發(fā)布時(shí)間：2019-11-12 13:03

【摘要】：地方性鼻內(nèi)腺瘤是一種慢性、進(jìn)行性、接觸性傳染病,潛伏期長,且一旦出現(xiàn)臨床癥狀,無一例外死亡,嚴(yán)重威脅羊的種群安全。目前對(duì)于區(qū)別陽性感染羊只還沒有比較成功的方法。本研究探討羊地方性鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基轉(zhuǎn)移酶和細(xì)胞癌變相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平和啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度,并研究基因甲基化程度對(duì)其轉(zhuǎn)錄水平的影響。運(yùn)用SYBR Green Ⅰ熒光定量RT-PCR和甲基化特異性PCR檢測20份正常鼻內(nèi)腺組織和24份鼻內(nèi)腺瘤組織中抑瘤基因P73、P53、GADD45G、CHFR、THBS1、 MGMT,轉(zhuǎn)錄因子CEBPA,原癌基因KRAS、NRAS、C-myc,甲基轉(zhuǎn)移酶基因DNMT3a、 DNMT3b、DNMT1,以及與細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因EGFR的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平以及所選基因啟動(dòng)子的甲基化程度,并對(duì)甲基轉(zhuǎn)移酶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平對(duì)癌變相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)的影響以及癌變相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化程度對(duì)該基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平的影響進(jìn)行了研究分析,揭示ENTV致瘤后病變部位細(xì)胞癌變相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄與其啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度的關(guān)聯(lián),并篩選出能用于腫瘤診斷的標(biāo)志物候選基因,并為闡明ENTV致瘤的表觀遺傳機(jī)制提供參考。研究結(jié)果如下：1.基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化研究結(jié)果 所選6個(gè)抑瘤基因中僅CHFR、GADD45G和THBS1檢測出甲基化,CHFR基因在鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基化陽性率為58.2%,在正常鼻內(nèi)腺組織中基化陽性率為60%,兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；THBS1基因在鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基化陽性率為79.2%,在正常鼻內(nèi)腺組織中未檢測出甲基化,兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); GADD45G基因在鼻內(nèi)腺瘤組織中完全甲基化率為58.5%,不完全甲基化率為25%,在正常鼻內(nèi)腺組織中未檢測出甲基化,兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在原癌基因中僅C-myc基因檢測出甲基化,C-myc基因在鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基化陽性率為54.2%,在正常鼻內(nèi)腺組織中未檢測出甲基化,兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。轉(zhuǎn)錄因子CEBPA基因在鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基化陽性率為79.2%,在正常鼻內(nèi)腺組織中未檢測出甲基化,兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因EGFR在鼻內(nèi)腺瘤組織中甲基化陽性率為87.5%,在正常鼻內(nèi)腺組織中甲基化陽性率為75%,兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。甲基轉(zhuǎn)移酶基因中僅DNMT1和DNMT3b檢測出甲基化,DNMT1和DNMT3b在鼻內(nèi)腺瘤組織中的甲基化陽性率分別為20.8%、41.7%,在正常鼻內(nèi)腺組織中均未檢測出甲基化,兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO.05)。2.轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平研究結(jié)果 選取DNMT1基因在正常鼻內(nèi)腺組織中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)量作為對(duì)照,抑癌基因中GADD45G、THBS1基因存在異常轉(zhuǎn)錄表達(dá),THBS1基因在20份正常鼻內(nèi)腺組織中相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為0.38±0.25,在19份甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為1.05±0.32,在5份非甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中為1.03±0.21; GADD45G基因在20份正常鼻內(nèi)腺組織中相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為0.47±0.72,在14份完全甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中為2.48±0.82,在6份不完全甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中為1.42±0.33,在4份非甲基化得鼻內(nèi)腺瘤組織中為0.46±0.41。原癌基因中僅C-myc出現(xiàn)異常表達(dá),在20份正常鼻內(nèi)腺組織中C-myc基因相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為-0.42±1.90,在13份甲基化的鼻內(nèi)腺瘤組織中為-1.37±0.58,在11份非甲基化的鼻內(nèi)腺瘤組織中為-0.98±0.21。轉(zhuǎn)錄因子CEBPA基因在20份正常鼻內(nèi)腺組織中相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為0.85±0.24,在19份甲基化的鼻內(nèi)腺瘤組織中為-0.76±0.26,在5份非甲基化的鼻內(nèi)腺瘤組織中為0.79±0.11；腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因EGFR在鼻內(nèi)腺瘤組織和正常鼻內(nèi)腺組織中都未見其表達(dá)。甲基化轉(zhuǎn)移酶基因中僅DNMT3b基因出現(xiàn)異常轉(zhuǎn)錄表達(dá),在20份正常鼻內(nèi)腺組織中DNMT3b基因相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平分別為1.39±0.88,10份甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中DNMT3b為0.22±0.63,14份非甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中為1.41±0.71,兩者間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。20例正常鼻內(nèi)腺組織中DNMT1基因相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平分別為0.00±0.53、5例甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中DNMT1相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平為-0.64±0.56,19例非甲基化鼻內(nèi)腺瘤組織中DNMT1為-0.32±0.61,兩者間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。綜合可知,原癌基因C-myc,轉(zhuǎn)錄因子CEBPA,抑癌基因GADD45G、THBS1和甲基轉(zhuǎn)移酶基因DNMT1和DNMT3b在鼻內(nèi)腺瘤組織中存在異常甲基化。甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3b和原癌基因C-myc mRNA轉(zhuǎn)錄表達(dá)上調(diào)；轉(zhuǎn)錄因子CEBPA轉(zhuǎn)錄表達(dá)上調(diào),但在討論中可知與其他腫瘤研究結(jié)果不同；抑癌基因THBS1轉(zhuǎn)錄表達(dá)下調(diào)；腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因EGFR存在甲基化,但未出現(xiàn)表達(dá)。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,表明鼻內(nèi)腺瘤組織中DNMT3、THBS1、GADD45G和C-myc基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平與相對(duì)應(yīng)基因啟動(dòng)區(qū)的甲基化調(diào)控有一定關(guān)聯(lián)；在甲基轉(zhuǎn)移酶基因中DNMT3b的表達(dá)上調(diào)可能與部分細(xì)胞癌變相關(guān)基因出現(xiàn)過度甲基化修飾有一定關(guān)聯(lián)；腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因EGFR零表達(dá)可能與地方性鼻內(nèi)腺瘤不發(fā)生轉(zhuǎn)移相關(guān)：C-myc、GADD45G和THBS1基因甲基化具有腫瘤特異性,其基因的甲基化修飾與鼻內(nèi)腺瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)。
【圖文】：

３．結(jié)果逡逑３．１對(duì)照姐健康羊檢疫逡逑用傳統(tǒng)ＰＣＲ方法對(duì)健康羊阱ｇ基因進(jìn)行擴(kuò)X�，结果显示为阴性（哇E玻保�，，确辶x先纖《哉兆檠肺錘腥荊牛危裕值慕】笛蟣悄諳僮櫓�。辶x希灣澹卞危哄危沖危村危靛危跺�？邋Ｓ邋９逦１０逦１１逦１：邋Ｕ邋１４逦Ｋ|靛危保跺危保峰邇懾危玻板危玻卞危玻插義匣�，辶x蠒

本文編號(hào)：2559785