發(fā)布時(shí)間：2020-02-20 12:03

【摘要】：睪丸腫瘤細(xì)胞起源于生殖細(xì)胞和非生殖細(xì)胞,生殖細(xì)胞來(lái)源者主要為成熟的畸胎瘤,非生殖細(xì)胞瘤主要包括支持細(xì)胞瘤和間質(zhì)細(xì)胞瘤。本研究將貴賓犬的睪丸腫瘤樣組織制成石蠟切片,通過(guò)HE染色以及免疫組化染色的方法,鏡檢觀察睪丸腫瘤組織的細(xì)胞形態(tài)以及P53、Lin28a和OCT4等腫瘤發(fā)生相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果,通過(guò)病理切片HE染色顯示睪丸腫瘤組織細(xì)胞異常增生,導(dǎo)致正常的睪丸管腔結(jié)構(gòu)消失;腫瘤免疫組化檢測(cè)顯示在睪丸曲細(xì)精管的支持細(xì)胞內(nèi)OCT4、Lin28a以及P53等腫瘤發(fā)生相關(guān)蛋白表達(dá)呈陰性,而在曲細(xì)精管內(nèi)的生精細(xì)胞表達(dá)均呈陽(yáng)性。該結(jié)果對(duì)于臨床上輔助診斷犬的睪丸腫瘤具有一定的參考價(jià)值。
【圖文】：

中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)第47卷圖1犬睪丸腫瘤組織Fig.1Caninetesticulartumortissue學(xué)檢查、臨床細(xì)胞學(xué)檢查、病理組織學(xué)檢查和免疫學(xué)檢查等[1-2]。病理組織學(xué)檢查對(duì)于診斷腫瘤發(fā)生、腫瘤性質(zhì)、組織學(xué)類型、分化程度以及腫瘤的擴(kuò)散與轉(zhuǎn)移等都起著非常重要的作用，是臨床上確診方法[3]。免疫學(xué)檢查是利用一系列免疫學(xué)技術(shù)檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物，對(duì)腫瘤中異常表達(dá)的某些物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)[4]。這種檢查目前已適用或應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)，其對(duì)于早期、準(zhǔn)確診斷腫瘤具有重要的意義。P53、Lin28和OCT4等作為常見(jiàn)腫瘤檢測(cè)標(biāo)志，在人類腫瘤的診斷上已得到證實(shí)[5-10]。然而在越來(lái)越重要的寵物醫(yī)療中，相關(guān)腫瘤疾病的診斷方法也亟需拓展。本研究通過(guò)對(duì)寵物犬睪丸腫瘤進(jìn)行病理學(xué)觀察，并對(duì)Lin28a、P53和OCT4特異性蛋白進(jìn)行檢測(cè)，為寵物犬睪丸腫瘤的免疫學(xué)診斷方法提供科學(xué)參考。1材料與方法1.1病料組織貴賓犬睪丸腫瘤組織是2015年10月采自西北農(nóng)林科技大學(xué)西安動(dòng)物醫(yī)院一例病例。1.2主要試劑環(huán)保透明劑（編號(hào)BA7002B）購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。無(wú)水乙醇、檸檬酸、檸檬酸鈉均購(gòu)自西隴科學(xué)股份有限公司。BSA購(gòu)自Gibico公司。蘇木素染色液（編號(hào)C0107）購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司。家兔源抗P53蛋白抗體（編號(hào)bs-8687R）、家兔源抗Lin28蛋白抗體（編號(hào)bs-8443R）、家兔源抗OCT4蛋白抗體（編號(hào)bs-0830R）均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。DAB染色液試劑盒（編號(hào)SP-9000）購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。1.3組織切片將經(jīng)4％多聚甲醛固定的犬睪丸腫瘤樣品（0.6cm3）送至楊凌示范區(qū)醫(yī)院病理科進(jìn)行石蠟包埋并進(jìn)行連續(xù)切片（厚度約為2m）。將切片分為兩組，分別用于HE染色和免疫組化染色。1.4常規(guī)HE染色透明：水浴60℃，Baso

第8期騰鑫等：犬睪丸腫瘤組織中腫瘤標(biāo)志物L(fēng)in28a和OCT4及P53的表達(dá)圖2睪丸腫瘤組織的HE染色Fig.2HEstainingoftesticulartumortissueA：犬睪丸腫瘤組織20×；B：犬睪丸腫瘤組織20×A，B：Caninetesticulartumortissue，respectively.20×圖5睪丸腫瘤組織P53分布Fig.5P53stainingoftesticulartumortissueA：犬睪丸腫瘤組織10×；B：犬睪丸腫瘤組織20×；C：犬睪丸腫瘤組織40×；D：犬睪丸腫瘤組織40×A：Caninetesticulartumortissue，10×；B：Caninetesticulartumortis-sue，20×；C：Caninetesticulartumortissue，40×；D：Caninetesticulartumortissue，40×圖4睪丸腫瘤組織的OCT4分布Fig.4OCT4stainingoftesticulartumortissueA：犬睪丸正常組織20×；B：犬睪丸腫瘤組織40×；C：犬睪丸腫瘤組織40×；D：犬睪丸腫瘤組織40×A：Caninetesticularnormaltissue，20×；B：Caninetesticulartumortis-sue，40×；C：Caninetesticulartumortissue，40×；D：Caninetesticulartumortissue，40×經(jīng)Lin28a特異性抗體的免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，寵物犬睪丸腫瘤組織的曲細(xì)精管管腔內(nèi)的細(xì)胞胞漿呈黃色，精原細(xì)胞胞漿呈棕黃色，而支持細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)藍(lán)色。即精原細(xì)胞、曲細(xì)精管管腔內(nèi)的細(xì)胞表達(dá)Lin28a蛋白，而支持細(xì)胞不表達(dá)Lin28a蛋白（見(jiàn)圖3）。Lin28作為一種致癌基因，在腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和腫瘤的發(fā)展，其在精原細(xì)胞、曲細(xì)精管管腔內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)異常高。用抗OCT4特異性抗體進(jìn)行免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，曲細(xì)精管管腔內(nèi)細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)淡黃色和黃色，支持細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，，即曲細(xì)精管管腔內(nèi)的細(xì)胞顯著表達(dá)OCT4蛋白，支持細(xì)胞不表達(dá)OCT4（見(jiàn)圖4）。在精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌和卵巢生殖細(xì)胞惡性腫瘤中，OCT4是一?

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