【摘要】：布魯氏菌(Brucella)是一種強(qiáng)致病性人獸共染致病菌。布魯氏菌侵染的主要目標(biāo)是專業(yè)和非專業(yè)的巨噬細(xì)胞,于其內(nèi)生存和繁殖。致病菌與宿主之間互作的分子機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜,也是布魯氏菌病的病因。因此,對(duì)布魯氏菌的胞內(nèi)生存以及與宿主之間的分子互作機(jī)制的研究是有重要意義的。以泛素為主導(dǎo)的泛素-蛋白酶途徑參與了胞內(nèi)多種生理生化反應(yīng)的調(diào)節(jié),本研究對(duì)小鼠E3泛素連接酶Nrdp1和SOCS-1在布魯氏菌侵染中的影響作了初步探討。目的:本實(shí)驗(yàn)以布魯氏菌宿主細(xì)胞小鼠巨噬細(xì)胞E3泛素連接酶Nrdp1和SOCS-1基因?yàn)檠芯繉?duì)象,分別構(gòu)建干擾和過表達(dá)Nrdp1和SOCS-1基因的小鼠巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染模型;羊種布魯氏菌16M侵染小鼠巨噬細(xì)胞,探究其對(duì)布魯氏菌胞內(nèi)生存和布魯氏菌誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡的影響。方法:(1)羊種布魯氏菌16M侵染小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測在侵染發(fā)生0h、2h、4h、8h、12h和24h時(shí)Nrdp1和SOCS-1基因相對(duì)表達(dá)量的變化。(2)在小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7中,構(gòu)建兩個(gè)基因的干擾模型PLL3.7-Nrdp1、PLL3.7-SOCS-1和過表達(dá)模型Plex-Nrdp1、Plex-SOCS-1。羊種布魯氏菌16M侵染干擾和過表達(dá)Nrdp1和SOCS-1基因的小鼠巨噬細(xì)胞,分別進(jìn)行CFU計(jì)數(shù),細(xì)胞凋亡率流式細(xì)胞儀分析,以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測凋亡相關(guān)因子Bax和Bcl-2、腫瘤壞死因子TNF-α的相對(duì)表達(dá)量變化。(3)羊種布魯氏菌16M侵染巨噬細(xì)胞模型,在侵染發(fā)生的不同時(shí)間對(duì)JAK1、JAK2、JAK3、STAT1、STAT2、STAT3六個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測,觀察其表達(dá)量變化。結(jié)果:(1)隨著侵染時(shí)間的變化,Nrdp1和SOCS-1的表達(dá)都分別出現(xiàn)了兩次有規(guī)律的變化。布魯氏菌進(jìn)入細(xì)胞之后,這兩個(gè)基因的表達(dá)量迅速上升,兩小時(shí)后增加停止,開始下降;4h后達(dá)到最低,而后上升;8h時(shí)上升停止,開始下降,一直到24h時(shí),都是表達(dá)下調(diào)的。2h和8h左右時(shí),表達(dá)量是超出正常水平的。每個(gè)基因在不同侵染時(shí)間的各組中差異性顯著(P0.05)。(2)分別構(gòu)建Nrdp1和SOCS-1基因的兩個(gè)干擾模型PLL3.7-N1、PLL3.7-N2和PLL3.7-S1、PLL3.7-S2,干擾效果分別為:66%、25%和54%、8%,選取干擾效果最好的PLL3.7-N1和PLL3.7-S1干擾模型進(jìn)行侵染實(shí)驗(yàn);過表達(dá)模型Plex-Nrdp1和Plex-SOCS-1兩個(gè)基因的表達(dá)量分別升高了228%和332%。CFU實(shí)驗(yàn)顯示,Plex-SOCS-1和Plex-Nrdp1組log CFU值顯著低于對(duì)照組,PLL3.7-S1和PLL3.7-N1組差異不顯著,各組實(shí)驗(yàn)的log CFU值隨侵染時(shí)間都是升高的。Plex-SOCS-1組Bax和Bcl-2表達(dá)量顯著升高,Bax/Bcl-2比值差異不顯著;PLL3.7-S1組Bax表達(dá)量顯著降低,Bcl-2表達(dá)量差異不顯著,Bax/Bcl-2比值差異顯著降低;Plex-Nrdp1組Bax和Bcl-2表達(dá)量顯著升高,Bax/Bcl-2比值差異顯著升高;PLL3.7-N1組Bax表達(dá)量顯著降低,Bcl-2表達(dá)量差異不顯著,Bax/Bcl-2比值差異顯著降低;各組實(shí)驗(yàn)的Bax和Bcl-2表達(dá)量都是先升高(2-8h)后降低(8-24h)的趨勢,Bax/Bcl-2比值都是先降低(2-8h)后升高(8-24h)的趨勢。Plex-SOCS-1組TNF-α表達(dá)量顯著升高,PLL3.7-S1組顯著降低;Plex-Nrdp1與PLL3.7-N1兩組的TNF-α表達(dá)量與對(duì)照組相比差異不顯著;每組實(shí)驗(yàn)中,TNF-α的表達(dá)量隨侵染時(shí)間都是升高的。細(xì)胞凋亡率流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,Plex-SOCS-1組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比顯著升高,PLL3.7-S1組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比顯著降低;Plex-Nrdp1組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比顯著升高,PLL3.7-N1組差異不顯著;隨著的侵染時(shí)間的變化,每組細(xì)胞凋亡率都是升高的。(3)Plex-SOCS-1組細(xì)胞的JAK1、JAK2、STAT1、STAT2、STAT3表達(dá)量與對(duì)照組相比顯著降低,JAK3表達(dá)量差異不顯著;PLL3.7-S1組細(xì)胞的JAK1、JAK2、STAT1、STAT2、STAT3表達(dá)量與對(duì)照組相比顯著升高,JAK3表達(dá)量差異不顯著;Plex-Nrdp1組細(xì)胞的JAK1、JAK2、STAT1、STAT2、STAT3表達(dá)量與對(duì)照組相比顯著降低,JAK3表達(dá)量差異不顯著;PLL3.7-N1組細(xì)胞JAK1、JAK2、JAK3、STAT1、STAT2、STAT3六個(gè)基因的表達(dá)量與對(duì)照組相比均差異不顯著。結(jié)果表明,(1)在布魯氏菌侵染過程中,小鼠基因Nrdp1和SOCS-1對(duì)布魯氏菌的胞內(nèi)生存有一定的抑制作用;(2)在布魯氏菌侵染過程中,Nrdp1和SOCS-1誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡;(3)在布魯氏菌侵染過程中,Nrdp1和SOCS-1基因?qū)AK/STAT信號(hào)通路有負(fù)向調(diào)控作用。綜上所述,小鼠E3泛素連接酶Nrdp1和SOCS-1在布魯氏菌侵染過程中對(duì)于布魯氏菌胞內(nèi)生存以及布魯氏菌誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有重要作用。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S855.12

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 梁艷冰;唐皓;陳志斌;李振宇;徐嘉;袁運(yùn)生;馬中富;;全身性炎癥反應(yīng)綜合征患者外周血單個(gè)核細(xì)胞SOCS-1與SOCS-3表達(dá)的研究[A];2008年廣東省中醫(yī)熱病、急癥、中西醫(yī)結(jié)合急救、危重病、災(zāi)害醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議學(xué)術(shù)論文集[C];2008年

2 唐乙;宋少華;劉芳;周紹武;王海梁;林峰;丁國善;王全興;曹雪濤;;SOCS-1抑制TLR-4表達(dá)減輕肝臟缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)研究[A];節(jié)能環(huán)保 和諧發(fā)展——2007中國科協(xié)年會(huì)論文集（二）[C];2007年

3 陳亮;馬中富;;心源性猝死患者心肌SOCS-1和SOCS-3表達(dá)的機(jī)制研究[A];2009年全國危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 車召堂;E3泛素連接酶Nrdp1和SOCS-1對(duì)布魯氏菌胞內(nèi)生存以及布魯氏菌所引起的細(xì)胞凋亡的影響[D];石河子大學(xué);2015年

2 徐佳;RASSF1A基因和SOCS-1基因在骨髓增生異常綜合征患者中異常甲基化的研究[D];山東大學(xué);2013年

3 牛蘊(yùn)夷;SOCS-1對(duì)TNF-α誘導(dǎo)人近端腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

4 盧菲;5-氮雜-2'-脫氧胞苷、丙戊酸鈉對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株RASSF1A、SOCS-1基因表達(dá)的影響[D];山東大學(xué);2010年

5 劉志峰;心臟性猝死者心肌SOCS-1和C-JUN的表達(dá)及意義[D];青島大學(xué);2012年

6 陳志鴻;小兒腎母細(xì)胞瘤中SOCS-1和SOCS-3的表達(dá)及其臨床意義[D];山東大學(xué);2011年

7 盧聰聰;雄黃誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞socs-1基因去甲基化作用的研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：2549812