【摘要】：體細(xì)胞核移植技術(shù)(somatic cell nuclear transfer,SCNT)雖然展現(xiàn)出廣泛的應(yīng)用前景,但效率低下是制約該項(xiàng)技術(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用的瓶頸。課題組前期基礎(chǔ)研究中顯示,體細(xì)胞核移植胚胎與體外受精胚胎的第一次卵裂時(shí)間存在差異,早期SCNT胚胎中α-tubulin乙�；�、組蛋白H3K9me3甲基化水平存在異常。因此,尋找影響克隆胚胎發(fā)育的調(diào)控因子一直是該研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。最近,越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)精子來(lái)源的一些非遺傳物質(zhì)對(duì)早期胚胎發(fā)育至關(guān)重要,這些物質(zhì)的缺失可能是導(dǎo)致SCNT胚胎發(fā)育異常的一個(gè)重要原因。本試驗(yàn)利用一站式mi RNAs分離試劑盒分離了牛精子中的miRNAs,并將提取的精子mi RNAs注入SCNT胚。結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組SCNT胚胎第一次卵裂發(fā)生時(shí)間較對(duì)照組晚,并且囊胚質(zhì)量得到改善。為了進(jìn)一步研究SCNT和體外受精胚胎(IVF)之間由精子mi RNAs引起的首次卵裂時(shí)間差異的機(jī)制,本試驗(yàn)采用免疫熒光染色的方法,從核和胞質(zhì)兩方面檢測(cè)了補(bǔ)充精子miRNAs對(duì)克隆SCNT胚胎的胞質(zhì)骨架蛋白和DNA組蛋白重塑的影響。結(jié)果表明,精子mi RNAs注射后,SCNT胚胎在原核期和2-細(xì)胞時(shí)期核的H3K9me3甲基化水平顯著降低,第一次卵裂的后期和末期骨架蛋白α-tubulin乙酰化水平顯著升高;與對(duì)照組相比,補(bǔ)充精子miRNAs組胚胎兩個(gè)原核樣結(jié)構(gòu)形成率和48 h卵裂率顯著提高,第一次卵裂時(shí)間延長(zhǎng),第7天囊胚率顯著升高,且囊胚內(nèi)細(xì)胞凋亡顯著降低。這些結(jié)果暗示精子miRNAs可能同時(shí)通過(guò)影響胚胎胞質(zhì)骨架蛋白和DNA組蛋白表觀修飾來(lái)調(diào)控胚胎第一次卵裂和胚胎發(fā)育。本研究表明原核期中發(fā)生的一系列發(fā)育事件對(duì)早期SCNT胚胎后續(xù)發(fā)育非常關(guān)鍵,精子miRNAs對(duì)這一時(shí)期的胚胎發(fā)育事件可能起著重要的調(diào)控作用。本研究的開(kāi)展為提高SCNT效率提供了新思路。
【圖文】：

圖 2-1 體細(xì)胞與精子 miRNA 分離結(jié)果Figure 2-1 Segregation results of somatic cells and sperm miRNAsNAs 定量量結(jié)果如下圖 2-2，為了檢測(cè)分離的 miRNAs 的質(zhì)量，我miR-34c 和 miR-449b 作為參照，對(duì)所提取得 miRNA 進(jìn)行細(xì)胞與合子中精源性 miRNAs 相對(duì)含量差異顯著（a，bAs 后的成熟卵母細(xì)胞相對(duì)卵母細(xì)胞中 miR-34c 和 miR-4

圖 2-1 體細(xì)胞與精子 miRNA 分離結(jié)果Figure 2-1 Segregation results of somatic cells and sperm miRNAs2.3.3 精子 miRNAs 定量miRNA 定量結(jié)果如下圖 2-2，為了檢測(cè)分離的 miRNAs 的質(zhì)量，我們選擇兩種已經(jīng)報(bào)道的精源性 miR-34c 和 miR-449b 作為參照，對(duì)所提取得 miRNA 進(jìn)行定量檢測(cè)。結(jié)果顯示，，成熟卵母細(xì)胞與合子中精源性 miRNAs 相對(duì)含量差異顯著（a，b，c 表示差異顯著），注射 miRNAs 后的成熟卵母細(xì)胞相對(duì)卵母細(xì)胞中 miR-34c 和 miR-449b 含量顯著增加(P<0.05)。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S823

【參考文獻(xiàn)】

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1 江雯;劉能輝;;體外受精患者精子miRNA-21,miRNA-34c,miRNA-140,miRNA-375與胚胎質(zhì)量的相關(guān)性研究[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年08期

2 曾仁仁;張俊華;張銀旭;;miR-485-5p靶向調(diào)控Survivin基因?qū)θ私Y(jié)直腸癌HCT116細(xì)胞侵襲性的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年06期

3 Paul Graves;;Biogenesis of Mammalian MicroRNAs:A Global View[J];Genomics, Proteomics & Bioinformatics;2012年05期

本文編號(hào)：2616040