【摘要】：巖羊(Pseudois nayaur)是賀蘭山國家級自然保護區(qū)內(nèi)分布最為廣泛的小反芻獸類,在我國被列為二級重點保護野生動物。寄生蟲病往往會給野生動物的健康帶來較大的危害。而目前對于野生巖羊寄生蟲病的研究,國內(nèi)鮮有報道。本研究中,對于救護失敗的幼齡巖羊,主要是對毛尾線蟲病的病原進行鑒定及遺傳進化分析。對于因種群管理而捕獲的巖羊,研究工作主要針對的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲,進行群體遺傳學(xué)的相關(guān)研究。因為捻轉(zhuǎn)血矛線蟲在中國小反芻獸類中是一種較為常見的病原體,有較強的致病性。本實驗中,我們從救護失敗的幼齡巖羊盲腸中發(fā)現(xiàn)四條毛尾線蟲,根據(jù)尾部形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的差異,初步鑒定為兩種(T skrjabini和Trichuris.sp)。為了更準確的鑒定,我們利用巢式PCR方法的擴增了這四條毛尾線蟲的18S-ITS1-5.8S的片段基因,進行分子學(xué)鑒定以及遺傳進化分析�；蛐蛄斜葘Πl(fā)現(xiàn),依據(jù)形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)分成的兩種毛尾線蟲,無論是種間還是種內(nèi)18S序列及5.8S序列較為保守;ITS1序列的種間差異較大,范圍在10.69%～11.29%之間,而種內(nèi)的ITS1序列的差異較小,僅為0.20%～1.06%。對這四條毛尾線蟲進行遺傳進化分析,與形態(tài)學(xué)的鑒定結(jié)果一致,這四條毛尾線蟲在進化樹上分為獨立的兩個進化枝。其中一種與T.skrjabini構(gòu)成姐妹類群(Clad A)。因此感染此幼齡巖羊的毛尾線蟲其中一種為T.skrjabini(Clad B)。另外一種巖羊毛尾線蟲在進化樹上與來自黑山羊的毛尾線蟲聚集在一起。因此,在賀蘭山分布的野生巖羊受到來自兩種不同的毛尾線蟲病原的威脅。本實驗中,我們從因種群管理而捕獲的5只老弱病殘巖羊體內(nèi)分離得到57條捻轉(zhuǎn)血矛線蟲,又從巖羊自然棲息地的附件的一個山村(第七農(nóng)場大隊)內(nèi)的家養(yǎng)綿羊內(nèi)采集到20條捻轉(zhuǎn)血矛線蟲。通過PCR方法,擴增得到這77條捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的ITS2全序列。序列分析表明這77條蟲均屬于捻轉(zhuǎn)血矛線蟲,且共有10個基因類型。其中GT1、2以及3為主要的ITS2基因類型,巖羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲和綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的ITS2核苷酸多樣性分別為0.008和0.004。通過PCR方法,擴增出這77條捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的nadh4基因片段進行種群遺傳分析,其中有73個單倍型,55個來自巖羊,18個來自綿羊,單倍型多樣性分別為0.999和0.995。此外又從數(shù)據(jù)庫中下載了中國其他七個地區(qū)的家養(yǎng)反芻類(綿羊、山羊)的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲nadh4單倍型序列,共計142條。AMOVA分析有94.21%的變異是出現(xiàn)種群內(nèi)部,僅有5.35%的變異出現(xiàn)種群間。無論進化樹拓撲結(jié)構(gòu)還是單倍型網(wǎng)絡(luò)圖,來自野生巖羊與家養(yǎng)反芻類的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲之間無任何分化。種群間Fst數(shù)值趨近0,種群間的基因流指數(shù)Nm幾乎全部大于1。因此野生巖羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲種群與家養(yǎng)反約類捻轉(zhuǎn)血矛線蟲種群之間無種群分化,且存在較高的基因流。
【圖文】：

２．４．１巖羊毛尾線蟲形態(tài)學(xué)特征逡逑經(jīng)２．２．１步驟處理后，共從該巖羊的盲腸中分離得到４條毛尾線蟲成蟲。顯微鏡下逡逑觀察，，均為雌性。根據(jù)尾部形態(tài)學(xué)特征，初步可以分為兩種。形態(tài)如圖２－１所示：逡逑丨歐：秦逡逑圖２－１兩種毛尾線蟲尾部形態(tài)學(xué)及蟲卵結(jié)構(gòu)照片。比例尺：ａ，邋１００邋ｐｍ；邋ｂ，２０邋ｐｍ；邋ｃ，１００邋ｐｍ；邋ｄ，邋２０邋ｐｍ．逡逑Ｆｉｇ邋２－１邋Ｐｈｏｔｏｍｉｃｒｏｇｒａｐｈｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｔｗｏ邋Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ邋ｓｐｅｃｉｅｓ邋ｉｓｏｌａｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｅ邋ｗｉｌｄ邋ｂｌｕｅ邋ｓｈｅｅｐ，邋ａ．邋ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ逡逑ｅｎｄ邋ｏｆ邋Ｔ．邋ｓｂｊａｂｉｎｉ；邋ｂ．邋ｅｇｇｓ邋ｏｆ邋Ｔ．邋ｓｋｒｊａｂｉｎｉ；邋ｃ．邋ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ邋ｅｎｄ邋ｏｆ邋Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ．邋ｓｐ＼邋ｄ．邋ｅｇｇｓ邋ｏｆ邋Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ．邋ｓｐ．邋Ｓｃａｌｅ逡逑ｂａｒｓ：邋ａ，邋１００邋｜ｉｍ；邋ｂ，邋２０邋＾ｉｍ；邋ｃ，邋１００邋ｆｉｍ；邋ｄ，邋２０邋｜ｉｍ．逡逑圖２－１中的ａ和ｂ屬于其中一類毛尾線蟲成蟲和蟲卵，ｃ和ｄ屬于毛尾線蟲的另一逡逑種。上圖箭頭所示，毛尾線蟲的尾部結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯的差異。對于這兩種類型毛尾線蟲蟲逡逑卵，兩端都存在明顯的栓塞。此外，對兩種類型蟲卵的大小進行了測量。１＞：７１．０５－逡逑７６．５６邋ｘ邋３７．６３邋－邋４０．５２邋（７４．２２邋ｘ邋３８．８４，邋ｎ邋＝邋１２）邋；邋ｄ：邋６３．３８邋－邋７３．０８邋ｘ邋３４．８４邋－邋３７．１９邋（６８．１９邋ｘ逡逑３６．２６

序列號為ＭＧ５７３３０５邋－邋ＭＧ５７３３０８。經(jīng)序列的注釋解析，四條１８Ｓ－ＩＴＳ１－５．８Ｓ逡逑序列的中１８Ｓ的長度為２６２邋－邋２６２ｂｐ，ＩＴＳ１序列的長度范圍為（４７０到４９５ｂｐ），擴增得逡逑到的５．８Ｓ的序列長度一致，均為ｌｌｂｐ下圖（
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S858.9

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本文編號：2702450