【摘要】：初情期是動(dòng)物從幼年向獲得繁殖能力的過渡時(shí)期,也是雌性動(dòng)物初次發(fā)情并排卵的時(shí)期,象征著母畜具備了繁衍生息的能力。以往關(guān)于初情期的研究多集中在嚙齒類和靈長(zhǎng)類動(dòng)物,因其機(jī)制較為復(fù)雜,目前研究尚不完善。本研究利用F-MSAP技術(shù)和BSP方法雙結(jié)合的思路探索DNA甲基化對(duì)母羊初情期啟動(dòng)關(guān)鍵基因在下丘腦表達(dá)的影響。研究結(jié)果如下:1、在初情期啟動(dòng)的三個(gè)發(fā)育階段中共發(fā)現(xiàn)了2409個(gè)條帶,且主要集中于21-309bp。初情期前和臨近初情期階段以全甲基化模式為主,初情期階段以半甲基化模式為主。初情期啟動(dòng)時(shí)下丘腦的總體甲基化水平為34.20%,顯著低于臨近初情期(61.96%)階段,P0.05。表明,在母羊初情期啟動(dòng)前后,DNA甲基化的模式和水平存在顯著差異。2、在初情期發(fā)育過程中,NKB基因在母羊下丘腦中有表達(dá),且隨著初情期的發(fā)育,NKB基因表達(dá)量逐漸升高,且初情期和臨近初情期顯著高于初情前期階段。3、隨著初情期的啟動(dòng),NKB啟動(dòng)子區(qū)總體甲基化水平顯著降低,初情期總體甲基化水平與臨近初情期階段差異不顯著;啟動(dòng)子區(qū)特定位點(diǎn)(-1261、-1254和-836bp)甲基化水平顯著降低。本研究表明,基因組DNA甲基化和NKB基因發(fā)生甲基化是影響母羊初情期啟動(dòng)的重要因素。
【圖文】：

3 號(hào) 0.262 0 4 號(hào) 0.272 0 5 號(hào) 0.286 0 1 號(hào) 2 號(hào) 3 號(hào) 4 號(hào) 5 號(hào) 1 號(hào) 2 號(hào)0.7390.7970.7860.7920.8031.0901.1060000010 3 號(hào) 1.107 1 4 號(hào) 1.094 1 5 號(hào) 1.107 1組織基因組 DNA 提取結(jié)果組織基因組 DNA 用 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。由于月齡 5 只羊，每只羊兩個(gè)對(duì)照組，樣本量較多，所以譜來(lái)呈現(xiàn)。結(jié)果見圖 1。并測(cè)定 OD 值，，結(jié)果見表 9

符合 F-MSAP 要求可供后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。 雙酶切結(jié)果結(jié)果見圖 2，H 組和 M 組條帶非常均勻、清晰，無(wú)明顯單獨(dú)片段，證分、效果良好，為提高后續(xù)預(yù)擴(kuò)增以及選擇性擴(kuò)增效率奠定基礎(chǔ)。 預(yù)擴(kuò)增結(jié)果將連接接頭后的產(chǎn)物進(jìn)行 20 倍稀釋，作為模板進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增。1%瓊脂糖后，結(jié)果見圖 3。條帶集中在 500bp 以下，并且均勻清晰，符合選擇性求。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S826

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2689764