【摘要】：將克隆的雞α干擾素(ChIFNα)基因亞克隆至酵母表達(dá)載體pPICZα-A中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pPIC-ChIFNα,線性化后電轉(zhuǎn)化整合到畢赤酵母菌株X-33基因組中,得到陽性菌株。經(jīng)1%甲醇連續(xù)誘導(dǎo)4 d,SDS-PAGE檢測結(jié)果表明雞α干擾素在酵母中獲得了分泌型表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物分子質(zhì)量約為18 ku。細(xì)胞病變抑制法檢測其效價(jià)為1×10~(7.69)U/mL;在雞胚中能有效抑制禽流感病毒H9N2的增殖。針對Ⅰ群4型禽腺病毒YBAV-4株強(qiáng)毒的動(dòng)物攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果顯示,表達(dá)的蛋白具有較好的抗病毒活性。
【圖文】：

010-110-210-310-410-510-610-710-8表達(dá)上清處理組Treatedgroupbyexpressionproduct感染雞胚Infectedchickenembryo53110000未感染雞胚Normalchickenembryo02445555對照組Controlgroup感染雞胚Infectedchickenembryo55555554未感染雞胚Normalchickenembryo0000000110-9053210-100514不同稀釋倍數(shù)病毒接胚后的感染情況InfectionstatisticsofchickenembryoinoculatedbydifferentdilutionofH9N2virus組別Groups雞胚Chickenembryo圖1重組酵母菌的鑒定結(jié)果Fig.1IdentificationofrecombinantX-33byPCRM：DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1～3：重組菌株；4：未重組菌M：DL2000DNAMarker；1—3：PositiverecombinantX-33；4：Unre-combinantX-33M12342000bp1000bp750bp500bp250bp100bp圖2不同重組酵母菌株的表達(dá)Fig.2ProductofchickenalphainterferonofX33-pPIC-ChIFNαM：蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1～2：分別為陽性菌株1、2M：ProteinMarker；1—2：Strainof1，2，respectivelyM12116.0ku66.2ku45.0ku35.0ku25.0ku18.4ku14.4ku2.2重組酵母菌株的誘導(dǎo)表達(dá)分別取陽性菌株的誘導(dǎo)表達(dá)上清，經(jīng)10倍濃縮，進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測。結(jié)果可見，陽性菌株經(jīng)誘導(dǎo)的上清中可見雞α干擾素蛋白表達(dá)，大小約為18ku（見圖2）。2.3細(xì)胞病變抑制法檢測表達(dá)蛋白的活性采用細(xì)胞病變抑制法，在CEF細(xì)胞上檢測酵母表達(dá)雞α干擾素蛋白對于水泡性口炎病毒（VSV）的抑制效果。表達(dá)產(chǎn)物與CEF細(xì)胞共孵育24h后，用100TCID50的VSV攻毒。Reed-Muench法計(jì)算能抑制50％細(xì)胞病變的干擾素最高稀釋度即雞α干擾素效價(jià)為1×107.69/mL。2.4雞胚上抑制禽流感病?

chickenembryo55555554未感染雞胚Normalchickenembryo0000000110-9053210-100514不同稀釋倍數(shù)病毒接胚后的感染情況InfectionstatisticsofchickenembryoinoculatedbydifferentdilutionofH9N2virus組別Groups雞胚Chickenembryo圖1重組酵母菌的鑒定結(jié)果Fig.1IdentificationofrecombinantX-33byPCRM：DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1～3：重組菌株；4：未重組菌M：DL2000DNAMarker；1—3：PositiverecombinantX-33；4：Unre-combinantX-33M12342000bp1000bp750bp500bp250bp100bp圖2不同重組酵母菌株的表達(dá)Fig.2ProductofchickenalphainterferonofX33-pPIC-ChIFNαM：蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1～2：分別為陽性菌株1、2M：ProteinMarker；1—2：Strainof1，2，，respectivelyM12116.0ku66.2ku45.0ku35.0ku25.0ku18.4ku14.4ku2.2重組酵母菌株的誘導(dǎo)表達(dá)分別取陽性菌株的誘導(dǎo)表達(dá)上清，經(jīng)10倍濃縮，進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測。結(jié)果可見，陽性菌株經(jīng)誘導(dǎo)的上清中可見雞α干擾素蛋白表達(dá)，大小約為18ku（見圖2）。2.3細(xì)胞病變抑制法檢測表達(dá)蛋白的活性采用細(xì)胞病變抑制法，在CEF細(xì)胞上檢測酵母表達(dá)雞α干擾素蛋白對于水泡性口炎病毒（VSV）的抑制效果。表達(dá)產(chǎn)物與CEF細(xì)胞共孵育24h后，用100TCID50的VSV攻毒。Reed-Muench法計(jì)算能抑制50％細(xì)胞病變的干擾素最高稀釋度即雞α干擾素效價(jià)為1×107.69/mL。2.4雞胚上抑制禽流感病毒增殖的活性將表達(dá)上清分別與10-1～10-9稀釋度的H9N2亞型禽流感病毒孵育，接入SPF雞胚檢測感染情況。結(jié)果顯示，表達(dá)上清處理組的雞胚EID50為1×10-2.46，對照組的EID50為1×10-9.16，中和指數(shù)為1×106.7（見表1）。2.5動(dòng)
【作者單位】： 青島易邦生物工程有限公司;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所;
【分類號(hào)】：S852.2

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本文編號(hào)：2540882