【摘要】：產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)能夠引發(fā)畜禽各種產(chǎn)氣莢膜梭菌病,并且易引起人類食物中毒,氣性壞疽,嚴(yán)重影響人類健康,因此對產(chǎn)氣莢膜梭菌病的診斷尤為重要。各型產(chǎn)氣莢膜梭菌均能產(chǎn)生α毒素,因此α毒素的檢測能夠為診斷產(chǎn)氣莢膜梭菌病提供強有力的證據(jù)。本研究對2015年10月到2016年12月期間采集的山東省3個規(guī)�；脠�30只疑似產(chǎn)氣莢膜梭菌病兔進行診斷。利用臨床癥狀、剖檢結(jié)果、組織病理學(xué)檢查對疑似產(chǎn)氣莢膜梭菌病兔進行初步診斷;運用細菌分離鑒定、DAS-ELISA法和免疫組化法作為主要方法,對疑似產(chǎn)氣莢膜梭菌病兔進行診斷。臨床癥狀觀察和剖檢結(jié)果顯示,疑似自然感染產(chǎn)氣莢膜梭菌病兔的臨床特征和各個器官的病變與產(chǎn)氣莢膜梭菌病變特征相符;組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示,肝細胞、腎小管上皮細胞顆粒變性、空泡變性,小腸、盲腸黏膜上皮細胞壞死脫落,黏膜下層充血。通過細菌分離,分離到疑似產(chǎn)氣莢膜梭菌菌株共計25株,分離率為83.3%,經(jīng)多重PCR鑒定均為A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。以抗產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素單克隆抗體(monoclonal antibody,MAb)為捕獲抗體建立DAS-ELISA方法,優(yōu)化反應(yīng)條件,以α毒素稀釋濃度(用小鼠LD50的倍數(shù)表示)的自然對數(shù)為橫坐標(biāo),OD450nm為縱坐標(biāo),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線用于定量檢測,對建立的DAS-ELISA方法進行性能評價并應(yīng)用于臨床檢測。優(yōu)化后的DAS-ELISA方法批內(nèi)檢測變異系數(shù)均低于10%,批間檢測變異系數(shù)均低于12%,結(jié)果表明該方法具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。運用該方法測定產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素含量的最低檢測限為0.353倍的小鼠LD50,可有效檢測范圍為0.353-90.368倍小鼠LD50;以健康兔作為陰性對照,患產(chǎn)氣莢膜梭菌病的兔群腸內(nèi)容物中α毒素水平顯著高于健康兔群(P㩳0.05);當(dāng)疑似產(chǎn)氣莢膜梭菌病兔腸內(nèi)容物OD450nm值大于0.3578時判斷為陽性,檢測為陽性的病兔有26例,陽性檢出率為86.7%。同時采取疑似產(chǎn)氣莢膜梭菌病兔的回腸、胃、腎臟、肝臟做免疫組化,驗證DAS-ELISA法結(jié)果,以至少有一個器官檢測到α毒素作為陽性判定依據(jù),檢測為陽性的病兔有27例,陽性檢出率為90%。以抗產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素單克隆抗體為基礎(chǔ),利用免疫組化對30只病兔的16種器官中α毒素的分布進行了檢測,在自然感染產(chǎn)氣莢膜梭菌病兔的心臟、脾臟、肺臟、盲腸、結(jié)腸、膀胱、蚓突、延腦等器官中檢測到了α毒素的分布,其中,胃、肝臟、腎臟等組織中α毒素信號較強。綜合上述幾種方法的檢測結(jié)果表明:2015年10月到2016年12月期間檢測的規(guī)�；脠�3起疫情的發(fā)生與兔群感染產(chǎn)氣莢膜梭菌病相關(guān)。本研究為評估兔群感染產(chǎn)氣莢膜梭菌情況提供了重要依據(jù),提高了診斷的準(zhǔn)確性,為今后本地區(qū)該病的診斷和防控提供了理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。
【圖文】：

19/30 例）；肝臟、膽囊腫大（圖3-1C，24/30 例）；脾臟腫大，顏色變?yōu)樯詈稚▓D 3-1E，29/30 例）；膀胱嚴(yán)重膨脹，充滿大量尿液，尿液呈深黃色（圖 3-1A，，27/30 例）。氣管出血（圖 3-1F，12/30 例）。

A:腦（200x）； B:心臟（400x）； C:肝臟（400x）；D: 脾臟（400x）； E:腎臟（400x）； F:盲腸（200x）圖 3-2 部分組織病理切片圖Fig.3-2 Histopathological section of Part organic
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.291

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