【摘要】：隱孢子蟲(Cryptosporidium)和畢氏腸微孢子蟲(Enterocytozoon bieneusi)是兩種重要的腸道原蟲,能夠感染包括人在內(nèi)的多種動物。目前,這兩種寄生蟲已在我國的人、家畜、伴侶動物、嚙齒類、禽類、甚至大熊貓上有所報道,但有關(guān)其在馬中的感染情況、蟲種或者基因型則鮮有報道。本試驗收集了2015年8月至2017年5月期間采自四川省和云南省共7個馬術(shù)俱樂部的馬糞便樣品共計441份,利用巢式聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)的方法擴增隱孢子蟲18S rRNA基因鑒定出陽性糞便樣品6份,總的感染率為1.4%;對隱孢子蟲18S rRNA基因序列分析共鑒定出兩種隱孢子蟲蟲種:人隱孢子蟲(Cryptosporidium hominis,C.hominis)和安氏隱孢子蟲(Cryptosporidium andersoni,C.andersoni);通過對C.hominis的gp60(60 kDa glycoprotein gene)基因的DNA序列多態(tài)性進行分析,鑒定其亞型為IIdA15。運用多位點序列分型(multilocus sequence typing,MLST)對C.andersoni分離株進行亞型分析,鑒定出A6、A5、A2、A1亞型,該亞型曾在我國河南省和四川省駱駝上有所報道,被認為是具有種間傳播潛力的亞型。本試驗基于畢氏腸微孢子蟲轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(Internal Transcribed Spacer,ITS)基因鑒定出陽性糞便樣品87份,總的感染率為19.7%,共有10個基因型被發(fā)現(xiàn):基因型horse1,horse2,D和SC02為已知的基因型,基因型SCH1-4和YNH1-2為新基因型。對畢氏腸微孢子蟲進行系統(tǒng)進化分析發(fā)現(xiàn)基因型D、SC02、horse1和SCH1-3位于具有人獸共患可能性的進化組Group 1中,基因型SCH4屬于具有宿主特異性的進化組Group 2,基因型horse2和YNH1-2則屬于進化組Group 6中。運用MLST分型方法(MSl,MS3,MS4,MS7)對87份陽性樣本進行擴增,分別有13,5,9,14個樣本在該位點擴增成功,其中共4個樣本在四個位點全部擴增,形成3個MLGs(MLG1-3)。綜上所述,本試驗對四川省和云南省部分地區(qū)的馬進行隱孢子蟲和畢氏腸微孢子蟲檢測,其中,隱孢子蟲鑒定出C.hominis和C.andersoni。C.hominis的新亞型IIdA15擴大了該蟲種的亞型數(shù)據(jù)庫,C.andersoni的亞型A6、A5、A2、A1與該地區(qū)牛源和駱駝源亞型一致,在該地區(qū)可能存在馬與其它動物相互傳播的可能性;畢氏腸微孢子蟲鑒定出人獸共患基因型D和SC02,該基因型在該地區(qū)的人和多種動物有所報道,結(jié)果表示馬可作為一個潛在的感染源對人或者其他動物進行傳播。
【圖文】：

用 ContigExpress 軟件進行拼接和處理，下載的相關(guān)序列進行比對分析。件比對后的序列應(yīng)用 MEGA6 軟件中毗統(tǒng)發(fā)育進化樹，同時采取自展值（Boo，四川省成都市青白江馬術(shù)俱樂部 2 份樣樂部分別有 1 份和 3 份樣品（D11、E8增，獲得約 820bp 目標條帶（見圖 2-1

圖 3-1 馬源畢氏腸微孢子蟲 ITS 部分擴增結(jié)果Fig 3-1 The results of E.bieneusi positive samples from horses2.2 測序結(jié)果將 87 份擴增成功的樣品進行分析，共有 10 條不同序列，序列長度分別是 378bp、393bp、404bp、390bp、389bp、381bp、380bp、363bp、379bp 和 379bp。每一個馬術(shù)俱樂部均檢測出陽性樣品，各馬術(shù)俱樂部檢測結(jié)果見表 3-4。用 SPSS 22.0 軟件各馬術(shù)俱樂部的感染率進行顯著性分析，χ2 = 0.02，，df = 7, P < 0.05，差異顯著。將測序得到的序列提交至 GenBank 后，序列登錄號為：KX276705 KX276714。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.723

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