【摘要】：豬圓環(huán)病毒病(porcine circovirus diseases and porcine circovirus-associated diseases,PCVD/PCVAD)是由豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)引起的、影響世界養(yǎng)豬業(yè)的重要病毒性傳染病之一。目前,沒有治療該病的特效藥物。一方面是由于該病毒生長緩慢,復(fù)制周期較長,且體外培養(yǎng)的病毒滴度較低;另一方面是由于PCV2病毒的基因組小、編碼的蛋白數(shù)量較少,且病毒致病機(jī)制不太明晰,不利于靶向抗病毒藥物的研發(fā)。因此,研究PCV2病毒與宿主的相互作用、PCV2疫苗的制備,對于進(jìn)一步了解該病毒的致病機(jī)理、設(shè)法阻斷病毒的復(fù)制、減少病毒的傳播具有非常重要的理論意義和實際應(yīng)用價值。3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGCR)是甲醛戊酸途徑中膽固醇生物合成的限速酶,且參與了多種病毒的感染過程。本實驗室的前期研究表明,HMGCR與PCV2感染呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,抑制HMGCR能促進(jìn)PCV2的感染。蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)是細(xì)胞內(nèi)磷酸化通路的關(guān)鍵磷酸化酶,也參與多種病毒的感染過程,但PKC是否影響PCV2的感染過程尚未見報道。本研究用實時定量PCR和Western blot等技術(shù)分析了PKC和HMGCR在體外對PCV2感染的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),PKC分別磷酸化JNK1/2和HMGCR,從而激活JNK1/2、抑制HMGCR,最終促進(jìn)PCV2增殖;HMGCR通過下調(diào)JNK1/2磷酸化水平達(dá)到抑制PCV2增殖的目的;PKC和HMGCR參與了PCV2感染的不同階段,其中HMGCR在感染的早期階段抑制病毒的感染,而PKC在感染后期促進(jìn)PCV2的感染。另外,激光共聚焦實驗初步表明,HMGCR在PCV2感染早期與病毒Cap蛋白相互作用,PKC在感染后期與病毒Rep蛋白相互作用。目前,注射疫苗是預(yù)防PCV2感染的主要措施,但大部分市售的PCV2疫苗的免疫效果仍有待提高,主要是由于制備疫苗的病毒滴度較低。本研究用D-氨基葡萄糖處理前期構(gòu)建的PCV2敏感細(xì)胞系PK-15-IL-2,同時優(yōu)化了PCV2的微載體培養(yǎng)系統(tǒng),獲得了高滴度的PCV2病毒,并比較了該病毒與市售PCV2疫苗的免疫效果。結(jié)果表明,本研究優(yōu)化的微載體培養(yǎng)方法可以提高PCV2的產(chǎn)量;制備的PCV2滅活病毒具有較高的免疫保護(hù)效力,其免疫效果優(yōu)于多種國產(chǎn)滅活疫苗。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.28

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2557956