發(fā)布時間：2019-10-28 23:29

【摘要】：由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)所引發(fā)的豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS),是一種主要表現(xiàn)為懷孕母豬的食欲不振、持續(xù)發(fā)熱及流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎和弱仔等繁殖性能障礙以及哺乳仔豬和育成豬的高度死亡率和呼吸系統(tǒng)疾病等特征的高度接觸性傳染病。由于對該P(yáng)RRSV的致病機(jī)制、持續(xù)感染機(jī)制以及免疫機(jī)理尚不明確,導(dǎo)致該病疫苗的研發(fā)與使用困難重重,難以控制。而且一旦養(yǎng)殖場發(fā)生PRRS,凈化豬群所花費(fèi)的時間和費(fèi)用亦會很大,所以豬繁殖與呼吸綜合征至今仍是威脅各國豬養(yǎng)殖的重要疫病之一。Claudin-4(CLDN4)蛋白作為緊密連接蛋白家族中的主要成員之一,主要分布于腦、腎、肺、小腸和結(jié)腸的組織中。在多種病毒感染過程中起著重要作用。在發(fā)生急性肺損傷時,CLDN4會貫穿肺泡上皮并且其表達(dá)量亦會上升。而PRRSV對豬體的呼吸系統(tǒng),尤其是肺臟亦會造成嚴(yán)重的損傷,我們前期的研究也發(fā)現(xiàn)PRRSV感染Marc-145細(xì)胞后會使CLDN4蛋白表達(dá)升高,本研究將進(jìn)一步研究CLDN4在PRRSV感染過程中的作用。從RNA水平檢測CLDN4對PRRSV感染的影響:PRRSV感染Marc-145細(xì)胞后不同時間用熒光定量檢測CLDN4的mRNA的表達(dá)水平,結(jié)果表明PRRSV感染Marc-145細(xì)胞后CLDN4的mRNA的表達(dá)水平在前期和中期變化不明顯但是在病毒感染后期顯著增加。為進(jìn)一步研究CLDN4在PRRSV感染Marc-145細(xì)胞的作用,構(gòu)建CLDN4真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染Marc-145細(xì)胞,使其在Marc-145細(xì)胞中過表達(dá),熒光定量檢測轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-CLDN4、轉(zhuǎn)染pEGFP-N1空白質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染的Marc-145細(xì)胞對PRRSV感染力的影響。結(jié)果表明轉(zhuǎn)染pEGFP-N1空質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-CLDN4重組質(zhì)粒后,N蛋白的mRNA表達(dá)水平均下調(diào),但是后者較前者N蛋白的m RNA表達(dá)水平要低17倍,顯著差異。從蛋白水平檢測CLDN4對PRRSV感染Marc-145細(xì)胞的影響:克隆CLDN4基因連接到原核表達(dá)載體中,進(jìn)行CLDN4蛋白的表達(dá)純化,純化后的蛋白免疫小鼠制備了CLDN4的多抗和單克隆抗體。IFA和Western Blot實(shí)驗(yàn)證明了抗CLDN4的單克隆抗體能夠與Marc-145細(xì)胞上的CLDN4結(jié)合。用熒光定量檢測制備的多抗及單抗對PRRSV感染Marc-145細(xì)胞的作用,結(jié)果表明,血清和單抗均能增強(qiáng)PRRSV的感染能力。通過以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,PRRSV感染后能使CLDN4的表達(dá)量在感染后期明顯升高,抗CLDN4的血清和抗體對PRRSV的復(fù)制有一定的增強(qiáng)作用。
【圖文】：

圖 1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分類地位Fig. 1 Demarcation of viruses and the station of PRRSV(Cavanagh, 1997)1.2.2 形態(tài)結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)PRRSV 為一種單股正鏈的 RNA 病毒，有囊膜，其純化的病毒粒子在電子顯呈現(xiàn)球形，直徑約 45-80nm，有 25-35nm 的呈二十面體對稱的立方形核心（核衣核衣殼具有電子致密性，表面有細(xì)小的突起，其外包被有一脂質(zhì)雙層膜(Benfiel殷震，，1997)（如圖 2 所示）。

圖 1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分類地位Fig. 1 Demarcation of viruses and the station of PRRSV(Cavanagh, 1997)1.2.2 形態(tài)結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)PRRSV 為一種單股正鏈的 RNA 病毒，有囊膜，其純化的病毒粒子在電子顯微呈現(xiàn)球形，直徑約 45-80nm，有 25-35nm 的呈二十面體對稱的立方形核心（核衣殼核衣殼具有電子致密性，表面有細(xì)小的突起，其外包被有一脂質(zhì)雙層膜(Benfield,殷震，1997)（如圖 2 所示）。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

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1 汪曉飛;CLDN4在PRRSV感染Marc-145細(xì)胞中的作用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

本文編號：2553266