【摘要】：鴨瘟又稱鴨病毒性腸炎,是由鴨腸炎病毒引起的常見于鴨、鵝及其他雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性、高度接觸性傳染病。該病是一種泛嗜性感染的疾病,感染后發(fā)病率及死亡率都很高,給我國的水禽養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重制約了我國水禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。鴨瘟病毒基因組龐大,雖然GenBank中已經(jīng)發(fā)表了幾個毒株的全基因組序列,但針對各基因的相關(guān)研究分析依然很少。本試驗(yàn)從山東高青某鴨場的發(fā)病鴨中分離到一株病毒,經(jīng)PCR鑒定和動物回歸試驗(yàn)確定為鴨瘟病毒。根據(jù)GenBank中已發(fā)表的DEV基因組序列,設(shè)計合成了一對擴(kuò)增UL2基因的特異性引物,分別提取該DEV高青分離株和實(shí)驗(yàn)室保存的另一DEV強(qiáng)毒泰安株的基因組DNA后,對UL2基因進(jìn)行了擴(kuò)增、克隆及序列測定,并與GenBank中已發(fā)表的鴨瘟病毒序列進(jìn)行比較。序列分析結(jié)果顯示,這兩個毒株的UL2基因都與已發(fā)表的DEV強(qiáng)毒序列有相同的特征,而與中國疫苗株VAC株和Clone-03株等弱毒株存在較大的差異,弱毒株的UL2基因都缺失了一個528bp的大片段。這表明該DEV高青分離株具有強(qiáng)毒株的基因型特征,提示弱毒株中UL2基因所發(fā)生的大片段缺失很可能與病毒的毒力減弱直接相關(guān)。之后我們選取鴨瘟病毒相對保守的UL44基因序列,利用Premier5.0軟件設(shè)計合成一對熒光定量PCR引物,并對目的基因片段進(jìn)行擴(kuò)增、克隆,構(gòu)建出鴨瘟病毒目的基因的陽性標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒,成功建立了檢測DEV的SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法。該方法檢測靈敏度可達(dá)2.7×101個拷貝,與常規(guī)PCR相比敏感性提高了100倍;特異性試驗(yàn)顯示,該方法只對DEV模板有陽性擴(kuò)增信號,具有較高的特異性;重復(fù)性試驗(yàn)顯示,5次重復(fù)的Ct值之間的差異在0.6 Ct之內(nèi),證明該方法具有良好的重復(fù)性。上述所建方法對于臨床樣品的初步檢測結(jié)果顯示,其敏感性要優(yōu)于普通PCR,可以成為臨床上一種快速診斷鴨瘟的有效手段。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

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本文編號：2577551