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豬繁殖與呼吸綜合征病毒不同毒株RT-PCR鑒別檢測方法的建立及初步應(yīng)用

發(fā)布時間:2019-12-04 03:19
【摘要】:豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的豬的急性或亞急性高度接觸性傳染病,主要侵害妊娠母豬和未斷奶仔豬,具有傳播速度快、死亡率高的特點,嚴(yán)重威脅養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。PRRSV基因易發(fā)生變異,產(chǎn)生多種不同變異毒株,給疾病的防控帶來很大困難。2006年爆發(fā)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征給我國養(yǎng)豬業(yè)造成巨大打擊。目前國內(nèi)流行的毒株均為美洲型,主要為經(jīng)典型毒株和毒力較強的高致病性毒株。由于PRRSV不同毒株感染動物后的臨床表現(xiàn)、危害程度及其疫苗交叉保護(hù)力不盡相同,及時準(zhǔn)確鑒定出當(dāng)前流行毒株對防治豬繁殖與呼吸綜合征具有積極意義。豬繁殖與呼吸綜合征經(jīng)典毒株、高致病性毒株、基因缺失弱毒疫苗株(TJM-F92)的Nsp2基因存在部分差異。高致病性毒株和基因缺失疫苗株分別存在90個和450個不連續(xù)核苷酸缺失。本研究在其缺失位點兩端設(shè)計引物,根據(jù)擴增目的片段大小不同區(qū)分三種不同毒株,建立RT-PCR鑒別檢測方法。通過實驗證明,該方法具有較好的敏感性、特異性和重復(fù)性,對三種毒株的擴增產(chǎn)物大小分別為1 332bp、1 242bp和882bp。使用此RT-PCR檢測方法檢測吉林、黑龍江等地區(qū)68份臨床疑似豬繁殖與呼吸綜合征病料,發(fā)現(xiàn)經(jīng)典毒株檢出率為13.23%,高致病性毒株檢出率為20.58%,基因缺失疫苗TJM-F92株檢出率為8.82%。本研究建立了PRRSV不同毒株RT-PCR鑒別檢測方法,能夠檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒并鑒別其毒株類型,從而區(qū)分疫苗免疫豬和野毒感染豬,以及患病豬所感染的毒株種類,為有效預(yù)防PRRS、評價疫苗免疫效果以及凈化該疫病奠定一定基礎(chǔ)。
【圖文】:

引物篩選,PCR擴增


引物篩選PCR擴增結(jié)果

大腸桿菌,重組質(zhì)粒,PCR擴增


重組質(zhì)粒鑒定PCR擴增結(jié)果
【學(xué)位授予單位】:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:S858.28

【參考文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 侯振中;國內(nèi)外PRRSV美洲型毒株結(jié)構(gòu)基因序列分析及感染豬病理和細(xì)胞免疫變化的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

2 周鐵忠;遼寧省豬繁殖與呼吸綜合征分子流行病學(xué)調(diào)查及免疫防制研究[D];吉林大學(xué);2010年

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本文編號:2569437

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