【摘要】：戊型肝炎(Hepatitis E,HE)由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)感染引起的一種急性肝炎,戊型肝炎病毒主要經(jīng)消化道傳播。近年研究發(fā)現(xiàn),HE作為一種人畜共患病,在人-豬的流行與傳播中扮演重要角色,嚴(yán)重威脅人類健康。本研究應(yīng)用血液生化學(xué)方法檢測感染動物血清中ALT和AST的肝功能變化水平,通過間接ELISA方法檢測動物血清中HEV IgG抗體的變化情況,應(yīng)用RT-PCR方法判斷動物是否感染HEV,利用組織病理學(xué)方法,觀察HEV感染對豬和大鼠肝臟造成的損傷,同時采用免疫組織化學(xué)染色法觀察了HEV ORF2蛋白在豬和大鼠肝臟中的定位表達(dá),結(jié)果如下:黑龍江哈爾濱市、齊齊哈爾市以及佳木斯市三不同地區(qū)規(guī)�；i場和散養(yǎng)戶豬均有出現(xiàn)食欲不振、尿液深黃、可視黏膜輕度發(fā)黃等癥狀。血清檢測ALT、AST等肝功能顯示:三個市散養(yǎng)戶血清樣品ALT、AST兩個指標(biāo)均高于規(guī)�；B(yǎng)殖場的陽性率,而三個市養(yǎng)殖場及散戶陽性率彼此之間差距不大。散養(yǎng)戶豬血清樣品HEV IgG陽性率均高于規(guī)模化養(yǎng)殖場的陽性率,而三個市養(yǎng)殖場及散戶HEV陽性率彼此之間差距不大。2月齡小豬的抗體血清樣品HEV IgG陽性率高于6月齡的豬。三個地區(qū)豬糞和豬血清樣本、屠宰場采集的豬肝臟樣品,通過RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn):所有豬糞樣品未檢出陽性,來自于散養(yǎng)戶的血清樣本陽性率均高于規(guī)�；B(yǎng)殖場的陽性率,屠宰場的豬肝部分樣品擴(kuò)增出HEV ORF2基因。屠宰場豬肝臟組織蘇木素-伊紅染色發(fā)現(xiàn)感染豬肝臟呈現(xiàn)肝臟組織出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤、纖維化、血管擴(kuò)張充血、肝細(xì)胞空泡變性等組織病理學(xué)變化。感染HEV ORF2抗原免疫組化陽性的反應(yīng)信號主要分布于肝細(xì)胞的胞漿或細(xì)胞核的核膜上。大鼠感染HEV通常在3d~5d出現(xiàn)下述癥狀:食欲不振、尿液深黃、可視黏膜輕度發(fā)黃。7d感染組大鼠血清ALT、AST的含量極顯著高于對照組大鼠,14d感染組大鼠血清ALT、AST的含量極顯著高于對照組大鼠。感染HEV大鼠血清樣品HEV IgG顯示:7d感染組大鼠血清HEV IgG抗體含量顯著高于對照組大鼠,14d感染組大鼠血清HEV IgG抗體含量極顯著高于對照組大鼠。感染大鼠在肝臟全部擴(kuò)增出HEV ORF2基因,部分動物血清擴(kuò)增出HEV ORF2基因,但擴(kuò)增情況明顯多于糞便。感染大鼠肝臟在不同感染天數(shù)呈現(xiàn)出眼形細(xì)胞浸潤、肝臟纖維化、血管擴(kuò)張充血、肝細(xì)胞空泡變性等組織病理學(xué)變化。感染大鼠HEV ORF2抗原免疫組化陽性的反應(yīng)主要分布于肝細(xì)胞的胞漿及腸道上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)。實驗結(jié)果顯示,黑龍江省哈爾濱地區(qū)、齊齊哈爾和佳木斯地區(qū)不同規(guī)�；B(yǎng)豬場均存在HEV的感染,以免疫組化技術(shù)和PCR技術(shù)均檢測到了病毒抗原和病毒核酸的存在,表明感染豬不同程度的存在帶毒現(xiàn)象。以大鼠為模型動物,感染HEV可以復(fù)制出與豬感染HEV相似的疾病特征,大鼠可以作為HEV的敏感實驗動物用于疾病的診斷。
【圖文】：

戊型肝炎病毒不穩(wěn)定，不耐熱，在溫度達(dá)到 56℃時 50%的 HEV 會失活，而當(dāng)溫度高達(dá)60℃時，幾乎所有的 HEV 都會失活[1]，反復(fù)凍融會導(dǎo)致病毒活性降低。HEV 對酸性環(huán)境以及高鹽、氯仿等化學(xué)物質(zhì)敏感。HEV 可長期保存于含有鎂離子和錳離子的堿性環(huán)境中。1.2.2 HEV 基因組編碼的病毒蛋白及病毒復(fù)制特點HEV 為單股正鏈 RNA 病毒，哺乳動物的 HEV 基因組全長約 7.5kb，禽 HEV 的基因組大小為 6.7kb�；蚪M 5′端有甲基鳥嘌呤帽子結(jié)構(gòu)，3′端有多聚腺苷 A（polyA）尾巴，HEV 病毒基因組含 3 個開放閱讀框（Open reading frames，ORFs）ORF1，ORF2，ORF3 和 5’端非編碼區(qū)、3’端非編碼區(qū)[39]。如圖圖 1-3 所示。

3 結(jié)果與分析3.1 HEV 感染豬的臨床發(fā)病特點和實驗室檢測結(jié)果3.1.1 HEV 感染豬的臨床發(fā)病特點多數(shù)豬感染 HEV 后，未表現(xiàn)任何的臨床反應(yīng)，采食、飲水未見異常，但看見比同齡發(fā)育較小，瘦弱。極少數(shù)豬表現(xiàn)為發(fā)病急，發(fā)熱、食欲不振、嘔吐、尿液深黃、眼睛和皮發(fā)黃，，采血進(jìn)行肝功能檢查，血液學(xué)看出 ALT 和 AST 升高明顯，豬只黃疸可持續(xù)數(shù)周，個別豬虛弱，消瘦死亡。3.1.2 HEV 感染豬的組織病理學(xué)變化屠宰場豬肝臟組織蘇木素-伊紅染色（H.E）鏡下觀察，76 份樣品結(jié)構(gòu)正常，肝小葉分界結(jié)構(gòu)清晰，主要由肝血竇和肝細(xì)胞索組成，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心索呈放射狀排列，索比例正常，匯管區(qū)未見纖維組織增生及炎細(xì)胞浸潤。90 份樣品 HE 染色僅有 14 份肝臟組織出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤、纖維化、血管擴(kuò)張充血、肝細(xì)胞空泡變性等組織病理學(xué)變化（圖 3-1、圖 3-2、表 3-1）
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S858.28

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2608251