【摘要】：隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium)和畢氏腸微孢子蟲(chóng)(Enterocytozoon bieneusi)是兩種重要的腸道原蟲(chóng),能夠感染包括人在內(nèi)的多種動(dòng)物。目前,這兩種寄生蟲(chóng)已在我國(guó)的人、家畜、伴侶動(dòng)物、嚙齒類、禽類、甚至大熊貓上有所報(bào)道,但有關(guān)其在馬中的感染情況、蟲(chóng)種或者基因型則鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)收集了2015年8月至2017年5月期間采自四川省和云南省共7個(gè)馬術(shù)俱樂(lè)部的馬糞便樣品共計(jì)441份,利用巢式聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)的方法擴(kuò)增隱孢子蟲(chóng)18S rRNA基因鑒定出陽(yáng)性糞便樣品6份,總的感染率為1.4%;對(duì)隱孢子蟲(chóng)18S rRNA基因序列分析共鑒定出兩種隱孢子蟲(chóng)蟲(chóng)種:人隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium hominis,C.hominis)和安氏隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium andersoni,C.andersoni);通過(guò)對(duì)C.hominis的gp60(60 kDa glycoprotein gene)基因的DNA序列多態(tài)性進(jìn)行分析,鑒定其亞型為IIdA15。運(yùn)用多位點(diǎn)序列分型(multilocus sequence typing,MLST)對(duì)C.andersoni分離株進(jìn)行亞型分析,鑒定出A6、A5、A2、A1亞型,該亞型曾在我國(guó)河南省和四川省駱駝上有所報(bào)道,被認(rèn)為是具有種間傳播潛力的亞型。本試驗(yàn)基于畢氏腸微孢子蟲(chóng)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(Internal Transcribed Spacer,ITS)基因鑒定出陽(yáng)性糞便樣品87份,總的感染率為19.7%,共有10個(gè)基因型被發(fā)現(xiàn):基因型horse1,horse2,D和SC02為已知的基因型,基因型SCH1-4和YNH1-2為新基因型。對(duì)畢氏腸微孢子蟲(chóng)進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)基因型D、SC02、horse1和SCH1-3位于具有人獸共患可能性的進(jìn)化組Group 1中,基因型SCH4屬于具有宿主特異性的進(jìn)化組Group 2,基因型horse2和YNH1-2則屬于進(jìn)化組Group 6中。運(yùn)用MLST分型方法(MSl,MS3,MS4,MS7)對(duì)87份陽(yáng)性樣本進(jìn)行擴(kuò)增,分別有13,5,9,14個(gè)樣本在該位點(diǎn)擴(kuò)增成功,其中共4個(gè)樣本在四個(gè)位點(diǎn)全部擴(kuò)增,形成3個(gè)MLGs(MLG1-3)。綜上所述,本試驗(yàn)對(duì)四川省和云南省部分地區(qū)的馬進(jìn)行隱孢子蟲(chóng)和畢氏腸微孢子蟲(chóng)檢測(cè),其中,隱孢子蟲(chóng)鑒定出C.hominis和C.andersoni。C.hominis的新亞型IIdA15擴(kuò)大了該蟲(chóng)種的亞型數(shù)據(jù)庫(kù),C.andersoni的亞型A6、A5、A2、A1與該地區(qū)牛源和駱駝源亞型一致,在該地區(qū)可能存在馬與其它動(dòng)物相互傳播的可能性;畢氏腸微孢子蟲(chóng)鑒定出人獸共患基因型D和SC02,該基因型在該地區(qū)的人和多種動(dòng)物有所報(bào)道,結(jié)果表示馬可作為一個(gè)潛在的感染源對(duì)人或者其他動(dòng)物進(jìn)行傳播。
【圖文】：

用 ContigExpress 軟件進(jìn)行拼接和處理，下載的相關(guān)序列進(jìn)行比對(duì)分析。件比對(duì)后的序列應(yīng)用 MEGA6 軟件中毗統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，同時(shí)采取自展值（Boo，四川省成都市青白江馬術(shù)俱樂(lè)部 2 份樣樂(lè)部分別有 1 份和 3 份樣品（D11、E8增，獲得約 820bp 目標(biāo)條帶（見(jiàn)圖 2-1

圖 3-1 馬源畢氏腸微孢子蟲(chóng) ITS 部分?jǐn)U增結(jié)果Fig 3-1 The results of E.bieneusi positive samples from horses2.2 測(cè)序結(jié)果將 87 份擴(kuò)增成功的樣品進(jìn)行分析，共有 10 條不同序列，序列長(zhǎng)度分別是 378bp、393bp、404bp、390bp、389bp、381bp、380bp、363bp、379bp 和 379bp。每一個(gè)馬術(shù)俱樂(lè)部均檢測(cè)出陽(yáng)性樣品，各馬術(shù)俱樂(lè)部檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表 3-4。用 SPSS 22.0 軟件各馬術(shù)俱樂(lè)部的感染率進(jìn)行顯著性分析，χ2 = 0.02，，df = 7, P < 0.05，差異顯著。將測(cè)序得到的序列提交至 GenBank 后，序列登錄號(hào)為：KX276705 KX276714。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S852.723

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本文編號(hào)：2688116