【摘要】：本研究進(jìn)行了用于防治斷奶仔豬腹瀉的微生態(tài)制劑斷奶安的穩(wěn)定性及擴(kuò)大工藝試驗(yàn)研究,為該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)制定及規(guī)模化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。1.進(jìn)行了發(fā)酵菌種的穩(wěn)定性試驗(yàn)。采用傳統(tǒng)生化方法及26S r DNA分子生物學(xué)方法對(duì)誘導(dǎo)前后的菌種進(jìn)行鑒定,并運(yùn)用直接計(jì)數(shù)法對(duì)誘導(dǎo)后的菌株在一定時(shí)間內(nèi)的生長(zhǎng)曲線、p H變化以及凝聚性進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明該菌株馴化前后形態(tài)、生理生化特性及分子生物學(xué)特性表現(xiàn)一致,沒(méi)有發(fā)生變異;誘導(dǎo)后菌株在72h內(nèi)呈穩(wěn)定增長(zhǎng)趨勢(shì),p H值逐漸降低,凝聚值F1=0.243,表明該制劑發(fā)酵結(jié)束時(shí)懸浮細(xì)胞數(shù)較多,不易沉淀,進(jìn)入胃腸道后不會(huì)因凝聚成團(tuán)而影響其益生功能。2.完成了斷奶安的耐受性試驗(yàn)。將斷奶安置于p H 2-4的模擬人工胃液中3 h,其活菌數(shù)量在不同p H環(huán)境中均大于100%;斷奶安在濃度為0.1-1%的模擬人工腸液中生長(zhǎng)良好,在濃度為0.3%、0.6%、1%的膽鹽環(huán)境中存活率分別達(dá)到100%、90%、77%以上;將斷奶安培養(yǎng)在Na Cl濃度為10-24%的培養(yǎng)基中48小時(shí),其在Na Cl濃度為10-16%的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好,在Na Cl濃度為22%的高滲透壓環(huán)境仍能存活,斷奶安可以耐受58℃10min,64℃5min。試驗(yàn)結(jié)果表明,微生態(tài)制劑斷奶安在規(guī)定的耐受范圍內(nèi)有較高存活率且符合益生菌制劑在腸道發(fā)揮益生功能所需的菌含量,表明該制劑具有用于預(yù)防動(dòng)物疾病的基本條件,同時(shí)也為其以后的臨床應(yīng)用及規(guī)�；a(chǎn)提供了理論依據(jù)。3.采用7cm SDS-PAGE與毛細(xì)管高效液相色譜、Q-exactive質(zhì)譜相結(jié)合的方法進(jìn)行了斷奶安發(fā)酵液分泌蛋白定性檢測(cè)。用Mascot軟件在數(shù)據(jù)庫(kù)Uni Prot knowledgebase(Swiss-Prot/Tr EMBL,www.expasy.org)和Gene Ontology(GO)Database(http://www.geneontology.org/)進(jìn)行檢索,Blast 2GO軟件進(jìn)行蛋白的生物信息學(xué)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),對(duì)照組組中共鑒定到肽段68個(gè),蛋白組47個(gè),斷奶安組共鑒定到肽段241個(gè),蛋白組121個(gè)。原始數(shù)據(jù)中鑒定到有注釋的蛋白共計(jì)109個(gè),其中對(duì)照組特有蛋白11個(gè),斷奶安組特有蛋白63個(gè),兩組共有蛋白35個(gè)。生物信息學(xué)GO注釋及KEGG pathway表明,斷奶安發(fā)酵液較對(duì)照組中不僅蛋白含量較豐富,且參加的代謝通路也較多。同時(shí),生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),發(fā)酵液中普遍存在較高的碳水化合物代謝和能量代謝,還參與影響了少量生物學(xué)通路等,且斷奶安組有唯一具有電子載體活性和轉(zhuǎn)運(yùn)子活性的蛋白質(zhì),可能行使著生物調(diào)控、刺激反應(yīng)和定位進(jìn)程等功能。4.微生態(tài)制劑的擴(kuò)大培養(yǎng)條件優(yōu)化。利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L9(34)的方法,分別對(duì)菌株的搖瓶培養(yǎng)條件及發(fā)酵罐培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。經(jīng)過(guò)搖瓶的培養(yǎng),確定其基本培養(yǎng)條件為:接種量1%,溫度為25℃,p H為6,搖床轉(zhuǎn)速110r/min;在10L發(fā)酵罐中研究裝液量,接種量及轉(zhuǎn)速對(duì)菌株發(fā)酵過(guò)程的影響,綜合考慮發(fā)酵效率以及成本等問(wèn)題,控制恒定發(fā)酵條件為p H為6,25℃,DO值小于5%等條件相同的情況下,優(yōu)化出發(fā)酵罐菌株生長(zhǎng)量最大的生產(chǎn)工藝:轉(zhuǎn)速200r/min,接種量5%,及裝液量4.5 L,發(fā)酵液中活菌數(shù)可達(dá)到2.80×108 cfu/m L。,從種子液開(kāi)始,到發(fā)酵罐的逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)條件的優(yōu)化結(jié)果表明,該制劑具有進(jìn)一步工業(yè)生產(chǎn)的潛力。
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S859.79

【參考文獻(xiàn)】

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1 張連忠;;酵母培養(yǎng)物對(duì)雛雞生長(zhǎng)性能、免疫器官發(fā)育和血清相關(guān)激素的影響[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2011年04期

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本文編號(hào)：2568184