【摘要】：偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的一種豬烈性傳染病。豬是其唯一自然宿主及主要傳染源。感染后可導致妊娠母豬流產、產死胎及木乃伊胎,公豬不育和育肥豬呼吸系統(tǒng)癥狀。初生仔豬主要表現為神經系統(tǒng)癥狀,病死率高達100%,但目前還沒有特效藥物治療,主要以疫苗預防為主。2011年以來,中國很多豬場相繼發(fā)病,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經濟損失。研究表明我國流行的PRV毒株為基因II型變異株,Bartha-K61弱毒疫苗免疫不能對其起到防控作用。PRV UL56蛋白(pUL56)屬于II型膜蛋白,研究發(fā)現pUL56可促進PRV在神經元之間的傳播,且對病毒的毒力有一定的影響。本研究以pUL56為研究對象,篩選與其互作的含有WW結構域(domain)的宿主蛋白。通過免疫共沉淀(Co-immuoprecipiated,Co-IP)實驗確定了與pUL56相互作用的WW-domain宿主蛋白:Bcl-2相關永生基因3(Bcl-2 associated athanogene 3,BAG3)蛋白、神經前體細胞表達發(fā)育下調蛋白4(Neural precursor cell expressed developmentally down regulated 4,Nedd4)和ITCH。利用激光共聚焦實驗確定了表達帶有綠色熒光蛋白(GFP)的GFP-pUL56與HA-mBAG3、HA-mNedd4及HA-sITCH在轉染的HEK293T細胞高爾基體上存在共定位。通過互作,GFP-pUL56可將細胞質分布的HA-mBAG3、HA-mNedd4及HA-sITCH重新定位于高爾基體。前期研究已證實多種病毒蛋白可通過其編碼的PPXY基序(PY motif)與含有WW-domain的宿主蛋白產生互作。為驗證pUL56與宿主蛋白的互作是否通過PY motif發(fā)揮作用,本研究將pUL56截短表達為N末端、中間區(qū)域(包含全部PY motif)及C末端。分段Co-IP實驗結果證明BAG3、Nedd4和ITCH主要與pUL56中間區(qū)域互作。此外,pUL56 C末端與Nedd4也存在互作。本研究將pUL56編碼的4個PY motif突變?yōu)锳AXY。Co-IP實驗結果表明隨著PY motif突變的增加,pUL56與宿主蛋白互作能力逐漸減弱,其中pUL56 PY motif全部突變后與BAG3和ITCH完全失去互作能力,而與Nedd4仍存在微弱的互作;激光共聚焦實驗結果表明PY motif全部突變后,Nedd4和ITCH與pUL56在細胞內僅存在微弱的共定位信號。此外,pUL56可介導宿主蛋白BAG3、Nedd4和ITCH表達下調。其中,pUL56 PY motif在Nedd4及ITCH的下調過程中發(fā)揮作用,而對BAG3的下調無作用。因此,pUL56介導的BAG3下調存在其他分子機制。綜上,本研究闡明了PRV pUL56與宿主蛋白BAG3、Nedd4及ITCH之間存在相互作用及其互作的分子機制。并且,pUL56可顯著下調WW-domain宿主蛋白的表達,為揭示PRV pUL56的毒力表型奠定了分子基礎。
【學位授予單位】：吉林農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S852.651
【圖文】：

粒子結構皰疹病毒 1 型（Suid herpesvirus 1，SuHV-1），水痘病毒屬成員，DNA 雙鏈病毒，在進化上與 virus，HSV）高度同源，兩者的病毒粒子結構極的 PRV 病毒粒子呈圓形或橢圓形，直徑約 150～（如圖 1.1）：由內而外依次為由纏繞成圓柱狀的線；蛋白衣殼是由呈二十面體對稱的殼粒組成，其毒的核衣殼；在核衣殼外有一層非晶體狀蛋白樣著連接核衣殼與病毒囊膜的橋梁作用；包圍在病病毒囊膜，囊膜上鑲嵌著病毒編碼的 10 余種糖要作用[5, 8, 12, 13]。

圖 1.2 PRV 基因組的線性圖：基因組及轉錄體系（圖片來自 Ashley E. Reynolds，2005） Linear map of the PRV genome: genome and transcript org（Figure adapted fromAshley E. Reynolds, 2005）部分衣殼蛋白是根據 HSV-1 的研究中推算出來或 VP5）由 UL19 編碼成 162 個殼體（150 個六鄰6 個二十面體晶格。UL19 的結構排列及序列在所碼衣殼直徑約為 125 nm[16]。每個六鄰體由 6 個5（VP26）分子組成衣殼的邊緣和表面，12 個五六鄰體之間由 UL38（VP19C）、UL18（VP23）及 接。其中 11 個五聚體是由 UL19（VP5）組成的 UL6 分子構成的獨特的圓柱形通道[17]。每個成熟的子、900 個 UL35（VP26）分子、640 個 UL18 分（VP19）和 12 個 UL6 分子（蛋白通道），這個 DNA 基因組進入包裝成預成型的衣殼[16]。

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 朱慶虎;黃駿明;;近10年我國豬偽狂犬病研究進展[J];中國畜禽傳染病;1996年06期

本文編號：2715143