【摘要】：哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞成熟過程需要進(jìn)行兩次連續(xù)的不對(duì)稱分裂,最終形成體積差異巨大的子細(xì)胞:大體積的卵母細(xì)胞和兩種體積較小的極體。不對(duì)稱分裂現(xiàn)象是哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的典型特征,不對(duì)稱分裂后的卵母細(xì)胞是高度極化的細(xì)胞。精卵結(jié)合后,細(xì)胞重新恢復(fù)了對(duì)稱分裂,但是在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中形成的極性特征卻得以保留并影響早期胚胎的極性。小鼠卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂過程包括卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)、紡錘體形成、紡錘體遷移、排出第一極體。這些過程需要染色體、細(xì)胞骨架蛋白及多種蛋白分子協(xié)同有序發(fā)揮作用以確保對(duì)這個(gè)過程的精準(zhǔn)調(diào)控。細(xì)胞松弛素B(Cytochalasin B,CB)是肌動(dòng)蛋白聚合抑制劑,結(jié)合在微絲末端來阻斷肌動(dòng)蛋白在該部位的聚合,是細(xì)胞骨架可逆性穩(wěn)定劑。本實(shí)驗(yàn)以小鼠卵母細(xì)胞為材料,用CB處理卵母細(xì)胞使之發(fā)生對(duì)等分裂和胞質(zhì)分裂失敗,并以此為模型檢測不對(duì)稱分裂過程的特征、機(jī)制并初步探究極性復(fù)合體在哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞極性建立中的作用。本研究獲得的主要結(jié)果如下:1.CB對(duì)小鼠卵母細(xì)胞成熟的影響設(shè)置三個(gè)濃度梯度(分別為1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL)CB處理小鼠卵母細(xì)胞,通過數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)低濃度的CB處理并不影響小鼠卵母細(xì)胞GVBD的發(fā)生,而高濃度的CB會(huì)影響GVBD發(fā)生率。CB會(huì)顯著降低第一極體排出率,并且呈現(xiàn)劑量依賴性降低,卵母細(xì)胞呈現(xiàn)對(duì)等分裂或,胞質(zhì)分裂失敗。另外CB處理的時(shí)間越久,細(xì)胞恢復(fù)胞質(zhì)分裂的能力越低。2.CB破壞不對(duì)稱分裂的典型特征CB處理后,通過細(xì)胞免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)及熒光灰度值分析,通過對(duì)比正常組,發(fā)現(xiàn)CB破壞紡錘體的形態(tài)和遷移,并影響p-MAPK的分布和表達(dá);CB破壞肌動(dòng)蛋白帽的形成和無皮質(zhì)顆粒區(qū)的形成并擾亂線粒體的分布。3.CB擾亂主要極性蛋白的分布CB處理后,通過細(xì)胞免疫熒光染色實(shí)驗(yàn),通過對(duì)比正常組,發(fā)現(xiàn)CB擾亂極性蛋白a PKC、Par6a、Crb3、DLG1的極性分布,從而使卵母細(xì)胞的極性遭到破壞。4.CB影響胞質(zhì)分裂相關(guān)因子表達(dá)量CB處理后,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)處理組和對(duì)照組中卵母細(xì)胞中的胞質(zhì)分裂相關(guān)因子Arp2/3,Cdc42,Fyn,Anillin,αActinin4,Septin2和Septin7在RNA水平上表達(dá)量進(jìn)行檢測,通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)Arp2/3,Cdc42,Fyn,αActinin4,Septin7這些因子顯著上調(diào),Anillin顯著下調(diào),而Septin2則變化不明顯�？傊緦�(shí)驗(yàn)表明CB破壞小鼠卵母細(xì)胞成熟并破壞不對(duì)稱分裂的典型特征;擾亂了主要極性蛋白但卵母細(xì)胞中的分布,并影響胞質(zhì)分裂相關(guān)因子的表達(dá)量。
【圖文】：

granule-free domain，CGFD），這是極體的排出位點(diǎn)(Sun et al. 2012)，皮質(zhì)著這一過程建立。在減數(shù)分裂中后期轉(zhuǎn)換時(shí)，收縮環(huán)在富含 F-actin 的皮成，，并環(huán)繞著紡錘體中部區(qū)域。在減數(shù)分裂的后期，富含肌動(dòng)蛋白的區(qū)同時(shí)收縮環(huán)開始收縮，隨后排出第一極體(Yi et al.2013)。卵母細(xì)胞排出第阻滯在第二次減數(shù)分裂中期（metaphase Ⅱ, MⅡ），此時(shí)的紡錘體定位在區(qū)下并與皮質(zhì)表面平行。卵母細(xì)胞被激活后，卵母細(xì)胞從 MⅡ阻滯中釋旋轉(zhuǎn)后排出第二極體(Maro et al. 2002)，減數(shù)分裂結(jié)束。卵母細(xì)胞細(xì)胞核的不對(duì)稱分裂表現(xiàn)在染色體的非隨機(jī)分離。生發(fā)泡破vesicle breakdown，GVBD）后形成的紡錘體是對(duì)稱的，在紡錘體向皮質(zhì)程中，皮質(zhì)區(qū)的 CDC42 誘導(dǎo)紡錘體微管發(fā)生不對(duì)稱的酪氨酸修飾。而自這種不對(duì)稱性操控小鼠卵母細(xì)胞的染色體分離過程，使染色體發(fā)生非隨本文將從細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核兩個(gè)方面對(duì)卵母細(xì)胞的不對(duì)稱分裂現(xiàn)象、形及與調(diào)控機(jī)制進(jìn)行闡述，并對(duì)染色體的非隨機(jī)分離機(jī)制的研究前景和未來討。

第一章 哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞不對(duì)稱分裂的分子機(jī)制細(xì)胞不對(duì)稱分裂中的作用的正確定位至關(guān)重要，并且紡錘體形態(tài)的異裂過程(Sun et al. 2013)。生發(fā)泡（germinal 現(xiàn)相對(duì)均勻的分布, GVBD 后微管在染色體MⅡ期成熟的小鼠卵母細(xì)胞中，微管主要聚錘體(Mao et al. 2014)。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S814.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張俊玉;呂珊;�；勖�;雷安民;;哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞不對(duì)稱分裂的研究進(jìn)展[J];遺傳;2018年04期

2 馬遠(yuǎn)娜;王允山;吉愛國;;上皮極性蛋白的研究進(jìn)展[J];生命的化學(xué);2013年05期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 陳西銳;小鼠Mfn2基因在卵母細(xì)胞成熟過程中的作用研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2642376