【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的一種急性、高度接觸性的病毒性傳染病。PRRSV感染可造成嚴(yán)重的間質(zhì)性肺炎、血管炎、心肌炎和腦炎等,典型癥狀表現(xiàn)為妊娠母豬的繁殖障礙以及仔豬的呼吸困難和生長(zhǎng)遲緩。目前已知在PRRSV感染部位可釋放大量的炎癥因子(如IL-6、IL-8、TNF-α等),并釋放某些蛋白質(zhì)參與免疫炎癥反應(yīng),這暗示炎癥反應(yīng)在PRRSV感染和致病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。已有研究表明,PRRSV感染PAM和MARC-145細(xì)胞能夠促進(jìn)高遷移率族蛋白B1(HMGB1)的分泌表達(dá),進(jìn)而增強(qiáng)PRRSV誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng),這也提示某些分泌蛋白與PRRSV的免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)過程密切相關(guān)。C1QBP(complement component 1,q subcomponent binding protein)是補(bǔ)體分子C1q結(jié)合蛋白,能夠與C1q的球狀頭部結(jié)構(gòu)域結(jié)合,表達(dá)于多種組織和細(xì)胞(如上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和血小板等)。最初發(fā)現(xiàn)C1QBP主要定位于線粒體基質(zhì),后發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞膜、細(xì)胞核也有定位,同時(shí)也可分泌至細(xì)胞外。另外,C1QBP是一個(gè)多配體結(jié)合蛋白,能夠與病原微生物相關(guān)蛋白、細(xì)胞蛋白和血漿蛋白等結(jié)合,廣泛參與炎癥及感染進(jìn)程。但C1QBP在PRRSV誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用尚不清楚,因此我們檢測(cè)了原核/真核表達(dá)的豬源C1QBP蛋白對(duì)PRRSV誘導(dǎo)的炎癥因子產(chǎn)生的影響,具體研究?jī)?nèi)容如下:1.豬C1QBP的序列分析對(duì)來源于不同物種的C1QBP的氨基酸序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn),豬C1QBP與鼠的同源性為93.6%,與人C1QBP的同源性為83.3%。進(jìn)化樹分析表明豬源C1QBP與鼠源C1QBP在進(jìn)化上位于同一個(gè)大的分支上,并單獨(dú)屬于一個(gè)小分支。2.豬C1QBP的原核表達(dá)與純化將擴(kuò)增獲得的豬源C1QBP基因克隆至原核表達(dá)載體pET-28a中,構(gòu)建了表達(dá)豬源C1QBP蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-C1QBP。將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)和SDS-PAGE檢測(cè),證實(shí)豬源C1QBP蛋白獲得了高效表達(dá),大小約35kDa,并主要以可溶性形式存在,經(jīng)鎳柱純化獲得濃度為0.5mg/mL的純化蛋白。利用內(nèi)毒素去除試劑盒去除純化蛋白中的內(nèi)毒素,去除效率達(dá)50%左右。MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)重組蛋白C1QBP在低于80μg/mL時(shí)對(duì)細(xì)胞的活性無明顯影響。3.原核表達(dá)并純化的豬C1QBP蛋白誘導(dǎo)炎癥因子的產(chǎn)生將原核表達(dá)并純化的豬C1QBP蛋白處理PAM細(xì)胞,通過熒光定量PCR檢測(cè)IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和RANTES等炎癥因子mRNA水平的表達(dá),結(jié)果C1QBP處理后能夠促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)。進(jìn)一步通過Western blot和IFA檢測(cè)發(fā)現(xiàn),C1QBP處理PAM細(xì)胞能上調(diào)p65的磷酸化水平并促進(jìn)其轉(zhuǎn)位入核。以上結(jié)果表明原核表達(dá)純化的豬C1QBP蛋白具有促炎性因子產(chǎn)生的作用。4.干擾C1QBP抑制LPS/PRRSV誘導(dǎo)的炎癥因子的產(chǎn)生將C1QBP的干擾分子轉(zhuǎn)染PAM細(xì)胞,再用LPS刺激或用PRRSV感染,通過熒光定量檢測(cè)干擾C1QBP對(duì)LPS/PRRSV誘導(dǎo)的炎癥因子產(chǎn)生的影響,結(jié)果顯示干擾C1QBP能夠抑制LPS/PRRSV誘導(dǎo)的炎癥因子的產(chǎn)生。5.PRRSV感染促進(jìn)C1QBP的分泌表達(dá)且不改變其線粒體定位對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期PRRSV感染MARC-145細(xì)胞的分泌蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)分析,發(fā)現(xiàn)C1QBP顯著上調(diào),于是利用Western blot檢測(cè)了PRRSV感染MARC-145/PAM細(xì)胞后不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)和上清中C1QBP的表達(dá)情況,結(jié)果顯示PRRSV感染后細(xì)胞內(nèi)C1QBP表達(dá)量變化不明顯,而上清中C1QBP的量顯著增多,說明PRRSV感染確實(shí)能夠促進(jìn)C1QBP的分泌表達(dá)。通過間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PRRSV感染不改變C1QBP的線粒體定位。6.表達(dá)的豬C1QBP增強(qiáng)PRRSV誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)用原核表達(dá)并純化的C1QBP蛋白處理PRRSV感染的MARC-145和PK-15~(CD163)細(xì)胞,熒光定量檢測(cè)炎癥因子轉(zhuǎn)錄水平的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)C1QBP能夠增強(qiáng)PRRSV誘導(dǎo)的炎癥因子mRNA水平的表達(dá),熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)和Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)原核表達(dá)的C1QBP能夠增強(qiáng)PRRSV誘導(dǎo)的NF-κB激活和p65磷酸化。進(jìn)一步利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞HEK-293T和昆蟲細(xì)胞Sf9表達(dá)了豬C1QBP蛋白,將其純化后處理PRRSV感染的PAM細(xì)胞,熒光定量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HEK-293T細(xì)胞和Sf9細(xì)胞表達(dá)的C1QBP蛋白均能增強(qiáng)PRRSV誘導(dǎo)的炎癥因子表達(dá)。
【圖文】：

性和持續(xù)感染性給臨床上PRRS的防治帶來了巨大的挑戰(zhàn)（Chun PRRSV 的病原特性RRSV 不分節(jié)段，有囊膜，為單股正鏈 RNA 病毒（Conzelmann 尼多病毒目的動(dòng)脈炎病毒科動(dòng)脈炎病毒屬（Cavanagh 1996）。病徑 55~60nm，核衣殼呈現(xiàn)不對(duì)稱的線性排列（Dokland 2010）。病敏感，但不耐堿，一般的消毒劑都可以殺滅該病毒，在空氣中可感染力（陳元慶等 2009）。PRRSV 只能在少數(shù)幾種細(xì)胞上增殖V 能在豬肺泡巨噬細(xì)胞上生長(zhǎng)，，后來證實(shí)該病毒也能在非洲綠猴腎、公豬的睪丸細(xì)胞等細(xì)胞上增殖（Molitor et al 1997）。 PRRSV 的分子生物學(xué)研究RRSV 基因組全長(zhǎng)約 15kb，由至少 10 個(gè)開放閱讀框（open reading Conzelmann et al 1993），兩個(gè)相鄰的開放讀碼框之間都有部分重，具體的基因結(jié)構(gòu)如圖 1-1 所示。

PRRSV 與炎癥反應(yīng) PRRSV 入侵機(jī)體的過程中，宿主的免疫系統(tǒng)發(fā)揮了重要作用，因此學(xué)者了關(guān)于 PRRSV 免疫學(xué)方面的研究。HP-PRRSV 感染可激發(fā)宿主的免疫炎引起嚴(yán)重的間質(zhì)性肺炎（Gómez-Laguna et al 2010，Morgan et al 2016）。據(jù)RRSV 感染的豬體內(nèi) IL-1β、IL-6、IL-8 和 TNF-α 等炎癥因子水平顯著升高（014，Chen et al 2014，Liu et al 2015）。此外，研究發(fā)現(xiàn) HP-PRRSV 基因組 R導(dǎo) PAM 細(xì)胞炎性小體的激活和 IL-1β 的分泌，這與 PRRSV 的持續(xù)性感染制密切相關(guān)（Lunney et al 2010b，Chen et al 2018）。另一方面，HP-PRRSV過其編碼的蛋白質(zhì)抑制宿主的先天免疫，損傷 PAM 細(xì)胞而阻斷局部免疫V 感染常使宿主對(duì)其他病原體更易感，如 2 型豬圓環(huán)病毒（porcine circovi，PCV2）、經(jīng)典豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）、豬鏈球菌、桿菌、豬霍亂沙門氏菌和豬肺炎支原體等，這些繼發(fā)感染的病原體也可以圖 1-2 PRRSV 病毒顆粒示意圖（Music and Gagnon 2010）Fig. 1-2 The sketch of PRRSV particle
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.28

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周佳慧;王君艷;;炎癥反應(yīng)期間胃腸道的保護(hù)策略[J];影像研究與醫(yī)學(xué)應(yīng)用;2017年09期

2 ;每一餐都引發(fā)炎癥[J];大自然探索;2017年04期

3 ;健康老人抑郁癥狀與炎癥反應(yīng)相關(guān)[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年04期

4 楊良斌;;炎癥反應(yīng) 數(shù)據(jù)聚焦分析[J];科學(xué)觀察;2009年04期

5 劉國(guó)掾;;接種過金黃色葡萄球菌試驗(yàn)性傷口的炎癥反應(yīng)和血流[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).創(chuàng)傷與外科基本問題分冊(cè);1989年01期

6 段林;高根五;;炎癥反應(yīng)物測(cè)定用于外科嚴(yán)重感染的早期診斷[J];醫(yī)學(xué)科技;1989年01期

7 費(fèi)雯婕;張琳;宋光耀;;代謝性炎癥反應(yīng)與胰島素抵抗關(guān)系研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年10期

8 何賢輝;何健;歐陽東云;;細(xì)胞自噬與炎癥反應(yīng)相互作用的研究進(jìn)展[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2013年02期

9 王娟,趙龍吟,司書毅;動(dòng)脈粥樣硬化過程中的炎癥反應(yīng)[J];中國(guó)分子心臟病學(xué)雜志;2004年04期

10 王梅;袁玉剛;楊陽;孫云云;丁巖冰;楊林;;大黃早期干預(yù)對(duì)高脂血癥性胰腺炎炎癥反應(yīng)和血脂代謝的影響[J];中國(guó)中醫(yī)急癥;2019年12期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張彥峰;莫紅纓;黎毅敏;;髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1結(jié)合多肽與膿毒癥炎癥反應(yīng)[A];第三屆重癥醫(yī)學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2009年

2 歐陽文;何慧娟;王意;;圍術(shù)期炎癥反應(yīng)與術(shù)后認(rèn)知功能障礙(英文)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第二十次全國(guó)麻醉學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2012年

3 濮紅梅;尹忠誠(chéng);劉秉成;李勝開;馮錦紅;;血液透析患者血清IL-10與炎癥反應(yīng)及營(yíng)養(yǎng)狀況的關(guān)系研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

4 陸志偉;黃慧;姜純國(guó);徐作軍;;輔助性T淋巴細(xì)胞與特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化關(guān)系的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

5 王婧;;血管重塑的炎癥反應(yīng)的機(jī)制研究[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)張錫鈞基金第十四屆全國(guó)青年優(yōu)秀生理學(xué)學(xué)術(shù)論文綜合摘要、中國(guó)生理學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2017年

6 張衛(wèi)茹;侯凡凡;劉尚喜;郭志堅(jiān);周展眉;;晚期糖基化終產(chǎn)物增加動(dòng)脈粥樣硬化部位的炎癥反應(yīng)[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國(guó)中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

7 俞佳;王仲;;內(nèi)源性氣體信號(hào)分子硫化氫與炎癥反應(yīng)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)第十三次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)大會(huì)論文集[C];2010年

8 周曉艷;徐營(yíng)營(yíng);謝兆宏;許繼平;畢建忠;;炎癥反應(yīng)與神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病的研究進(jìn)展[A];2011全國(guó)老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

9 肖晗;李昊;王晶晶;張幼怡;;白介素18剪切活化啟動(dòng)急性β腎上腺素受體激動(dòng)引起的心臟炎癥反應(yīng)及纖維化[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)張錫鈞基金第十四屆全國(guó)青年優(yōu)秀生理學(xué)學(xué)術(shù)論文綜合摘要、中國(guó)生理學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2017年

10 張會(huì)云;崔克亮;曹書華;;炎癥反應(yīng),凝血機(jī)制與MODS的發(fā)病機(jī)理的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診分會(huì)第五屆全國(guó)危重病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 王蔚;我國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)人體炎癥反應(yīng)新機(jī)制[N];大眾科技報(bào);2007年

2 楊一唯邋記者 王春;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)人體炎癥反應(yīng)新機(jī)制[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

3 記者白毅;炎癥反應(yīng)中淋巴結(jié)重塑新機(jī)制被揭示[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

4 記者 徐瑞哲;第三者“插足”抑制炎癥反應(yīng)[N];解放日?qǐng)?bào);2007年

5 知陶;把炎癥反應(yīng)排除在外[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

6 記者 耿挺;尋找炎癥反應(yīng)蛋白[N];上�？萍紙�(bào);2007年

7 信文;“IL-10”蛋白調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

8 韓秀霞;Capase-12蛋白參與炎癥反應(yīng)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

9 北京協(xié)和醫(yī)院教授 陳德昌;諾獎(jiǎng)為科研帶來的啟示[N];健康報(bào);2019年

10 陳金偉;通心絡(luò)可抑制動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 高琳;MiRNA-137通過靶向調(diào)控MK2抑制脊髓損傷后炎癥反應(yīng)及凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2019年

2 王楠;超短波通過調(diào)節(jié)MK2/TNF-α通路抑制炎癥反應(yīng)促進(jìn)脊髓損傷修復(fù)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2019年

3 梁珂;脾酪氨酸激酶在動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)中的作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2019年

4 張新勝;辛酸抑制炎癥反應(yīng)改善動(dòng)脈粥樣硬化及其機(jī)制研究[D];軍事科學(xué)院;2019年

5 吳華;不同膜平衡超濾影響體外循環(huán)炎癥反應(yīng)的臨床研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

6 倪志宇;CCK-8對(duì)炎癥反應(yīng)中促炎及抗炎性細(xì)胞因子表達(dá)的調(diào)控機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

7 林淑們;調(diào)控凝血活性對(duì)老年大鼠炎癥反應(yīng)影響的機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

8 宋爽;PRRSV誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)及其調(diào)控機(jī)制[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

9 柳楠;腸道病毒分子流行病學(xué)及腸道病毒71型感染致炎癥反應(yīng)機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2014年

10 李鵬飛;β-arrestins對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中炎癥反應(yīng)的調(diào)控機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 易珊;硫酸鈹致16HBE細(xì)胞炎癥反應(yīng)及其對(duì)microRNA表達(dá)譜的影響[D];南華大學(xué);2019年

2 衛(wèi)瑩;豬C1QBP在PRRSV誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的潛在作用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

3 張顯凱;朊蛋白對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)及炎癥反應(yīng)的影響[D];華東師范大學(xué);2019年

4 劉愛敏;多巴胺經(jīng)NLRP3炎癥小體抑制脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)[D];山東大學(xué);2019年

5 吐尼克·木拉提別克;基質(zhì)金屬蛋白酶9促進(jìn)急性胰腺炎炎癥反應(yīng)和細(xì)胞壞死[D];上海交通大學(xué);2017年

6 楊靜;Cereblon通過促進(jìn)c-Jun泛素化降解抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡[D];蘇州大學(xué);2018年

7 張曉峰;OPCABG術(shù)前NLR、PLR與術(shù)后新發(fā)房顫的相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2018年

8 余鵬;內(nèi)外源性LXRs激動(dòng)劑和DEX在LPS誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜炎癥反應(yīng)中的作用及其機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

9 朱邦暉;可溶型CD74通過NF-κB信號(hào)通路調(diào)控肺炎癥反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

10 朱紅;天然化合物TI110對(duì)LPS介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的抑制作用及其分子機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2673446