發(fā)布時(shí)間：2020-03-26 03:15

【摘要】：目的及意義:為了在細(xì)胞水平上將中華田園犬的遺傳資源永久保存下來,并使保存下來的細(xì)胞能夠在犬超數(shù)排卵技術(shù)的基礎(chǔ)上為下一步核移植做準(zhǔn)備,本試驗(yàn)選取了八個(gè)月健康的北方中華田園犬作為研究對(duì)象,采用組織塊培養(yǎng)法構(gòu)建了犬耳緣組織的成纖維細(xì)胞系。根據(jù)ATCC的具體要求,經(jīng)原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)以及生物學(xué)特性的檢測建立健康可利用的細(xì)胞系。結(jié)果:本試驗(yàn)培養(yǎng)的細(xì)胞在培養(yǎng)的各個(gè)階段均呈現(xiàn)典型的成纖維細(xì)胞形態(tài)特征。原代培養(yǎng)因天數(shù)、密度不同出現(xiàn)個(gè)體差異,生長趨勢呈現(xiàn)放射狀或者漩渦狀。對(duì)于所構(gòu)建的細(xì)胞系,分別凍存了原代,二代,四代及六代。利用臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測細(xì)胞存活率,復(fù)蘇后比凍存前有降低趨勢,但均在95%以上。使用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)F2、F4、F6代細(xì)胞一周的數(shù)目變化,繪制了復(fù)蘇后細(xì)胞的生長曲線,均呈現(xiàn)“S”型,與細(xì)胞生長的一般規(guī)律相符。在含有15%胎牛血清的DMEM內(nèi)連續(xù)6次傳代,細(xì)胞形態(tài)特征及生長情況沒有顯著差異。培養(yǎng)過程中,進(jìn)行了微生物污染檢測;眼觀、鏡檢以及利用無抗生素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)的方式檢測細(xì)菌、真菌、及病毒。使用Hoechst 33258染色法檢測支原體。結(jié)果均為陰性,表明培養(yǎng)物沒有被污染。染色體核型分析:體外培養(yǎng)的中華田園犬耳部成纖維細(xì)胞正常染色體數(shù)是2n=78,包括38組常染色體,1組性染色體。在測定的中期細(xì)胞中,均以二倍體為主,占鏡檢細(xì)胞總數(shù)90%以上,表明所建立的細(xì)胞系遺傳性狀基本穩(wěn)定。結(jié)論:構(gòu)建的中華田園犬耳部成纖維細(xì)胞系符合ATCC細(xì)胞系構(gòu)建要求。
【圖文】：

原代細(xì)胞生長狀態(tài)及形態(tài)特征逡逑ｍｇｍ逡逑圖１犬耳部原代細(xì)胞ｎｄ邋（２００Ｘ）邐圖２犬耳部原代細(xì)胞１６ｄ邋（２００Ｘ）逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｅｌｌ邋ｏｆ邋ｄｏｇ邋ｅａｒ邋１邋Ｉｄ邋（２０0ｘ）邐Ｆｉｇ．２邋Ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｅｌｌ邋ｏｆ邋ｄｏｇｅａｒ邋１６ｄ邋（２０0ｘ）逡逑

原代細(xì)胞生長狀態(tài)及形態(tài)特征逡逑ｍｇｍ逡逑圖１犬耳部原代細(xì)胞ｎｄ邋（２００Ｘ）邐圖２犬耳部原代細(xì)胞１６ｄ邋（２００Ｘ）逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｅｌｌ邋ｏｆ邋ｄｏｇ邋ｅａｒ邋１邋Ｉｄ邋（２０0ｘ）邐Ｆｉｇ．２邋Ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｅｌｌ邋ｏｆ邋ｄｏｇｅａｒ邋１６ｄ邋（２０0ｘ）逡逑
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S829.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2600867