【摘要】：為檢測弓形蟲循環(huán)抗原,以實現(xiàn)弓形蟲急性感染的早期診斷,本研究建立了基于ABC(avidin biotin-peroxidase complex)放大系統(tǒng)的雙抗體夾心ELISA方法。通過制備弓形蟲排泄分泌抗原(ESA)并免疫動物,經(jīng)3種抗原的篩選以獲得抗循環(huán)抗原(CAg)的單抗,以方陣滴定法確定最佳多抗包被濃度和單抗工作濃度,利用夾心法和ABC放大系統(tǒng)建立檢測弓形蟲循環(huán)抗原的夾心ABC-ELISA方法,用該方法對人工感染犬血清和其他陽性血清樣本進行檢測以確定該方法的檢出時間和準確性,并應用于臨床樣品的檢測。結果:獲得了3株針對不同抗原表位的單克隆抗體,并對CAg有較高特異性。雙抗體夾心ABC-ELISA反應條件:兔多抗包被濃度為3.7μg/mL,生物素標記3A5、3E5和10F5-3單抗在混合工作液中的濃度分別為0.1、0.13和0.12μg/mL。該ELISA方法對ESA最低檢測限為11.9 ng/mL,并與隱孢子蟲早期感染牛血清、血吸蟲尾蚴早期感染牛血清、艾美耳球蟲早期感染雞血清、犬瘟熱急性感染早期血清、犬細小病毒急性感染血清無交叉反應。用該ELISA方法檢測人工感染的犬,于感染后2 d血清即顯示陽性,該方法能明顯區(qū)分標準陽性血清和陰性血清。用該方法檢測68份豬臨床血樣(其中包括2份標準陽性血清),檢測結果與Nest-PCR結果一致。表明該雙抗體夾心ABC-ELISA方法特異性強、敏感性高,可用于弓形蟲急性感染的早期或活動期的診斷。

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