【摘要】：將克隆的雞α干擾素(ChIFNα)基因亞克隆至酵母表達載體pPICZα-A中,構建重組質粒pPIC-ChIFNα,線性化后電轉化整合到畢赤酵母菌株X-33基因組中,得到陽性菌株。經(jīng)1%甲醇連續(xù)誘導4 d,SDS-PAGE檢測結果表明雞α干擾素在酵母中獲得了分泌型表達,表達產(chǎn)物分子質量約為18 ku。細胞病變抑制法檢測其效價為1×10~(7.69)U/mL;在雞胚中能有效抑制禽流感病毒H9N2的增殖。針對Ⅰ群4型禽腺病毒YBAV-4株強毒的動物攻毒保護試驗結果顯示,表達的蛋白具有較好的抗病毒活性。
【圖文】：

010-110-210-310-410-510-610-710-8表達上清處理組Treatedgroupbyexpressionproduct感染雞胚Infectedchickenembryo53110000未感染雞胚Normalchickenembryo02445555對照組Controlgroup感染雞胚Infectedchickenembryo55555554未感染雞胚Normalchickenembryo0000000110-9053210-100514不同稀釋倍數(shù)病毒接胚后的感染情況InfectionstatisticsofchickenembryoinoculatedbydifferentdilutionofH9N2virus組別Groups雞胚Chickenembryo圖1重組酵母菌的鑒定結果Fig.1IdentificationofrecombinantX-33byPCRM：DNA分子質量標準；1～3：重組菌株；4：未重組菌M：DL2000DNAMarker；1—3：PositiverecombinantX-33；4：Unre-combinantX-33M12342000bp1000bp750bp500bp250bp100bp圖2不同重組酵母菌株的表達Fig.2ProductofchickenalphainterferonofX33-pPIC-ChIFNαM：蛋白質分子質量標準；1～2：分別為陽性菌株1、2M：ProteinMarker；1—2：Strainof1，2，respectivelyM12116.0ku66.2ku45.0ku35.0ku25.0ku18.4ku14.4ku2.2重組酵母菌株的誘導表達分別取陽性菌株的誘導表達上清，經(jīng)10倍濃縮，進行SDS-PAGE電泳檢測。結果可見，陽性菌株經(jīng)誘導的上清中可見雞α干擾素蛋白表達，大小約為18ku（見圖2）。2.3細胞病變抑制法檢測表達蛋白的活性采用細胞病變抑制法，在CEF細胞上檢測酵母表達雞α干擾素蛋白對于水泡性口炎病毒（VSV）的抑制效果。表達產(chǎn)物與CEF細胞共孵育24h后，用100TCID50的VSV攻毒。Reed-Muench法計算能抑制50％細胞病變的干擾素最高稀釋度即雞α干擾素效價為1×107.69/mL。2.4雞胚上抑制禽流感病?

chickenembryo55555554未感染雞胚Normalchickenembryo0000000110-9053210-100514不同稀釋倍數(shù)病毒接胚后的感染情況InfectionstatisticsofchickenembryoinoculatedbydifferentdilutionofH9N2virus組別Groups雞胚Chickenembryo圖1重組酵母菌的鑒定結果Fig.1IdentificationofrecombinantX-33byPCRM：DNA分子質量標準；1～3：重組菌株；4：未重組菌M：DL2000DNAMarker；1—3：PositiverecombinantX-33；4：Unre-combinantX-33M12342000bp1000bp750bp500bp250bp100bp圖2不同重組酵母菌株的表達Fig.2ProductofchickenalphainterferonofX33-pPIC-ChIFNαM：蛋白質分子質量標準；1～2：分別為陽性菌株1、2M：ProteinMarker；1—2：Strainof1，2，，respectivelyM12116.0ku66.2ku45.0ku35.0ku25.0ku18.4ku14.4ku2.2重組酵母菌株的誘導表達分別取陽性菌株的誘導表達上清，經(jīng)10倍濃縮，進行SDS-PAGE電泳檢測。結果可見，陽性菌株經(jīng)誘導的上清中可見雞α干擾素蛋白表達，大小約為18ku（見圖2）。2.3細胞病變抑制法檢測表達蛋白的活性采用細胞病變抑制法，在CEF細胞上檢測酵母表達雞α干擾素蛋白對于水泡性口炎病毒（VSV）的抑制效果。表達產(chǎn)物與CEF細胞共孵育24h后，用100TCID50的VSV攻毒。Reed-Muench法計算能抑制50％細胞病變的干擾素最高稀釋度即雞α干擾素效價為1×107.69/mL。2.4雞胚上抑制禽流感病毒增殖的活性將表達上清分別與10-1～10-9稀釋度的H9N2亞型禽流感病毒孵育，接入SPF雞胚檢測感染情況。結果顯示，表達上清處理組的雞胚EID50為1×10-2.46，對照組的EID50為1×10-9.16，中和指數(shù)為1×106.7（見表1）。2.5動
【作者單位】： 青島易邦生物工程有限公司;中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所;
【分類號】：S852.2

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本文編號：2540882