的分子機制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

9 孫杰;施誠仁;張忠德;;異體睪丸間質(zhì)細胞移植治療原發(fā)性性腺功能低下癥[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

10 曲揚華;修朋;高月鋒;羅海玲;;維生素E對綿羊睪丸間質(zhì)細胞睪酮合成關(guān)鍵酶活性的影響[A];2017年全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會暨養(yǎng)羊?qū)W分會第七次全國會員代表大會論文集[C];2017年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王磊;Luman在小鼠睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌過程中的作用及機制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

2 應(yīng)鋒;壬基酚經(jīng)口攝入后在雄性大鼠體內(nèi)分布及其對大鼠睪丸間質(zhì)細胞影響的研究[D];南京大學(xué);2014年

3 李明;內(nèi)皮素-1對大鼠睪丸間質(zhì)細胞的作用[D];軍醫(yī)進修學(xué)院;2001年

4 王鮮忠;仔豬睪酮合成快速調(diào)節(jié)機制的研究[D];西南農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

5 趙秀軍;氧化應(yīng)激和慢性炎癥影響睪丸間質(zhì)細胞衰老的作用機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

6 張燁敏;輻射致小鼠不育癥模型的建立及睪丸間質(zhì)細胞損傷的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 胡威;腎上腺髓質(zhì)素在大鼠睪丸間質(zhì)細胞中的抗炎及抗凋亡機制研究[D];武漢大學(xué);2016年

8 楊超;骨鈣素在睪丸間質(zhì)細胞中表達及功能研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2014年

9 楊艷;小鼠胚胎干細胞和成纖維細胞誘導(dǎo)分化為類睪丸間質(zhì)細胞研究[D];暨南大學(xué);2016年

10 王華曦;bFGF與IGF1對大鼠睪丸間質(zhì)細胞再生及睪酮分泌影響的初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 彭曉利;KISS1/GPR54系統(tǒng)在山羊睪丸間質(zhì)細胞自分泌的功能研究[D];西南大學(xué);2018年

2 陸敏杰;CREBZF對小鼠睪酮生成的影響及作用機制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2018年

3 先藝;睪丸間質(zhì)細胞Prl3c1過表達轉(zhuǎn)基因小鼠建立與生物學(xué)功能初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

4 楊佳亮;白藜蘆醇對雄性生殖系統(tǒng)的抗氧化損傷研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 吳高風(fēng);棉酚對細毛羊睪丸間質(zhì)細胞和精液品質(zhì)影響的研究[D];石河子大學(xué);2010年

6 楊智青;中藥復(fù)方對兔睪丸間質(zhì)細胞的作用研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2006年

7 吳旭鵬;維生素A代謝異常對大鼠睪丸間質(zhì)細胞發(fā)育的影響[D];暨南大學(xué);2017年

8 高慧艷;氯化汞對大鼠原代睪丸間質(zhì)細胞類固醇激素合成的影響[D];鄭州大學(xué);2010年

9 喬慧蓮;TGF-β1信號通路調(diào)節(jié)睪丸間質(zhì)細胞分泌雌激素的機制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2017年

10 李陽;膽固醇對體外大鼠睪丸間質(zhì)細胞分泌睪酮的影響研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2017年

本文編號：2718002