發(fā)布時(shí)間：2019-09-26 14:03

【摘要】：本研究以湖羊?yàn)檠芯繉?duì)象,利用高通量測序技術(shù)篩選湖羊大花、中花、小花不同花紋羔皮毛囊中的差異表達(dá)miRNA,并對(duì)湖羊大花、中花、小花羔羊皮膚組織進(jìn)行組織學(xué)分析；采集6組湖羊全同胞個(gè)體(每組大花、中花、小花各一只)的背側(cè)部皮膚組織及毛囊,利用組織學(xué)方法和顯微觀察法研究湖羊羔皮毛囊的組織學(xué)特性,結(jié)合熒光定量PCR技術(shù),檢測差異miRNA在不同個(gè)體表達(dá)量與毛囊各指標(biāo)的相關(guān)性,篩選出用于后續(xù)功能驗(yàn)證的重要miRNA,為進(jìn)一步探究湖羊羔皮不同花紋的形成提供理論基礎(chǔ)。本研究主要結(jié)果如下：1、通過高通量小RNA測序技術(shù)篩選出36個(gè)顯著差異表達(dá)miRNA,其中小花與中花之間顯著差異表達(dá)的miRNA有20個(gè),中花與大花間有14個(gè),小花與大花間有13個(gè)。在顯著差異表達(dá)的miRNA中,包括了29個(gè)新預(yù)測的miRNA,7個(gè)已知的miRNA。對(duì)這些表達(dá)差異顯著的miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測,小花與大花間差異miRNA共預(yù)測到1008個(gè)靶基因,小花與中花間差異miRNA預(yù)測到4196個(gè)靶基因,中花與大花間差異miRNA預(yù)測到2062個(gè)靶基因,部分靶基因參與細(xì)胞增殖分化、新陳代謝、發(fā)育、細(xì)胞黏附、離子轉(zhuǎn)運(yùn)等生物學(xué)過程。進(jìn)一步篩得miRNA-143、miRNA-10a、let-7c, miRNA-199a-3p、let-7i五個(gè)已知miRNA和W_004080189.1_7961、NW_004080184.1_6535、NW_004080184.1_6326、 NW_004080165.1_8572,NW_004080166.1_9139、NW_004080181.1_3961、NW_040801/4.1_/26、 NW_004080166.1_10417、NW_004080190.1_13733九個(gè)新的miRNA共14個(gè)miRNA可作為與湖羊毛囊發(fā)育相關(guān)的重要候選miRNA。2、在14個(gè)候選miRNA中,miRNA-143在大小花間表達(dá)差異顯著(P0.05), let-7i與NW_004080190.1 13733在大中花間差異顯著(P0.05), miRNA-10a、 NW_004080184.1_6326、NW_004080181.1_3961在中小花間差異顯著(P0.05),NW_004080165.1_8572在大中花、中小花間均顯著差異；其余miRNA表達(dá)差異不顯著(P0.05)。miRNA-143相對(duì)表達(dá)量與大花次級(jí)毛囊數(shù)呈極顯著負(fù)相關(guān)(P0.01),與小花次級(jí)毛囊數(shù)呈極顯著正相關(guān)(P0.05)；miRNA-10a的相對(duì)表達(dá)量與大花次級(jí)毛囊直徑極顯著正相關(guān)(P0.01),與小花次級(jí)毛囊直徑顯著負(fù)相關(guān)(P0.05); let-7i的相對(duì)表達(dá)量與大花初級(jí)毛囊直徑顯著正相關(guān)(P0.05),與中花初級(jí)毛囊直徑極顯著負(fù)相關(guān)(P0.01), NW_004080184.1_6326, NW_004080165.1_8572、NW_004080181.1_3961以及NW_004080190.1_13733等在大、中、小花組的表達(dá)量也分別與大花次級(jí)毛囊直徑、小花次級(jí)毛囊數(shù)、中花次級(jí)毛囊直徑等指標(biāo)存在相關(guān)性。其余miRNA雖然與毛囊相關(guān)指標(biāo)也存在相關(guān)性,但鑒于其在大中小花組表達(dá)差異不顯著,可將其排除在候選miRNA的選擇范圍之外。初步推測miRNA-143、miRNA-10a、let-7i、NW_004080184.1_6326、 NW_004080165.1_8572、NW_004080181.1_3961以及NW_004080190.1_13733七個(gè)miRNA可作為對(duì)湖羊羔皮毛囊發(fā)育具有重要影響的候選miRNA,在后續(xù)試驗(yàn)中進(jìn)一步驗(yàn)證。
【圖文】：

其中一條鏈被稱為過客鏈（ｐａｓｓｅｎｇｅｒｓｔｒａｎｄ），由于缺乏蛋白質(zhì)的保護(hù)而解，而另一成熟ｍｉ民ＮＡ鏈被稱為引導(dǎo)鏈（ｇｕｉｄｅ邋ｓｔｒａｎｄ），進(jìn)入ＲＮＡ誘導(dǎo)沉默復(fù)ＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ邋Ｃｏｍｐｌｅｘ，邋ＲＩＳＣ）中（如圖邋１－１）邋口｜］，，并與邋Ａｇｏ邋家族的蛋白質(zhì)結(jié)過與勒！基因的３＇邋－ＵＴＲ區(qū)互補(bǔ)配對(duì)，對(duì)靴基因ｍＲＮＡ進(jìn)行切割或者翻譯抑制。逡逑ＭｉｃｒｏＲＮＡ邋Ｂｉｏｓｙｎ化ｅｓｉｓ逡逑

然后經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄得到雙鏈ｃＤＮＡ，再對(duì)雙鏈ｃＤＮＡ進(jìn)行高通量測序分析。若所測物種己逡逑完成基因組測序，則可將已知基因組ＤＮＡ序列數(shù)據(jù)與ＲＮＡ－ｓｅｑ結(jié)果進(jìn)行比對(duì)；若所逡逑測物種沒有參考基因組，則需要進(jìn)行ｄｅ邋ｎｏｖｏ轉(zhuǎn)錄組測序研究。具體測序原理見圖１－２［５６３。逡逑ｍＲＭＡ逡逑_╁巍觶斃複0—R[１曬凹媂
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S826

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本文編號(hào)：2542194