【摘要】：馬立克氏病(MD)是由馬立克氏病病毒(MDV)引起的一種高度傳染的病毒性腫瘤疾病,對養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經濟損失。不同品種(系)雞對馬立克氏病(MD)具有不同的遺傳抗性,遺傳抗性較強的雞可能會長期停留在潛伏感染階段,在經歷一個短暫的晚期溶細胞感染后形成腫瘤,而易感雞體內病毒不斷增殖,未出現(xiàn)腫瘤即早期死亡,造成抗性雞與易感雞腫瘤形成差異的分子調控機制至今并未闡明。近年研究發(fā)現(xiàn)宿主miRNA具有抗病毒免疫應答功能很可能在其中發(fā)揮著關鍵作用。我們前期以自主培育的B21(抗性)和B19(易感)單倍型雞為模型,利用高通量測序技術構建了B21和B19雞在MDV病毒感染三個關鍵階段(5、10和21dpi)法氏囊組織miRNA的差異表達譜,篩選出一些可能與MHC-B單倍型雞MD抗性相關的miRNA。為從宿主miRNA調控角度進一步探索抗性雞與易感雞腫瘤形成差異的分子機制,本實驗在前期差異表達譜的基礎上選擇gga-miR-21-5p和gga-miR-146b-5p為對象進行深入研究。我們首先利用實時熒光定量PCR驗證高通量測序結果,并進一步分析gga-miR-21-5p和gga-miR-146b-5p在其它免疫器官的表達情況,結果發(fā)現(xiàn)gga-miR-21-5p和gga-miR-146b-5p在抗性雞和易感雞感染后的法氏囊和脾臟組織中表達量明顯高于非感染組。進一步利用TargetScan和miRDB兩個靶基因預測軟件預測gga-miR-21-5p和gga-miR-146b-5p的靶基因,取兩個軟件預測交集并結合免疫相關通路分析進行篩選。gga-miR-21-5p選取SATB1、TIAM1和PITX2,gga-mi R-146b-5p選取NOVA1、DOT1L和NFATC2作為候選基因進行驗證。通過雙熒光酶素報告分析,我們發(fā)現(xiàn)gga-miR-21-5p可顯著抑制SATB1 3’-UTR區(qū)的報告基因活性,使其下調33%,表明gga-miR-21-5p與預測靶基因SATB1之間存在相互作用。同時,Western blot分析發(fā)現(xiàn),在轉染MSB-1細胞72小時后,gga-mi R-21-5p過表達顯著抑制SATB1蛋白表達,相反抑制gga-miR-21-5p表達會促進SATB1蛋白表達。為了進一步檢測gga-miR-21-5p對MSB-1細胞增殖和遷移的影響,我們利用CCK-8和trans-well的方法進行檢測,發(fā)現(xiàn)在轉染外源gga-miR-21模擬物和抑制劑24-72小時后MSB-1細胞過表達細胞增殖速度呈顯著下降趨勢。同時,過表達gga-miR-21后,MSB-1細胞遷移能力也顯著下降。本研究表明gga-mi R-21-5p可以靶向調控SATB1基因表達,并且對馬立克氏病腫瘤細胞的增殖與遷移具有一定的抑制作用。
【圖文】：

圖 3-1 pmirGLO 雙熒光素酶表達載體Figure 3-1 Information of pmirGLO Vector3.2.4.2 重組載體的轉化

M NOVA1 DOT1L DOT1L NFATC2 NFATC2圖 3-2 gga-miR-21-5p 靶基因擴增Figure 3-2 The target gene amplification of gga-miR-21-5p
【學位授予單位】：牡丹江師范學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S858.31

【參考文獻】

相關博士學位論文 前1條

1 常爽;非主要組織相容性復合體宿主遺傳變異對馬立克氏病疫苗效力的影響[D];吉林大學;2010年

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本文編號：2561527