【摘要】：偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的一種豬烈性傳染病。豬是其唯一自然宿主及主要傳染源。感染后可導(dǎo)致妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎及木乃伊胎,公豬不育和育肥豬呼吸系統(tǒng)癥狀。初生仔豬主要表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)癥狀,病死率高達(dá)100%,但目前還沒有特效藥物治療,主要以疫苗預(yù)防為主。2011年以來,中國(guó)很多豬場(chǎng)相繼發(fā)病,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。研究表明我國(guó)流行的PRV毒株為基因II型變異株,Bartha-K61弱毒疫苗免疫不能對(duì)其起到防控作用。PRV UL56蛋白(pUL56)屬于II型膜蛋白,研究發(fā)現(xiàn)pUL56可促進(jìn)PRV在神經(jīng)元之間的傳播,且對(duì)病毒的毒力有一定的影響。本研究以pUL56為研究對(duì)象,篩選與其互作的含有WW結(jié)構(gòu)域(domain)的宿主蛋白。通過免疫共沉淀(Co-immuoprecipiated,Co-IP)實(shí)驗(yàn)確定了與pUL56相互作用的WW-domain宿主蛋白:Bcl-2相關(guān)永生基因3(Bcl-2 associated athanogene 3,BAG3)蛋白、神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)發(fā)育下調(diào)蛋白4(Neural precursor cell expressed developmentally down regulated 4,Nedd4)和ITCH。利用激光共聚焦實(shí)驗(yàn)確定了表達(dá)帶有綠色熒光蛋白(GFP)的GFP-pUL56與HA-mBAG3、HA-mNedd4及HA-sITCH在轉(zhuǎn)染的HEK293T細(xì)胞高爾基體上存在共定位。通過互作,GFP-pUL56可將細(xì)胞質(zhì)分布的HA-mBAG3、HA-mNedd4及HA-sITCH重新定位于高爾基體。前期研究已證實(shí)多種病毒蛋白可通過其編碼的PPXY基序(PY motif)與含有WW-domain的宿主蛋白產(chǎn)生互作。為驗(yàn)證pUL56與宿主蛋白的互作是否通過PY motif發(fā)揮作用,本研究將pUL56截短表達(dá)為N末端、中間區(qū)域(包含全部PY motif)及C末端。分段Co-IP實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明BAG3、Nedd4和ITCH主要與pUL56中間區(qū)域互作。此外,pUL56 C末端與Nedd4也存在互作。本研究將pUL56編碼的4個(gè)PY motif突變?yōu)锳AXY。Co-IP實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明隨著PY motif突變的增加,pUL56與宿主蛋白互作能力逐漸減弱,其中pUL56 PY motif全部突變后與BAG3和ITCH完全失去互作能力,而與Nedd4仍存在微弱的互作;激光共聚焦實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PY motif全部突變后,Nedd4和ITCH與pUL56在細(xì)胞內(nèi)僅存在微弱的共定位信號(hào)。此外,pUL56可介導(dǎo)宿主蛋白BAG3、Nedd4和ITCH表達(dá)下調(diào)。其中,pUL56 PY motif在Nedd4及ITCH的下調(diào)過程中發(fā)揮作用,而對(duì)BAG3的下調(diào)無作用。因此,pUL56介導(dǎo)的BAG3下調(diào)存在其他分子機(jī)制。綜上,本研究闡明了PRV pUL56與宿主蛋白BAG3、Nedd4及ITCH之間存在相互作用及其互作的分子機(jī)制。并且,pUL56可顯著下調(diào)WW-domain宿主蛋白的表達(dá),為揭示PRV pUL56的毒力表型奠定了分子基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.651
【圖文】：

粒子結(jié)構(gòu)皰疹病毒 1 型（Suid herpesvirus 1，SuHV-1），水痘病毒屬成員，DNA 雙鏈病毒，在進(jìn)化上與 virus，HSV）高度同源，兩者的病毒粒子結(jié)構(gòu)極的 PRV 病毒粒子呈圓形或橢圓形，直徑約 150～（如圖 1.1）：由內(nèi)而外依次為由纏繞成圓柱狀的線；蛋白衣殼是由呈二十面體對(duì)稱的殼粒組成，其毒的核衣殼；在核衣殼外有一層非晶體狀蛋白樣著連接核衣殼與病毒囊膜的橋梁作用；包圍在病病毒囊膜，囊膜上鑲嵌著病毒編碼的 10 余種糖要作用[5, 8, 12, 13]。

圖 1.2 PRV 基因組的線性圖：基因組及轉(zhuǎn)錄體系（圖片來自 Ashley E. Reynolds，2005） Linear map of the PRV genome: genome and transcript org（Figure adapted fromAshley E. Reynolds, 2005）部分衣殼蛋白是根據(jù) HSV-1 的研究中推算出來或 VP5）由 UL19 編碼成 162 個(gè)殼體（150 個(gè)六鄰6 個(gè)二十面體晶格。UL19 的結(jié)構(gòu)排列及序列在所碼衣殼直徑約為 125 nm[16]。每個(gè)六鄰體由 6 個(gè)5（VP26）分子組成衣殼的邊緣和表面，12 個(gè)五六鄰體之間由 UL38（VP19C）、UL18（VP23）及 接。其中 11 個(gè)五聚體是由 UL19（VP5）組成的 UL6 分子構(gòu)成的獨(dú)特的圓柱形通道[17]。每個(gè)成熟的子、900 個(gè) UL35（VP26）分子、640 個(gè) UL18 分（VP19）和 12 個(gè) UL6 分子（蛋白通道），這個(gè) DNA 基因組進(jìn)入包裝成預(yù)成型的衣殼[16]。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 朱慶虎;黃駿明;;近10年我國(guó)豬偽狂犬病研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜禽傳染病;1996年06期

本文編號(hào)：2715143