【摘要】：初步探討鹽霉素對雞原代心肌細(xì)胞的毒性作用及其毒性機(jī)制。采用差速貼壁法結(jié)合化學(xué)純化法分離雞原代心肌細(xì)胞,應(yīng)用免疫熒光法鑒定心肌細(xì)胞純度,給予1、5、10、20、50μg·mL-1鹽霉素處理后,觀察心肌細(xì)胞形態(tài),采用MTT法測定鹽霉素對心肌細(xì)胞活性的影響;比色法檢測心肌細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)釋放、肌酸激酶(CK)活性;流式細(xì)胞術(shù)分析鹽霉素對心肌細(xì)胞凋亡及線粒體膜電位的影響;電子顯微鏡觀察鹽霉素對心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響;熒光顯微鏡觀察鹽霉素對心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響;比色法測定鹽霉素對心肌細(xì)胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白酶活性的影響;qRT-PCR檢測Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、細(xì)胞色素C(Cyt-C)、Bax及Bcl-2mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明:分離所得雞原代心肌細(xì)胞形態(tài)良好,純度大于90%;鹽霉素以顯著的濃度-時(shí)間依賴性方式抑制心肌細(xì)胞生長并誘導(dǎo)細(xì)胞死亡;鹽霉素導(dǎo)致心肌細(xì)胞LDH釋放極顯著增加(P0.01),細(xì)胞內(nèi)CK酶活性增強(qiáng),呈濃度依賴性(P0.01);鹽霉素導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡率極顯著升高(P0.01),線粒體膜電位(ΔΨm)明顯下降(P0.01);電子顯微鏡觀察顯示鹽霉素導(dǎo)致心肌細(xì)胞線粒體嚴(yán)重腫脹、空泡化,嵴溶解甚至消失;鹽霉素導(dǎo)致心肌細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)顯著升高;細(xì)胞質(zhì)Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白酶活性均極顯著升高(P0.01);qRT-PCR結(jié)果表明凋亡相關(guān)基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Cyt-C及Bax mRNA轉(zhuǎn)錄上調(diào),Bcl-2mRNA轉(zhuǎn)錄下調(diào)(P0.01)。鹽霉素可以通過細(xì)胞凋亡引起雞心肌細(xì)胞死亡,線粒體途徑和死亡受體途徑可能共同參與了鹽霉素誘導(dǎo)的雞心肌細(xì)胞凋亡。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2583990